梅毒血清學(xué)試驗(yàn)檢測潛伏妊娠梅毒的臨床價(jià)值

范海燕

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院，安徽巢湖238000）

梅毒血清學(xué)試驗(yàn)檢測潛伏妊娠梅毒的臨床價(jià)值

范海燕

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院，安徽巢湖238000）

目的探究梅毒血清學(xué)試驗(yàn)檢測潛伏妊娠梅毒的臨床價(jià)值。方法選擇2012年1月至2014年3月于該院進(jìn)行圍產(chǎn)保健的460例孕婦作為研究對象，分別對孕婦的血清進(jìn)梅毒螺旋體顆粒凝聚試驗(yàn)（TPPA）、聚合酶鏈反應(yīng)（PRC）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、膠體金免疫層析試驗(yàn)（GICA）5種血清試驗(yàn)，回顧性分析試驗(yàn)過程及結(jié)果，以TPPA和PCR結(jié)果均為陽性最終判定為陽性，統(tǒng)計(jì)TRUST、ELISA和GIGA檢測的陽性率。結(jié)果460例孕婦的血清學(xué)試驗(yàn)中，共檢測出潛伏妊娠梅毒患者21例，檢出率為4.6%；ELISA法檢出潛伏妊娠梅毒患者19例，符合率為90.6%，高于TRUST的71.4%和GICA的81.0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ELISA、TRUST和GICA診斷特異度都在95%以上，陰性預(yù)測值都高達(dá)98%以上，且ELISA的陽性似然比最高，而陰性似然比最低。結(jié)論在孕婦進(jìn)行臨床妊娠梅毒篩查時(shí)，ELISA檢測潛伏妊娠梅毒陽性率較高，但3種方法的臨床效能各有所長，選擇ELISA配合TRUST、GICA可大大提高妊娠梅毒檢出率，節(jié)約檢測成本，阻斷梅毒在母嬰之間的垂直傳播，為臨床潛伏妊娠梅毒的檢測提供了參考依據(jù)。

梅毒； 梅毒血清診斷； 妊娠并發(fā)癥

梅毒是一種性傳播疾病，由梅毒螺旋體引發(fā)，發(fā)病范圍為全身，其傳播途徑不僅可以通過性接觸進(jìn)行水平傳播，也可通過妊娠的方式在母嬰之間垂直傳播[1]。梅毒對妊娠的感染非常嚴(yán)重，可致孕婦早產(chǎn)、胎兒水腫、宮內(nèi)生長受限，甚至流產(chǎn)或死產(chǎn)，存活下來的嬰兒也會并發(fā)嚴(yán)重的后遺癥，成為先天梅毒兒。所以，為避免悲劇發(fā)生，做好孕婦的產(chǎn)前檢查和早期治療是阻斷胎傳梅毒發(fā)生的有效手段。但近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，妊娠現(xiàn)象會改變梅毒的臨床特征和一般病程，使其變成潛伏妊娠梅毒，極大地干擾了產(chǎn)前檢測結(jié)果[2]。因此，為探究一種有效的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)方法，本院對460例孕婦的血液進(jìn)行了梅毒血清學(xué)試驗(yàn)，并將檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究對象 選取2012年1月至2014年3月于本院進(jìn)行圍產(chǎn)保健的460例孕婦為研究對象，年齡21~ 33歲，平均（26.2±3.5）歲。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 選取的孕婦中均無梅毒的臨床表現(xiàn)和體征。

1.1.3 試劑 梅毒螺旋體顆粒凝聚試驗(yàn)（TPPA）、ELISA試劑盒由卡邁舒（上海）生物科技有限公司生產(chǎn)；梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）診斷試劑盒、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）熒光檢測試劑盒由南京森貝伽生物科技有效公司生產(chǎn)；膠體金免疫層析檢測（GICA）試劑盒由墨客密理博公司生產(chǎn)。

1.1.4 儀器 選用上海杉浦生物科技有效公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀；北京拓普公司生產(chǎn)的DEM-3洗板機(jī)；深圳市匹基生物工程有效公司生產(chǎn)的核酸擴(kuò)增熒光檢測儀；湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司生產(chǎn)的離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)方法 孕婦晨起后，空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血5mL于真空采血管中并立即送往試驗(yàn)室，放入速度為3000 r/min的離心機(jī)中離心處理10min，將血清分離備用。分別對孕婦的血清進(jìn)TPPA、PCR、TRUST、ELISA、GICA 5種血清試驗(yàn)，對TPPA檢測出陽性的血清，再次做PCR[3]。TRUST、ELISA和GICA的具體操作步驟如下所示。

1.2.1.1 TRUST （1）定性試驗(yàn)：吸取50μL的梅毒陽性和陰性對照物，均勻添加在紙卡的2個(gè)圓圈中，取等量的受測血清與卡片的另一個(gè)圓圈范圍內(nèi)，使用專用滴管和針頭將TRUST試劑垂直地、均勻地滴加在上述3種血清中；搖動(dòng)上述試劑8min，每分鐘100轉(zhuǎn)，仔細(xì)觀察效價(jià)變化。（2）定量試驗(yàn)：使用生理鹽水倍比稀釋受測血清，再次按照上述步驟進(jìn)行試驗(yàn)，呈現(xiàn)出明顯凝聚反應(yīng)的為達(dá)到最高稀釋度，以此作為血清的凝聚效價(jià)。若受測血清中可見較大的紅色凝聚物，則結(jié)果判定為陽性（+++～++++）；若受測血清中可見紅色凝聚物較小，則判定結(jié)果為弱陽性（+～++）；若受測血清中無凝聚物產(chǎn)生，則可判定為陰性（-）[4]。

