淡黃花百合離體快繁技術研究

李 黛

(遵義師范學院生命科學學院，貴州遵義563002)

淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)為百合科百合屬多年生球根花卉，是我國衛生部審批通過的首批藥食兩用植物［1］。目前，淡黃花百合的繁殖一般采用分球繁殖法，該法繁殖系數低，繁殖速度較慢，每株百合一年僅能得到1～3個子球，且需要培育2～3年才能達到開花年齡，因此生產成本高。在生產中也可以采用鱗片扦插法進行繁殖，但扦插條件較難控制，若濕度小成活率較低，濕度過大又易腐爛，并且長期扦插繁殖極易導致病毒積累，嚴重影響百合的生長和品質［2］。筆者曾經也進行過鱗片扦插繁殖試驗，增殖倍數也不高［3］。組織培養技術則可以解決以上問題，但目前有關淡黃花百合組織培養快繁技術的研究多以鱗片為外植體［4－9］，以珠芽為外植體的研究較少，張文娥等［10］用珠芽繁殖取得了較好的效果。筆者用正交試驗的方法探討了植物激素和蔗糖濃度對珠芽誘導形成的不定芽增殖培養的影響，旨在篩選出其不定芽增殖培養的最佳培養基。

1 材料與方法

1．1 材料 以貴州務川野生淡黃花百合的珠芽為試材。野生淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)采自貴州務川縣山坡疏林地，種植于遵義師范學院生命科學學院苗圃內，于

2014年10月從生長健壯的淡黃花百合植株上剝取珠芽，流水沖洗30 min，于超凈工作臺上用75%乙醇消毒30 s后，再用0．1%的氯化汞消毒15 min，無菌水清洗5次以上，剝去外層鱗片后接種到1/2MS+0．1 mg/L IBA培養基上培養60 d，

轉接到MS+1．0 mg/L 6-BA+0．1 mg/L NAA培養基上培養至苗高2 cm左右備用。培養基pH 5．8，培養溫度25℃左右，光照時間12 h/d，光強1 200 lx。

1．2 方法 采用正交試驗篩選不定芽增殖的最佳培養基，

研究激素和蔗糖濃度對淡黃花百合珠芽誘導形成不定芽增殖的影響。所用基本培養基均為MS培養基，正交試驗采用L9(34)正交試驗表，6-BA、NAA、KT、蔗糖濃度4因素3水平試驗設計見表1。

表1 L 9(34)正交試驗

將上述珠芽誘導形成的不定芽接種到上述9組培養基中，每瓶1株，接10瓶，重復3次，培養60 d后統計不定芽的數量和生長情況，并進行方差分析。芽增殖正交試驗的培養條件與珠芽誘導不定芽的培養條件相同。

2 結果與分析

將珠芽誘導形成的不定芽接種到上述正交試驗的9組培養基上，60 d后進行觀察，絕大部分不定芽基部形成了大量的愈傷組織，部分不定芽產生了數量不多但較為粗壯的不定根。第1、5、7組培養基中不定芽的生長情況見圖1～3。

2．1 激素濃度對芽增殖的影響 由表2可知，在試驗濃度范圍內，6-BA和NAA的濃度對不定芽增殖倍數的影響:隨著濃度的升高增殖倍數降低，即分別是0．5 mg/L ＞1．0 mg/L ＞1．5 mg/L 和0．05 mg/L ＞0．10 mg/L ＞0．20 mg/L，但6-BA的影響未達顯著水平，NAA的影響達到極顯著水平。KT對不定芽增殖倍數的影響在試驗濃度范圍內則是0．2 mg/L最高，但當濃度低于0．1 mg/L后，增殖倍數明顯降低，影響達極顯著水平。不定芽誘導率則是在6-BA和NAA濃度均較低的第1組培養基和KT濃度較高(0．2 mg/L)的第5組和第7組培養基中較高，分別是90%、90%和100%。愈傷組織誘導率除在第9組培養基和不定芽增殖倍數較高的第1、第5組培養基中稍低(分別為80%、90%和91%)外，其余均為100%。

