茵陳蒿湯辨證治療母子ABO血型不合孕婦外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化的研究

禹 梅，劉 婕，張慧君

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712046；2.安康市中心醫(yī)院，陜西725000）

茵陳蒿湯辨證治療母子ABO血型不合孕婦外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化的研究

禹 梅1，2，劉 婕2，張慧君2

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712046；2.安康市中心醫(yī)院，陜西725000）

目的通過(guò)檢測(cè)辨證分型治療母子ABO血型不合前后孕婦外周血中抗A或抗B抗體效價(jià)及T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)，了解采用茵陳蒿湯為主的辨證治療免疫機(jī)制。方法隨機(jī)將2012年6月至2014年5月在陜西省安康市中心醫(yī)院門診確診為母子ABO血型不合的106例孕婦分為對(duì)照組（36例）和治療組（70例），治療組采用中醫(yī)辨證治療分為濕熱組（SR，30例）、濕熱兼脾氣虛組（SR+PQX，13例）和濕熱兼腎氣虛組（SR+SQX，27例）。兩組孕婦分別服用茵陳蒿湯原方和加減對(duì)應(yīng)方進(jìn)行治療，療程30 d。治療前后分別測(cè)定外周血中抗A或抗B抗體效價(jià)及CD3+、CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8+比值。結(jié)果治療后，對(duì)照組孕婦的抗A或抗B抗體效價(jià)，14例降為1∶64，4例降為1∶32；治療組中38例降為1∶64，24例降為1∶32。對(duì)照組和治療組治療前后T淋巴細(xì)胞CD3+計(jì)數(shù)分別為（1 430±396）、（1 445±401）、（1 488±402）、（1 637±401）μL-1，CD4+計(jì)數(shù)分別為（870±230）、（896±240）、（820±240）、（713±289）μL-1，CD8+計(jì)數(shù)分別為（540±190）、（560± 204）、（590±170）、（715±187）μL-1，CD4+/CD8+比值分別為1.51±0.4、1.56±0.36、1.41±0.28、1.19±0.22，兩組孕婦治療后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而治療后，治療組3種證型之間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論茵陳蒿湯對(duì)淋巴細(xì)胞有增殖作用，進(jìn)而加強(qiáng)了母體的細(xì)胞免疫和體液免疫，使胎兒免疫耐受性增強(qiáng)，且茵陳嵩湯辨證方劑較原方更具有優(yōu)越性。

茵陳蒿湯/治療應(yīng)用； ABO血型系統(tǒng)； 辨證分型； 辨證論治； 血型不合/中醫(yī)藥療法； T淋巴細(xì)胞

母子ABO血型不合是產(chǎn)科的高危妊娠之一，是由于母體和胎兒間血型不合造成的同種血型免疫性疾病，對(duì)母子均有一定程度的危害，可表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎、新生兒黃疸等。茵陳蒿湯對(duì)母子ABO血型不合孕母進(jìn)行干預(yù)治療已被證實(shí)療效顯著[1]，并且一直被臨床沿用至今[2]，但其治療機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)測(cè)定母子血型不合孕婦治療前后外周血中T淋巴細(xì)胞亞群水平的變化，了解茵陳蒿湯辨證治療母子血型不合的免疫機(jī)制，為臨床提供治療依據(jù)。現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選擇2012年6月至2014年5月在陜西省安康市中心醫(yī)院門診確診為母子ABO血型不合孕婦106例，血型均為O型，其配偶血型為A型53例，B型43例，AB型10例。孕周16～36周，年齡22～35歲。身體健康，均無(wú)肝、腎、血液等系統(tǒng)疾病，無(wú)輸血史等。按隨機(jī)數(shù)字表順序分為對(duì)照組（36例）和治療組（70例）。對(duì)照組平均年齡（27.62±4.30）歲；平均孕周（21.60±4.10）周；其中無(wú)流產(chǎn)史6例，1次流產(chǎn)史22例，2次流產(chǎn)史8例。治療組平均年齡（28.63±3.80）歲；平均孕周（22.60± 3.70）周；無(wú)流產(chǎn)史16例，1次流產(chǎn)史36例，2次流產(chǎn)史18例。兩組孕婦年齡、孕周、流產(chǎn)次數(shù)等方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有孕婦均行門診治療，必要時(shí)住院治療。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 抗A或抗B免疫球蛋白G（IgG）效價(jià)大于或等于1∶64，且臨床查體中醫(yī)辨證是母子ABO血型不合濕熱型患者。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 除出現(xiàn)嚴(yán)重感冒、腹瀉、嘔吐或嚴(yán)重呼吸道、泌尿生殖道感染者應(yīng)停藥外，其他無(wú)明確服藥禁忌證，又非醫(yī)囑連續(xù)停藥15 d以上，應(yīng)視為無(wú)效病例剔除。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 參照張志蘭等[3]和張穎等[4]的治療方案，對(duì)照組36例孕婦服用茵陳蒿湯原方：茵陳15 g，黃芩10 g，酒大黃3 g，甘草3 g。治療組孕婦采用中醫(yī)辨證法分為濕熱并重（SR）組（30例），在服用茵陳蒿湯原方的基礎(chǔ)上加山梔6 g，白術(shù)9 g；濕熱兼脾氣虛（SR+ PQX）組（13例），在服用茵陳蒿湯原方中去酒大黃加黨參10 g，藿香5 g；濕熱兼腎氣虛（SR+SQX）組（27例），在服用茵陳蒿湯原方基礎(chǔ)上加石斛10 g，菟絲子10 g，五味子10 g。均水煎服，每天1劑，煎400mL，分2次服用，療程為30 d。服用1個(gè)月后復(fù)查血型抗A或抗B抗體評(píng)定療效。對(duì)其中抗體效價(jià)大于1∶512者，直接收住院治療。