1.2.1.2 ELISA 主要步驟包括使用碳酸鹽包被緩沖液稀釋抗體，加入待檢血清與包被反應(yīng)孔中，在于反應(yīng)孔中加入酶標(biāo)抗體，之后進(jìn)行30min至1 h的孵育，溫度為37℃，孵育后洗滌，加入臨時(shí)配置的0.1mL的四甲基聯(lián)苯胺底物液進(jìn)行顯色處理，置于37℃環(huán)境中10～30min，滴入0.05mL、2M的硫酸終止反應(yīng)，肉眼觀察，反應(yīng)孔中的顏色越深，證明陽性度越強(qiáng)，顏色極淺或沒有則為陰性[5]。

1.2.1.3 GICA 使用去離子水溶解氯金酸至濃度為0.2 g/L，之后將其煮沸，在溶液中滴加檸檬酸三鈉，滴加規(guī)格為每100毫升中加入4mL，濃度為10 g/L，繼續(xù)煮沸7min，可制備15 nm的膠體金；取100mL的膠體金制備免疫膠體金；最后制備免疫層析測試條，由吸水濾紙、硝酸纖維素膜和吸水纖維組成，于試管中加入0.1mL的待測血清，測試條上帶有金標(biāo)記物的一段插入血清中，若測試條出現(xiàn)2條紅色色帶則為陽性，1條為陰性，無紅色色帶出現(xiàn)則表示試劑失效[6]。

1.2.2 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) TPPA與PCR檢測結(jié)果都呈陽性的患者，即可確診為潛伏妊娠梅毒患者。符合率=（檢出例數(shù)-假陽性例數(shù)）/（TPPA和PCR結(jié)果同為陽性例數(shù)）×100%；假陽性率=假陽性例數(shù)/460×100%[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 初步數(shù)據(jù)錄入EXCEL（2003版）進(jìn)行邏輯校對與分析，得出清潔數(shù)據(jù)采用四方表格法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 潛伏妊娠梅毒陽性率 以TPPA和PCR結(jié)果同時(shí)為陽性確診為潛伏妊娠梅毒患者，460例孕婦中，共檢測出潛伏妊娠梅毒患者21例，陽性率為4.6%。

2.2 ELISA、TRUST和GICA結(jié)果比較 3種檢測方法中，ELISA的符合率最高，假陽性率低于TRUST，高于GICA，對潛伏期妊娠梅毒的診斷靈敏度最大，且分別與TRUST和GICA比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 EL I SA、TRUST和GICA結(jié)果比較

2.3 ELISA、TRUST和GICA試驗(yàn)臨床效能比較 3種試驗(yàn)方式的診斷特異性都在95%以上，陰性預(yù)測值都高達(dá)98%以上，且ELISA試驗(yàn)的陽性似然比最高，而陰性似然比最低，見表2。

表2 ELISA、TRUST和GICA試驗(yàn)臨床效能比較（%）

3 結(jié) 論

近年來，我國的梅毒患者的例數(shù)呈逐步上升趨勢，先天梅毒患兒例數(shù)的增長率也居高不下，產(chǎn)前的漏診和誤診是造成的這一現(xiàn)象的主要原因之一，但由于妊娠反應(yīng)對梅毒臨床病癥和體征的干擾，使得孕婦產(chǎn)前檢查中，梅毒攜帶的確診有一定的困難[4]。所以妊娠梅毒的診斷需要十分謹(jǐn)慎，不僅要避免給孕婦帶來心理壓力，還要防止漏診和誤診造成患者錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局和嚴(yán)重的孕期并發(fā)癥，給患者自身和家庭造成無法挽回的損失。

妊娠梅毒多呈潛伏狀態(tài)，且妊娠狀態(tài)下的婦女，其體內(nèi)的內(nèi)毒螺旋體和非致命的費(fèi)梅毒螺旋體均可在血清學(xué)試驗(yàn)中呈假陽性[8]，所以在患者無梅毒的臨床癥狀，卻顯示出陽性結(jié)果，這便給診斷造成了巨大的困擾，因此臨床急需一種硅潛伏梅毒也變現(xiàn)出超級靈敏陽性率的血清學(xué)試驗(yàn)方法。梅毒血清學(xué)篩查，是提高潛伏梅毒檢出率的最有效的檢測方法，具有方便、快捷、靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等特點(diǎn)，血清學(xué)試驗(yàn)中有5種檢驗(yàn)潛伏梅毒的試驗(yàn)方法，包括：TPPA、PCR、TRUST、ELISA和GICA。而其中的TPPA聯(lián)PCR得出的檢測結(jié)果比較權(quán)威且確切，但這2種檢測手段成本較高，普遍推廣并不現(xiàn)實(shí)，TRUST、ELISA和GICA 3種檢測方式靈敏度高，而且方便經(jīng)濟(jì)，是臨床中常用的梅毒檢測方法[9]。

綜上所述，TRUST、ELISA和GICA 3種血清學(xué)試驗(yàn)的臨床特異性較強(qiáng)，且各自的臨床效能比較突出，可從多方面檢測和試探潛伏的妊娠梅毒，聯(lián)合這3種檢測方式，使其在檢測過程中發(fā)揮各自所長并彌補(bǔ)臨床效能的不足之處，不僅能夠提高潛伏妊娠梅毒的陽性率，還能從多方面驗(yàn)證患者是否屬于假陽性患者，避免檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確導(dǎo)致的漏診和誤診，為母嬰的健康提供了保障[10]。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.07.041

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：1009-5519（2015）07-1065-02

2014-09-04

2014-11-21）

范海燕（1976-），女，安徽和縣人，檢驗(yàn)師，主要從事性病檢測研究；E-mail：fanhaiyanch@163.com。