高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在動物性食品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

金紅巖 西藏職業(yè)技術(shù)學院850030

李封賽 東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院150030

封家旺 西藏職業(yè)技術(shù)學院850030

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在動物性食品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

金紅巖 西藏職業(yè)技術(shù)學院850030

李封賽 東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院150030

封家旺 西藏職業(yè)技術(shù)學院850030

近年來，動物性食品安全問題被廣泛關(guān)注，特別是動物性食品獸藥殘留問題。因此，對獸藥殘留檢測方法的研究成為熱點，特別是獸藥殘留問題，如何建立快速、靈敏度高和高通量的檢測技術(shù)尤其受到關(guān)注。目前，針對獸藥殘留有多種檢測方法，但多數(shù)不夠完善，存在一定弊端，相比之下，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-LC/MS）可實現(xiàn)高效分離，定性和定量準確度高，日益成為獸藥殘留檢測的確證方法［1］。本文重點分析HPLC-LC/MS在動物性食品獸藥殘留分析領(lǐng)域的應(yīng)用。

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；獸藥殘留；檢測

獸藥被用于動物疾病的防控，但由于不合理的使用，導(dǎo)致獸藥在動物體內(nèi)蓄積，人類食入獸藥殘留超標的食品，也會導(dǎo)致藥物蓄積于體內(nèi)，影響健康。在動物性食品獸藥殘留檢測方法中，HPLC-LC/MS可實現(xiàn)在一級質(zhì)譜條件下獲得待見組分的準分子離子峰，并將準分子離子裂解，獲得子離子峰，準確辨別目標化合物，排除基體干擾，具備靈敏度高、進樣量少和基體干擾小等特點。因此，HPLC-LC/MS已成為較先進的動物性食品獸藥殘留檢測方法。近年來，各國學者不斷對HPLC-LC/MS檢測方法進行創(chuàng)新和改進，為獸藥殘留監(jiān)控體系的建立和完善提供保障［2］。

1　獸藥殘留原因分析

導(dǎo)致動物體內(nèi)獸藥殘留超標的原因很多，但多數(shù)是由于養(yǎng)殖過程中用藥不合理造成的，主要體現(xiàn)在不能嚴格執(zhí)行給藥時間和給藥劑量，不按規(guī)定部位給藥，未嚴格執(zhí)行獸藥的休藥期，為躲避宰前檢查而濫用獸藥，使用違禁獸藥和養(yǎng)殖設(shè)備遭受污染［3］等。

2　樣品前處理

（1）提取方法。索氏提取：充分分析提取物的熱穩(wěn)定性，保證不易分解。本方法無需轉(zhuǎn)移提取液，基質(zhì)效應(yīng)相對較小，但提取周期相對較長，提取過程中溶劑消耗量多，通常多用于含水量少的試樣提取。超臨界流體萃取：提取物的溫度與壓力超過臨界時，狀態(tài)介于氣液態(tài)，此時的狀態(tài)稱為超臨界狀態(tài)。此時其密度接近液體，擴散系數(shù)比液體高，該流體表面張力小，更易滲透。此方法溶劑消耗量少，實驗淋洗劑為二氧化碳。微波輔助萃取：微波作用于試樣，可穿透試樣，與目標提取物充分作用，使試樣受熱均勻，提取過程中極性溶劑可吸納能量，加快高熱環(huán)境下不穩(wěn)定化合物的分離速度。微波萃取是在密閉條件下調(diào)動溶劑分子的運動，提高溶劑的活性，使微波萃取過程得以優(yōu)化［4］。

（2）凈化方法。液液萃取：該法是根據(jù)待測組分和樣品基質(zhì)的物理化學性質(zhì)間存在差異，二者在互不相溶的兩種體系中溶解度不同，符合上述條件即可進行液液萃取凈化。固相萃取：由于原理不同分為兩種情況，一種是待測試樣過柱后能保留樣品中雜質(zhì)，但目標物可流出。另一種是目標物留在柱床，干擾物質(zhì)經(jīng)洗滌后流出萃取柱。固相萃取柱的填料通常使用活性炭或弗羅里硅土，此方法節(jié)省時間、精度高、溶劑使用少、選擇性好，可用于痕量富集，避免乳化。基質(zhì)固相分散：試樣與一定量的反相鍵合硅膠混合，通過反復(fù)研磨，使樣品和吸附劑的固定顆粒混合均勻，當混合物處于半固體狀態(tài)時裝柱，洗脫過程借鑒固相萃取法。本方法樣品凈化速度快，可減少樣品和溶劑的使用量，整合了其他提取凈化方法的優(yōu)勢，在很大程度上減少了待測樣品中目標物的損失［5］。