1.2.2 檢測(cè)方法 采集患者空腹EDTA-K2抗凝外周血2mL，充分混勻后待測(cè)。同時(shí)抽取3mL全血，分離血清，進(jìn)行抗A或抗B IgG效價(jià)檢測(cè)。

T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+絕對(duì)計(jì)數(shù)，儀器和試劑均購(gòu)自上海匯中細(xì)胞生物科技有限公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

抗A、抗B血型定型試劑，ABO標(biāo)準(zhǔn)試劑紅細(xì)胞（RBC），抗人球蛋白試劑，2-Me應(yīng)用液均購(gòu)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作。

1.2.3 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 顯效：服藥30 d后，抗體效價(jià)下降至原滴度的3或2個(gè)級(jí)差（如1∶512滴度降至1∶128或1∶64）；有效：服藥30 d后，抗體效價(jià)下降至原滴度的1個(gè)級(jí)差；無(wú)效：服藥30 d后，抗體效價(jià)為不降或反而升高。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件及Microsoft Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，與組間及組內(nèi)前后資料比較采用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組孕婦治療前后血清抗體水平變化及療效比較 治療后，對(duì)照組有18例降為1∶64及以下，有效率為50.0%；治療組有62例降為1∶64及以下，有效率為88.6%。兩組有效率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組孕婦治療前后T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較 （1）治療前，對(duì)照組和治療組CD3+、CD4+、CD8+計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（2）治療后，對(duì)照組和治療組內(nèi)SR、SR+PQX、SR+SQX3種證型的CD3+、CD8+數(shù)量較治療前明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但經(jīng)單因素方差分析，治療后3種證型之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療組3種證型治療后CD3+、CD8+數(shù)量明顯高于對(duì)照組治療后，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（3）治療后，對(duì)照組和治療組SR、SR+PQX、SR+SQX 3種證型的CD4+的數(shù)量及CD4+/CD8+比值較治療前明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但經(jīng)單因素方差分析，3種證型之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療組3種證型治療后CD4+數(shù)量及CD4+/CD8+比值明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（4）CD4+/CD8+比值在治療組各型與對(duì)照組治療前比較及治療組和對(duì)照組治療后比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表1 兩組孕婦治療前后血清抗體水平變化及療效比較（n）

表2 兩組孕婦治療前后T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表2 兩組孕婦治療前后T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

注：與同組（同證型）治療前比較，aP＜0.05；與對(duì)照組治療后比較，bP＜0.05。

組別n CD3+（μL-1）治療前 治療后對(duì)照組治療組SR SR+PQX SR+SQX 36 1 430±396 1 488±402 870±230 CD4+（μL-1）治療前 治療后820±240 540±190 CD8+（μL-1）治療前 治療后590±170 1.51±0.40 CD4+/CD8+治療前 治療后1.41±0.28 1.20±0.19 1.27±0.24 1.32±0.28 30 13 27 1 440±450 1 454±391 1 406±420 1 625±359ab1 649±362ab1 630±351ab890±210 878±202 868±188 693±291ab705±311ab711±309ab550±210 560±200 576±220 709±182ab723±189ab734±194ab1.48±0.32 1.47±0.28 1.49±0.40

