Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌中的表達及意義

李美艷

子宮內膜癌(endometrial carcinoma，EC)是起源于子宮內膜腺體的惡性腫瘤，約占生殖道惡性腫瘤的20% ～30%，近年來發病率有明顯上升趨勢［1］。惡性腫瘤的發生、發展、侵襲、轉移是一個復雜的過程，在結直腸癌等惡性腫瘤的侵襲、轉移過程中，Maspin和尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)起著重要作用。但在子宮內膜癌中二者的表達情況，筆者鮮見相關報道。本實驗對我院收治的子宮內膜癌患者進行回顧性分析，并利用免疫組織化學法檢測Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌組織中的表達情況，探討其在子宮內膜癌的發生、發展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院婦科2004年6月至2014年6月初診治療的子宮內膜癌50例，年齡30～75歲，平均年齡49.03歲，中位年齡49.99歲。根據國際婦產科聯盟(FIGO 2009)手術病理分期標準:Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例。組織學分級:高分化(G1)10例，中分化(G2)27例，低分化(G3)13例;肌層浸潤:肌層浸潤深度＜1/2肌層31例，≥1/2肌層19例;淋巴結轉移:術后證實有淋巴轉移10例，無淋巴轉移40例。正常對照組:選擇同期行手術治療并經病理確診的增殖期子宮內膜30例。所有病例術前均未進行放化療及內分泌治療。3組年齡差異均無統計學意義(P＞0.05)。所有標本均用100 ml/L甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，厚4 μm。

1.2 方法 Maspin一抗為兔抗人多克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)，uPA一抗為鼠抗人單克隆抗體(即用型)(福州邁新生物技術有限公司)，SP廣譜超敏試劑盒、PBS緩沖液、DAB酶底物顯色劑均為福州邁新生物技術公司產品。本實驗染色程序嚴格按S-P染色試劑盒說明書操作。

1.3 結果判定 免疫組化結果判斷標準按陽性細胞百分比及陽性細胞染色強弱評分(immunohistochemical scores，IHS)。每張切片均以IHS評價得分。采用雙盲法觀察結果。Maspin和uPA的陽性表達均主要定位于細胞質，以Maspin和uPA在細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性表達。每批染色均同步設立對照，以PBS液代替一抗為陰性空白對照。

1.4 統計學分析 應用SPSS 19.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗、確切概率法和Spearman相關對數據進行分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌組織中的定位Maspin和uPA的陽性表達均主要定位于細胞質，以Maspin和uPA在細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性表達。見圖 1、2。

圖1 Maspin蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP×200)

圖2 uPA蛋白在低分化子宮內膜腺癌中的表達(SP×400)

2.2 Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌中的表達及與臨床生物學行為的關系 Maspin蛋白及uPA蛋白的陽性表達率在手術病理分期，肌層浸潤深度，淋巴結轉移組，之間做比較均有統計學意義(P＜0.05)，但在年齡組陽性表達率無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌中的表達及臨床生物學行為關系 例(%)

