江蘇地產白首烏C21甾體苷對高血脂大鼠血脂調節和肝臟保護作用研究

王冬艷，華 欣，葉記林，李 芹，江秀玲

(1．揚州職業大學醫學院;2．江蘇省蘇北人民醫院，江蘇揚州 225009)

血脂異常是一類較常見的代謝紊亂疾病，是導致動脈粥樣硬化的重要因素之一，是冠心病和缺血性腦卒中的獨立危險因素，且近年來有年輕化和加重的趨勢。因此，有效調節血脂異常是預防心腦血管疾病的重要手段，目前應用于臨床的血脂調節類西藥有較好的療效，但因其副作用或會引起藥源性疾病而無法完成療程，因此，在血脂調節藥物中中藥的調節作用越來越受到重視，尤其是在預防血脂異常方面有著西藥不可比擬的優勢［1]，一些中藥在傳統的作用基礎上亦具備降血脂作用［2]，或者同時兼備調節血脂和血糖作用［3]。

白首烏為蘿摩科植物，味甘、苦，性微溫，具有滋補肝腎、益精血、抗衰老、烏須發等功效，現代藥理實驗研究證明，白首烏具有防瘤抗瘤、抗衰老、增強免疫功能及保護肝臟等功能。近年有實驗表明白首烏具有降血脂作用［4]，而C21甾體苷為白首烏中主要有效成分［5]，本實驗建立了大鼠高脂模型，觀察C21甾體苷對高脂模型大鼠血脂的影響，為進一步的開發利用提供依據。

1 實驗材料

1．1 實驗動物 健康SPF級SD雄性大鼠50只，體重(200±20)g，上海市西普爾—必凱實驗動物有限公司，生產許可證號:SCKK(滬)2008－0016。

1．2 藥品與試劑 白首烏C21甾體苷:取濱海產白首烏粗粉用95%乙醇提取，提取物用水溶解后，用適當溶劑(正丁醇等)萃取，萃取液減壓回收溶劑得萃取物，萃取物稀釋后上大孔樹脂柱(HP-20)進行層析，用適當溶劑洗脫，收集洗脫液，精制得C21甾體總苷部位，含量在50%以上;阿托伐他汀鈣片(美國輝瑞科研制藥);血清總膽固醇(TC)測定試劑盒、甘油三酯(TG)測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒 、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑均由盒南京建成生物工程研究所提供;其它試劑均為國產分析純。

1．3 儀器 LABCONCO超純水機:上海和杰科技控股有限公司;AIR-TECH超凈工作臺:蘇州凈化集團安泰公司;醫用解剖器械:蘇州醫療器械廠;BP11OS電子秤:德國SARTORIUS公司;AU600全自動生化分析儀(OLYMPUS)。

2 方法

2．1 飼料 基礎飼料由揚州大學比較醫學實驗中心提供。高脂飼料參照文獻方法［6]配制，組成:79%基礎飼料，10%豬油，10%蛋黃粉，1%膽固醇。

2．2 實驗性高脂血癥大鼠模型的建立和給藥 雄性SD大鼠50只，自由進食和飲水，隨機分為正常對照組(10只)和模型組(40只)。動物在適應性喂養1周之后，禁食(不禁水)12 h后眼眶靜脈叢采血，分離血清后用生化分析儀檢測血脂4項，即總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。正常對照組自由采食基礎飼料;模型組自由采食高脂飼料，連續喂養8周。第56天禁食不禁水，12 h后眼眶靜脈叢采血，分離血清后用生化分析儀檢測血脂4項，以確定高脂模型是否成功。將成模的高脂血癥大鼠40只，隨機分為模型對照組、白首烏C21甾體苷低劑量組20 mg·kg－1、白首烏C21甾體苷高劑量組40 mg·kg－1、陽性對照組阿托伐他汀鈣10 mg·kg－1，每組10只。每日給藥1次，連續給藥2周。高脂模型成功后，正常對照組同時給予生理鹽水4 mL灌胃。