3 討 論

母子ABO血型不合是母體與胎兒之間由于血型不合而引起胎兒或新生兒溶血癥的同種免疫性疾病，因?yàn)樘篟BC遺傳了父親的血型A或B抗原，其血型表現(xiàn)于不同母體的血型抗原，當(dāng)這種不同于母體的血型抗原進(jìn)入母體的血液循環(huán)后，就會(huì)導(dǎo)致母體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的免疫性抗體，這種抗體可通過(guò)母體胎盤進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)中，與胎兒的RBC抗原相結(jié)合，引起胎兒和新生兒溶血。如果有流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)及新生兒溶血等不良妊娠史的孕婦，或孕婦為O型血而丈夫?yàn)锳、B或AB型的孕婦，妊娠前、中期需檢測(cè)血清抗體效價(jià)，對(duì)高效價(jià)（≥1∶64）的孕婦應(yīng)進(jìn)行中西結(jié)合藥物預(yù)防性干預(yù)治療，因?yàn)樵缙谥委熆梢杂行Ы档湍阁wIgG抗體效價(jià)，減少新生兒溶血反應(yīng)的程度或降低對(duì)胎兒的危害性[5]。

西醫(yī)治療母子ABO血型不合及新生兒黃疸主要是對(duì)癥治療、補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、增加胎盤氧的交換和葡萄糖的利用等，以減少溶血的發(fā)生。中醫(yī)治療主要是從濕熱蘊(yùn)阻胞胎、氣血阻滯，以脾腎虛損為本、濕熱血瘀為標(biāo)。目前大多采用辨證方加減相結(jié)合的方法[6]。將抗A或抗B IgG抗體效價(jià)顯著升高（≥1∶64）的孕婦納入觀察對(duì)象，采用茵陳蒿湯為主辨證加減治療的前瞻性研究表明，辨證方劑降低抗體效價(jià)的作用顯著優(yōu)于原來(lái)配方，而且見(jiàn)效更快。

母子ABO血型不合是同種免疫性疾病，有學(xué)者研究證實(shí)，RBC免疫參與了母子血型不合發(fā)生的過(guò)程[3]，作為機(jī)體免疫功能的T淋巴細(xì)胞在治療中發(fā)揮什么作用，其改變是否有意義，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各型母子血型不合患者在治療后T淋巴細(xì)胞CD3+、CD8+水平升高，CD4+和CD4+/CD8+下降，與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí)，治療組與對(duì)照組治療后比較，T淋巴細(xì)胞數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這種計(jì)數(shù)變化具有明顯的臨床意義。景蘇玉等[7]用保胎“沖劑”治療36例習(xí)慣性流產(chǎn)患者，CD3+、CD8+明顯升高，CD4+水平和CD4+/CD8+比值則下降；劉潤(rùn)俠等[8]治療32例反復(fù)自然流產(chǎn)者，CD8+細(xì)胞活性明顯升高，CD4+則下降，CD4+/CD8+比值基本正常。說(shuō)明T淋巴細(xì)胞參與并調(diào)節(jié)了機(jī)體免疫。由此可以推斷，當(dāng)母子產(chǎn)生血型不合后，其血清抗A或抗B效價(jià)升高，這就破壞了母子的免疫平衡機(jī)制，即會(huì)出現(xiàn)胎兒或新生兒溶血反應(yīng)，CD3+、CD8+水平會(huì)下降，CD4+水平、CD4+/CD8+比值會(huì)升高。然而，通過(guò)茵陳蒿湯為主辨證治療后，升高了CD3+、CD8+水平，同時(shí)降低了CD4+水平和CD4+/CD8+比值，使抗A或抗B效價(jià)降低，進(jìn)而使溶血發(fā)生概率降低[9-11]。

本研究采用茵陳蒿湯治療30 d的相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，茵陳蒿湯原方和辨證加減均具有降低母子血型不合孕婦抗A或抗BIgG效價(jià)的作用，均可升高CD3+、CD8+水平，降低CD4+水平和CD4+/CD8+比值。從個(gè)體療效看，辨證治療更切合實(shí)際，療效比原方更為優(yōu)越，特別是在抗A或抗B效價(jià)下降，以及CD3+、CD8+水平升高和CD4+降低程度方面差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

總之，本研究證實(shí)T淋巴細(xì)胞參與了母子血型不合發(fā)生的過(guò)程，茵陳蒿湯對(duì)T淋巴細(xì)胞有增殖作用，從而可加強(qiáng)母體的細(xì)胞免疫和體液免疫，使胎兒免疫耐受性增強(qiáng)，說(shuō)明茵陳蒿湯通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，達(dá)到保胎的目的。

[1]張志蘭，楊萬(wàn)章.以茵陳蒿湯為主辨證治療母兒ABO血型不合對(duì)照研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，29（7）：502-504.

[2]劉梅，唐惠英.茵陳蒿湯治療新生兒母嬰血型不合溶血病126例臨床觀察[J].右江醫(yī)學(xué)，2013，41（3）：370-371.