3　獸藥殘留檢測

隨著集約化畜牧業(yè)的不斷發(fā)展，獸藥的使用范圍也在不斷擴大，獸藥不僅用于治療疾病，也用于促生長和提高飼料利用率，像一些抗生素、磺胺類藥物，以及一些激素等。由于獸藥的使用范圍擴大和用藥量的增加，必然會導(dǎo)致獸藥殘留的產(chǎn)生，獸藥殘留所檢測的樣品基質(zhì)和被檢測組分的結(jié)構(gòu)變得更加復(fù)雜，檢出限降低，這就對樣品的前處理過程提出更加嚴格的要求。由于HPLC-LC/MS分抵背景干擾能力較強，靈敏度相對較高，可在很大程度上簡化樣品的前處理過程，像氯霉素和克倫特羅，通常是采用GC-MS檢測，前處理過程需要衍生，過程相對繁瑣，而HPLC-LC/ MS可去掉衍生步驟，使前處理過程更加簡化。有研究表明，通過使用APCI離子源，HPLC-LC/MS檢測動物組織中氯霉素，乙酸乙醋為提取液，使用C18柱固相萃取凈化，回收率大于80％，檢測限為0.02μg/kg［6］，與GC-MS相比靈敏度更高。我國學者使用HPLC-LC/MS檢測動物組織中硝基呋喃代謝物時，為能達到歐盟委員會規(guī)定的四個確證點的要求，檢測過程采用2-硝基苯甲醛和2-氯苯甲醛雙衍生化處理，結(jié)果產(chǎn)生兩個分子離子峰，增加了確證信息，達到了要求的檢測限（0.5μg/kg），滿足了最低檢測限量的要求。但整個檢測過程相對繁瑣，操作過程復(fù)雜，HPLC-LC/MS可提供詳細的質(zhì)譜信息，采用NIRNI檢測模式，達到要求的難度低［7］。

隨著科學技術(shù)水平和檢測技術(shù)的不斷進步，儀器的價格將會不斷降低，HPLC-LC/MS在獸藥殘留檢測方面的應(yīng)用會越來越廣泛，HPLC-LC/MS分析方法將會被不斷完善，HPLC-LC/MS也必將在動物性食品獸藥殘留檢測方面發(fā)揮越來越重要的作用。

［1］牛麗娟，湯樹生，郭召旭，等.復(fù)方伊維菌素和吡喹酮注射液的研制［J］.中國獸醫(yī)雜志，2010，46（3）：70-72.

［2］C.Lavaliere，G.D.Ascenzo，P.Foglia，etal.Determinationof mycotoxinsinbovinemilkbyliquidchromatographytandem massspectrometry［J］.J.ChromatogrB.2005，820：183-196.

［3］王立平，蔡雪鳳，侯翠艷.微生物抑制法檢測乳中舒巴坦含量的研究［J］.食品科技，2010，35（6）：304-306.

［4］于詠蘭，汪明.RP-HPLC檢測注射型復(fù)方驅(qū)蟲劑中吡喹酮和伊維菌素的含量［J］.中國獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：92-94.

［5］楊成對，宋莉暉.家禽肌肉組織中硝基咪哩類藥物殘留的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定［J］.分析測試學報，2006，25（4）：101-103.

［6］岳振峰.食品中獸藥殘留檢測指南［M］.北京：中國標準出版社，2010.

［7］ShiY，PengDD，ShiCH，etal.Selectivedeterminationoftrace 17β-estradiolindairyandmeatsamplesbymolecularlyimprintedsolid-phaseextractionandHPLC［J］.FoodChem，2011，126：1916-1925.