2．3 樣品采集及血脂檢測 動物飼養期間每天給予足量的新鮮飼料及飲水，更換墊料。并對大鼠的行為表現、身體狀況、尿量和大便情況等進行觀察;于實驗結束最后一天晚上大鼠禁食不禁水12 h，然后摘眼球取血，于4℃、3 000 r·min－1離心機內離心10 min，制備血清，－20℃凍存備用。利用全自動生化分析儀采用氧化酶法對大鼠血清TC、TG、LDL-C和HDL-C進行測定，具體步驟按試劑盒說明進行。大鼠放血后處死并迅速打開腹腔摘取肝臟，生理鹽水洗凈，濾紙擦干后稱量肝臟質量，用于計算肝臟系數，肝臟系數=肝臟濕質量(mg)/體質量(g)，稱重后將肝臟組織放入4℃生理鹽水中潤洗干凈。然后在肝臟最大葉距邊緣5 mm處取小塊肝組織，進行臟病理切片檢查。

2．4 統計學分析 采用SPSS19．0軟件進行分析，數據處理用均數±標準差(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗的方法，以P＜0．05具有顯著性差異。

3 結果

3．1 大鼠的一般狀況 實驗前SD大鼠的體質量較均衡，組間比較無差異。實驗中模型組大鼠的體質量增加大于對照組，但比較差異無統計學意義，實驗結束后各組大鼠體質量比較見表1，各用藥組大鼠的體質量增重量小于模型組，與模型組比較差異均有統計學意義(P＜0．01)。肝臟系數可反映肝臟受損傷程度，模型組大鼠的肝臟系數與正常對照組相比，有極顯著性差異(P＜0．01)。陽性對照組、白首烏C21甾體苷低劑量組和高劑量組和均可顯著降低肝臟系數，差異具有顯著性(P＜0．01)，對大鼠體質量和肝臟系數的影響結果具體見表1。

3．2 對大鼠血脂的調節作用 對高脂大鼠血脂的影響中，模型組與正常組對照組相比，大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量極顯著升高，HDL-C顯著性降低差異具有顯著性(P＜0．01)，表明大鼠高脂血癥模型造模成功。在對TC含量的影響中，與正常組相比，高脂血癥的大鼠的TC含量顯著增高，各用藥組與模型組比較含量有所降低，具有顯著性差異(P＜0．01);在對TG含量的影響中，各用藥組較高脂模型組比較均能降低TG含量，白首烏C21甾體苷低、高劑量組和陽性對照組與模型組相比差異具有顯著性(P＜0．05);對大鼠LDL-C含量影響中白首烏C21甾體苷高劑量組和陽性對照組較高脂模型組能顯著降低LDL-C含量，陽性對照組降低更明顯，差異具有顯著性(P＜0．01);對大鼠HDL-C含量影響中白首烏C21甾體苷高劑量組較模型組能明顯提高HDL-C含量，差異具有顯著性(P＜0．01)，具體見表2。

表1 對大鼠體質量和肝臟系數的影響

表2 各組大鼠血脂情況的比較

3．3 對大鼠肝臟形態學影響 在對大鼠病理切片進行形態學觀察中，模型組大鼠與正常對照組大鼠比較，肝小葉結構不正常，可見肝小葉邊界模糊不清，肝索排列疏松結構紊亂，有一部分細胞發生脂肪變性，可見肝細胞胞漿內有許多大小不一的空泡;陽性對照組的肝臟病理切片顯示肝索排列比高脂模型組整齊，但肝小葉結構仍然模糊不清，一部分肝細胞出現濁腫，可見個別脂肪變性空洞;白首烏C21甾體苷低劑量組的大鼠肝臟病理切片中，肝小葉結構比高脂模型組清晰，肝細胞的索狀排列較為整齊，但大部分肝細胞濁腫;白首烏C21甾體苷高劑量組的肝小葉結構輕微模糊，肝索排列比較整齊，肝細胞形態基本正常，小部分細胞出現濁腫、脂滴。病理切片具體見圖1。