[3]張志蘭，徐丹，張新清，等.茵陳蒿湯等干預(yù)母兒ABO血型不合84例患者的紅細(xì)胞免疫研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24（11）：1514-1516.

[4]張穎，張玉春，田梅.茵陳蒿湯加減治療17例ABO母嬰血型不合臨床觀察[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2014，33（24）：11.

[5]周曉曄，李世琴，趙建春，等.孕期高ABO血型抗體效價(jià)孕婦的藥物干預(yù)效果觀察[J].中外醫(yī)療，2013，32（21）：114-116.

[6]劉梅，唐惠英.茵陳蒿湯治療孕婦IgG抗體高效價(jià)98例臨床觀察[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2013（3）：1540.

[7]景蘇玉，歸綏琪.“保胎Ⅰ沖劑”提高反復(fù)自然流產(chǎn)患者免疫功能的臨床觀察[J].上海中醫(yī)藥雜志，2002，36（9）：23-24.

[8]劉潤(rùn)俠，劉艷巧，李百文，等.中藥治療母兒血型不合引起反復(fù)自然流產(chǎn)32例[J].陜西中醫(yī)，2002，23（5）：393-394.

[9]周友華，余艷濤，張文，等.茵陳蒿湯對(duì)免疫小鼠ABO血型抗體產(chǎn)生的抑制作用研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2011，27（7）：607-610.

[10]李慧，余明明，閆清雅，等.茵陳蒿湯對(duì)A血型抗原免疫小鼠TNF-α水平的影響[J].中國(guó)輸血雜志，2014，27（6）：572-575.

[11]康慶偉，閆姝.茵陳蒿湯的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2013，19（4）：473-475.

Clinic effect of Yinchenhao decoction in treatment of peripheral blood T-cell subgroups of patientsw ith maternal-fetal ABO blood-group incom patibility

YuMei1，2，Liu Jie2，ZhangHuijun2
（1.ShaanxiTraditionalChineseMedicineCollege，Xianyang，Shaanxi712046，China；2.AnkangMunicipalCentralHospital，Shaanxi725000，China）

ObjectiveAbsolutenumbersof T-cellsand anti-A oranti-B antibody titer in peripheralblood of the pregnant women with maternal-fetal ABO blood-group incompatibility were detected by syndromes different from the treatments to reveal the immunologicalmechanism of Yinchengao decoction treatment.MethodsA totalof106 pregnantwomen clinically diagnosed withmaternal-fetal ABO blood-group incompatibility in the Ankang MunicipalCentralHospital from June 2012 toMay 2014were divided into the controlgroup（36 cases）and the treatmentgroup（70 cases）.The treatmentgroup was divided into SR group with 30 cases，SR+PQX group with 13 cases and SR+SQX with 27 cases according to sydromes differentiation.The two groupswere treated with original Yinchenghao decoction and adjusted Yinchenghao decoction separately，lasting 30 days.The anti-A oranti-B antibody titer in peripheralblood ofand the concentrations ofCD3+，CD4+，CD8+aswellas the value of CD4+/CD8+before and after the treatment.ResultsThe anti-A oranti-B antibody titerof14 pregnantwomen in the controlgroup after the treatmentwas declined to1∶64，4 cases to1∶32while38 casesin the treatmentgroupwasdecreased to1∶64，24 cases to1∶32.The CD3+，CD4+ and CD8+T lymphocytesnumbers per literwere[（1 430±396），（1 445±401），（1 488±402），（1 637±401）]μL-1，[（870±230），（896 ±240），（820±240），（713±289）]μL-1and[（540±190，560±204，590±170，715±187）]μL-1respectively in succession before and after the treatment.The value ofCD4+/CD8+was（1.51±0.4），（1.56±0.36），（1.41±0.28），（1.19±0.22）respectively.The above parametersafter the treatmentwere comparedwith thosebefore the treatmentand showed that therewasstatisticalsignificant in difference（P＜0.05）.The sydromes among the three sydrome groups after the treatmenthad no statistical significance in difference（P＞0.05）.ConclusionThe Yinchenghao decoction playsa positive role in proliferation response to lymphocyte and strengthen the cellular immunity and humoral immunity capability to improve the fetuses′s tolerance，especially，the altered Yinchenghao decoction prevailed in superiority.

Yinchenhao decoction/theraputic use； ABO blood-group system； Syndrome differ classification； Syndrome differ treatment； Blood group incompatibility/zhong yiyao liao fa； T-lymphocytes

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.07.007

：A

：1009-5519（2015）07-0977-03

2015-01-07）

禹梅（1978-），女，陜西安康人，在讀研究生，副主任檢驗(yàn)師，主要從事臨床輸血工作；E-mail：812486136@qq.com。