2．2 蔗糖濃度對芽增殖的影響 由表2可知，蔗糖濃度對不定芽增殖倍數的影響:試驗濃度范圍內表現出一定的規律，即20 g/L ＞30 g/L ＞40 g/L，其影響達極顯著水平;對愈傷組織形成的影響則表現為在蔗糖濃度為20 g/L的第1組、第5組和第9組培養基中，誘導率均稍低，分別為90%、91%和80%，在蔗糖濃度為30 g/L和40 g/L的培養基中則均達到100%;但對不定芽誘導率的影響未表現出一定的規律。

表2 芽增殖L9(3)正交試驗結果

3 討論

該研究表明，當培養基中未添加KT時，較低濃度的6-BA(0．5 mg/L)和 NAA(0．05 mg/L)有利于不定芽的增殖(第1組試驗)，當添加0．2 mg/L的KT后，適當增加6-BA和NAA的濃度仍能獲得較好的增殖倍數(第5組和第7組試驗)，其中第7組試驗中6-BA濃度達到1．5 mg/L仍有較高的增殖倍數，可能是因為6-BA濃度對不定芽增殖的影響并未達到顯著水平。而第3組試驗雖然KT的濃度也達到0．2 mg/L，但增殖系數仍不高，可能是因為NAA的濃度過高，NAA濃度對不定芽增殖的影響達到極顯著水平，所以NAA濃度的增加對不定芽增殖的影響較大，當達到0．2 mg/L時，對不定芽增殖的抑制作用較明顯。

此外，在6-BA濃度為1．5 mg/L的第7組、第8組和第9組試驗中，未見玻璃化現象，其余幾組試驗都不同程度地出現玻璃化現象，如何克服玻璃化現象有待進一步研究;除不含KT的第1組、第6組和第8組極少或沒有形成不定根外，其余幾組試驗都或多或少形成了一定數量的不定根，說明附加KT后，有利于不定根的分化。

綜上所述，利用淡黃花百合珠芽誘導形成的不定芽進行擴繁，在試驗范圍內不加KT時，6-BA和NAA濃度分別以0．5 mg/L和0．05 mg/L為最佳，添加 KT后，6-BA 濃度可提高至1．5 mg/L，NAA 濃度可提高至0．10 mg/L，考慮到玻璃化現象，以及在蔗糖濃度為30 g/L的第7組培養基中仍能獲得較好的增殖倍數，筆者認為不定芽增殖的最佳培養基應為:MS+1．5 mg/L 6-BA+0．05 ～0．10 mg/L NAA+0．2 mg/L KT+20～30 g/L蔗糖。

［1］楊林莎，孫艷紅，方曉艷．中藥百合的研究進展［J］．河南中醫藥學刊，2002，17(1):74 －75．

［2］包滿珠．花卉學［M］．北京:中國農業出版社，2003．

［3］李黛，張仁波．野生淡黃花百合鱗片的扦插繁殖技術研究［J］．貴州農業科學，2012，40(7):173 －175．

［4］邱寧宏，羅林會，王勤，等．淡黃花百合的組織培養與快速繁殖［J］．中國野生植物資源，2004，23(2):64 －65．

［5］楊雪清，王淑芳，楊蕊，等．淡黃花百合叢生小鱗莖的誘導及快速繁殖［J］．河南農業科學，2007(3):98 －100．

［6］李黛，談鋒，祝順琴．淡黃花百合的組織培養［J］．種子，2005，24(9):27－29．

［7］李黛，張仁波，曾燕玲．務川幾種野生百合的組織培養［J］．種子，2011，30(9):52－55．

［8］周洪英，張著林，孫超．淡黃花百合無性繁殖技術研究［J］．種子，2007，26(11):104－105．

［9］邱寧宏，羅林會，王勤，等．淡黃花百合的組織培養與快速繁殖［J］．中國野生植物資源，2004，23(2):64 －65．

［10］張文娥，潘學軍，胥青青，等．貴州野生淡黃花百合離體快繁研究［J］．安徽農業科學，2008，36(14):5770 －5772，5827．4