4 討論

血脂是人體中重要的物質，有許多重要的功能，但是，如果血脂超過一定范圍就會形成高脂血癥。因為脂質不溶或微溶于水是以脂蛋白形式存在，因此，高血脂常為高脂蛋白血癥，包括總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)和(或)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)增高和(或)高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)降低。大部分高血脂患者雖然本身癥狀并不明顯，但血中過多的脂類物質會逐漸滯留于動脈的血管壁上，久之，能使動脈血管壁增厚、變硬，最終會導致冠心病和腦卒中等動脈粥樣硬化性疾病。因此高血脂是心腦血管疾病的主要危險因素之一，與冠心病、腦卒中、心肌梗死等有密切聯系［7]。隨著生活水平的提高和生活習慣的改變，繼發性高脂血癥的發病率也明顯增加。因此，規范地調節血脂治療對于心腦血管病的預防和治療具有重要的臨床意義。

目前在臨床上常用的治療高血脂癥的藥物中，西藥一般采用他汀類、膽汁酸結合樹脂類等，有一定的不良反應或會引起藥源性疾病以至于無法完成療程，促使越來越多的人將注意力放在天然藥物上，中藥來源的降血脂藥物的研究越來越受到重視，而近年來臨床研究證明，許多中藥治療高脂血癥都收到了較好的療效［8－10]。在此基礎上，充分發揮天然藥物在降血脂方面多靶點、多成分的特點，分離和提取降血脂作用確切，從而開發出療效更好、毒副作用更低新型藥物是調節血脂藥物發展的方向之一［11]。常用中藥白首烏為傳統補益類中藥蘿摩科植物，功效為補肝腎，強筋骨，益精血，健脾消食，解毒療瘡，現常用的白首烏藥材的植物為耳葉牛皮消，主產于江蘇，為地產道地藥材，江蘇濱海廣為栽培。現代實驗研究證實，白首烏有明顯的降低血清膽固醇的作用，其降脂作用與劑量呈正相［12];白首烏能通過減少代謝產物丙二醛的量來降低脂質過氧化作用［13];藥理實驗也證實白首烏 C21甾體酯苷對小鼠急性四氯化碳肝損傷的保護作用［14]。

本實驗中對成模的高脂血癥大鼠進行血脂調節和肝臟保護作用研究，與正常組相比，各高脂組大鼠血清中 TC、TG和 LDL-C含量極顯著升高，HDL-C顯著性降低。使用的陽性對照藥阿托伐他汀鈣是臨床常用調節血脂藥物，屬于羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，能有效地減少或阻斷體內膽固醇的合成。與模型組比較，陽性對照組和白首烏C21甾體苷兩個劑量組均可降低TC;三個用藥組均可降低TG含量;對LDL-C含量的降低作用中，陽性對照組強于白首烏C21甾體苷兩個劑量組，但對HDL-C含量的調節上，白首烏C21甾體苷高劑量組比陽性對照組明顯。因此，白首烏C21甾體苷具有調節高脂血癥大鼠的血脂作用，雖然白首烏C21甾體苷在血脂的調節上降低低密度脂蛋白作用不及阿托伐他汀鈣，但血脂的調節作用中升高有益的高密度脂蛋白作用更明顯，具體機制有待進一步研究。在對肝臟保護作用的衡量中，肝臟系數可反映肝臟受損傷程度，用藥組能明顯降低高脂血癥大鼠的肝臟系數;陽性對照阿托伐他汀鈣組和白首烏C21甾體苷低、高劑量組均可顯著降低肝臟系數，其中白首烏組降低肝臟系數更為明顯，結合病理切片，表明白首烏C21甾體苷可減輕肝臟的損傷，這與白首烏補肝腎的功效一致，但對肝臟的具體保護機制，仍需進一步研究。

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