HPLC法測定蛋白琥珀酸鐵口服溶液中防腐劑的含量

劉存富

(江蘇省建湖縣人民醫(yī)院藥劑科，江蘇 建湖 224700)

蛋白琥珀酸鐵口服溶液用于治療缺鐵性貧血，由于其效療確切，不良反應(yīng)小，在小兒缺鐵性貧血中有廣泛的應(yīng)用［1－4］。在此口服溶液的處方中添加有一定量的防腐劑如對羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉以抑制微生物的生長繁殖。大量的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)表明，防腐劑對人體存在一定的毒副作用［5－6］，因此本制劑需對防腐劑的含量進(jìn)行測定控制，以確保臨床用藥的安全。本文建立測定快速測定羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉的含量HPLC方法，并對多批次的蛋白琥珀酸鐵口服液中防腐劑進(jìn)行了測定和評價。

1 儀器與試藥

儀器:Waters 2695型高效液相色譜儀(美國)，PDA檢測器，EMPOWER 3色譜工作站。

試劑:乙腈為色譜純(德國Merck公司);超純水;蛋白琥珀酸鐵口服液(意大泛馬克大藥廠);對羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉購自于中國食品藥品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2．1 溶液的配制 對照品儲備液:分別取對羥苯甲酸甲酯鈉和對羥苯苯甲酸丙酯鈉對照品21 mg和7 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加40%乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。

供試品溶液:精密量取蛋白琥珀酸鐵口服溶液1 mL置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即得。

2．2 色譜條件 色譜條件:用AichromBond-AQ C18色譜柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，乙腈∶水(40∶60)為流動相;檢測波長為 254 nm，流速 1．0 mL·min－1，柱溫40℃;進(jìn)樣量:20μL。在上述色譜條件下，兩種防腐劑分離度和峰形均良好。

2．3 線性關(guān)系 精密量取適量的對照品儲備液于不同體積的量瓶中，依次精密量取 1、1、3、2、5、3、1 mL 分別置于 100、50、100、50、100、50、10 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，作為線性樣品溶液。在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。以對羥基苯甲酸甲酯鈉的濃度為縱坐標(biāo)(C)，以峰面積為橫坐標(biāo)(A)，求得回歸方程為:C=0．007 5A+0．031 4(r=0．999 8)。以對羥基苯甲酸丙酯鈉的濃度為縱坐標(biāo)(C)，以峰面積為橫坐標(biāo)(A)，求得回歸方程為:C=0．009 2A －0．007 4(r=0．999 9)。表明濃度在0．873 ～8．732 mg·L－1范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸甲酯鈉的濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系;濃度在0．296 ～2．964 mg·L－1范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸丙酯鈉的濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2．4 精密度 取線性關(guān)系項(xiàng)下第4點(diǎn)的溶液，依法操作，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。對羥基苯甲酸甲酯鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉峰面積的RSD分別為0．04%和0．22%。說明本法精密度良好。

2．5 溶液穩(wěn)定性 取線性關(guān)系項(xiàng)下的第4點(diǎn)溶液，每隔1 h進(jìn)樣，考察峰面積的變化，考察至7 h。對羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉峰面積的RSD分別為0．34%和0．43%。表明樣品溶液在7 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．6 回收率 精密移取 1．0、1．5、2 mL 對照品儲備液置100 mL量瓶中，再精密加不含防腐劑空白溶液1 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。平行3份，進(jìn)液相進(jìn)行檢測。結(jié)果表明本法對羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉的回收率均良好，結(jié)果見表1。

2．7 樣品分析 按測定項(xiàng)下的方法測定6批市售蛋白琥珀酸鐵口服液制劑防腐劑，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算各組份的含量。結(jié)果見表2，典型的樣品色譜圖見圖1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

在本方法研究中，為了使雜質(zhì)及降解產(chǎn)物與主成分的分離度滿足含量測定的要求，選擇適合的流動相組成是十分必要。我們對流動相進(jìn)行了篩選，流動相篩選試驗(yàn)結(jié)果見表3。

當(dāng)流動相的比例為乙腈∶水=30∶70，但對羥基苯甲酸丙酯鈉的保留時間達(dá)36 min，考慮到蛋白琥珀酸鐵在乙腈中溶解性較差，所以在不改變比例的情形下，將柱溫設(shè)為40℃，流速增大為1．2mL·min－1，但對羥基苯甲酸丙酯鈉的保留時間仍較長，為28 min。當(dāng)乙腈比例為40%，保留時間適中，峰形較好，分離度合格，并且制劑供試品溶液與此流動相是互溶的。綜合考慮，我們選定乙腈∶水=40∶60，柱溫 40℃，流速 1．0 mL·min－1的條件作為測定的色譜條件。

表3 流動相篩選試驗(yàn)結(jié)果

本文對多批市售的蛋白琥珀酸鐵口服溶液的防腐劑進(jìn)行監(jiān)測，確定對羥苯甲酸甲酯鈉和對羥苯苯甲酸丙酯鈉在3 g·L－1和1 g·L－1左右，對該制劑的仿制有較強(qiáng)的借鑒意義。蛋白琥珀酸鐵口服溶液在缺鐵性貧血的兒童中有廣泛的應(yīng)用［7－8］，因此對其中的防腐劑的質(zhì)量控制應(yīng)當(dāng)更加嚴(yán)格［9－10］。本方法有較好的分離度、精密度和重現(xiàn)性，可用于抗貧血新藥蛋白琥珀酸鐵口服溶液的防腐劑的定量分析，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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