2.3 Maspin和uPA蛋白在子宮內膜癌中表達的相關性 Maspin和uPA蛋白的表達呈負相關(r=-0.341，P＜0.05)。見表2。

表2 Maspin和uPA蛋白相關性研究 例

3 討論

Maspin是在正常乳腺上皮細胞中分離得到的，定位于染色體18q21.3，編碼產物為絲氨酸蛋白水解酶抑制劑的一種，是一種腫瘤抑制基因［2］，其的作用不僅表現在可以抑制腫瘤的生長，增加腫瘤細胞的粘附、降低腫瘤細胞的運動，還可以抑制新生腫瘤血管形成。作用機制:(1)誘導細胞凋亡;(2)增加黏附因子的作用;(3)抑制腫瘤新生血管生成;(4)抑制纖維蛋白溶酶原激活物的作用［3，4］。文獻報道顯示:Maspin抑癌作用也表現在口腔癌，結直腸癌等惡性腫瘤中［5］。成少華等采用免疫組化SP法對63例胃癌患者的標本進行研究，結果發現:Maspin在浸潤深度達漿膜外、分化程度較低組、臨床分期晚、淋巴結轉移組低表達，提示Maspin蛋白表達下調與胃癌的惡性演變有關［6］。本研究結果顯示:Maspin蛋白在增殖期子宮內膜、不典型子宮內膜、子宮內膜癌中表達逐漸降低(86.67%，52.00%，34.00%)，同時發現Maspin與手術病理分期，肌層浸潤深度，淋巴結轉移有無均密切相關，和喬玉環等［7］研究結果基本一致，提示Maspin在抑制子宮內膜癌腫瘤細胞的運動、侵襲、轉移等方面起著重要作用。

UPA基因定位于10號染色體長臂，相對分子質量約55 000，是一種多功能絲氨酸蛋白酶，它可以在正常細胞例如成纖維細胞，單核細胞等細胞中表達，也可以在腫瘤細胞中表達，且和腫瘤細胞的轉移密切相關，其作用機制主要是通過其介導的纖維蛋白溶解系統來實現。uPA與表面受體結合后，可使無活性的纖維蛋白酶原轉化成有活性的纖維蛋白酶，纖維蛋白酶通過直接和間接作用降解細胞外基質，從而促進腫瘤細胞的侵襲、轉移。多項研究顯示:宮頸癌、乳腺癌、胃癌、結腸癌等［8-11］惡性腫瘤的患者組織中uPA水平升高，腫瘤則轉移快，易復發，生存時間短，預后差，故測定uPA的表達水平對判斷腫瘤的預后提供重要依據［12］。有研究對克隆癌的研究中發現，浸潤的腫瘤上皮細胞產生uPAR，然而uPA由鄰近的成纖維細胞樣間質細胞產生［10］。說明uPAR陽性表達的腫瘤細胞誘導鄰近間質細胞產生uPA以降解間質，促使細胞轉移侵襲。本研究發現:uPA在子宮內膜癌組織中表達明顯高于正常組織中(P＜0.05)。通過分析uPA與臨床病理參數間的關系，還發現uPA與臨床病理分期、組織學分化、肌層浸潤深度及淋巴結轉移均有相關性(P＜0.05)，提示uPA參與了子宮內膜癌的發展、轉移等過程，可以作為預測子宮內膜癌侵襲和轉移潛能及預后的指標，此結果與文獻［13］報道一致。

Maspin具有阻止絲氨酸蛋白酶介導的ECM和膠原降解的能力，抑制細胞周圍的uPA對蛋白水解和細胞運動的調節作用，從而阻止細胞浸潤和轉移［14］。張偉等［15］通過在乳腺癌中的研究表明，Maspin蛋白可以使細胞的表面uPA和uPAR水平降低，對uPA起到抑制作用。本研究結果可以看出:在子宮內膜癌中，Maspin的表達明顯降低，而uPA的表達顯著升高，且二者的表達呈負相關，這與文獻報道相符。由此可以推斷，二者可能共同參與子宮內膜癌的發生、發展、浸潤、轉移等過程。

綜上所述，Maspin、uPA蛋白對子宮內膜癌的發生、發展起到一定的作用，對分析腫瘤惡性程度及預后判斷均有意義，二者有可能為子宮內膜癌的早期診斷和臨床治療方案提供新的思路。

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13 Su CK，Yeh KT，Yeh CB，et al.Genetic polymorphism of the plasminogen activator inhibitor-1 is associated with an increased risk of endometrial cancer.J Surg Oncol，2011，104:755.

14 Kumamoto H，Ooya K.Immunohistochemical detection of uPA，uPAR，PAI-1，and maspin in ameloblastic tumors.J Oral Pathol Med 2007，36:488-494.

15 張偉，王瑞月，李娟，等.Maspin和MMP-2在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其臨床意義.中國腫瘤外科雜志，2014，11:225-229.