病理性瘢痕組織中VEGF、CD105表達變化及意義

李云飛，龍曉東，李永忠(德陽市人民醫院，四川德陽618000)

病理性瘢痕組織中VEGF、CD105表達變化及意義

李云飛，龍曉東，李永忠
(德陽市人民醫院，四川德陽618000)

摘要:目的觀察病理性瘢痕組織中VEGF、CD(105)的表達變化，探討其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測47例增生性瘢痕患者(增生性瘢痕組)、22例瘢痕疙瘩患者(瘢痕疙瘩組)瘢痕組織及16例接受整形美容手術者(對照組)正常皮膚組織中的VEGF、CD(105)表達情況及微血管密度(MVD)，并比較三組間的差異。結果瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組標本中VEGF、CD(105)、MVD均高于對照組(P均＜0.05)，瘢痕疙瘩組標本中VEGF、CD(105)、MVD與增生性瘢痕組相比差異無統計學意義。結論病理性瘢痕組織中VEGF、CD(105)呈現高表達，提示異常血管新生參與了病理性瘢痕的發生發展過程; VEGF可能是抗血管新生治療病理性瘢痕增生的有效靶點。

關鍵詞:病理性瘢痕; CD(105);血管內皮生長因子

病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，是皮膚損傷后組織纖維異常增生，肉芽組織過度修復的結果。損傷修復所有階段均伴隨著血管及其生物活性物質的參與，因此血管的生成與重建是創面愈合的關鍵［1］。CD105作為一種良好的血管標記物，在新生血管中有很強的表達而在成熟血管中低表達或不表達，通過CD105計算出的微血管密度(MVD)能較為準確的反映組織中的血管新生狀況［2］。VEGF是目前所知最強的促血管生成細胞生長因子，在血管形成、促進創傷愈合、組織修復及再生等方面起著十分重要的作用［3］。2014年1～3月，我們檢測并比較了增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮膚組織中CD105、VEGF的表達情況及MVD，探討血管新生在病理性瘢痕發生、發展中的作用。現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2008～2013年門診收治的增生性瘢痕患者47例、瘢痕疙瘩22例，分別為增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組。均為單發。增生性瘢痕組男26例、女21例，年齡8～64(34±12.5)歲。瘢痕疙瘩組男14例、女8例，年齡12～58(24.5±14.5)歲。另取16例接受整形美容手術者為對照組，其中男4例、女12例，年齡18～43(25±10.5)歲。均取其手術切除瘢痕組織(對照組為正常皮膚組織)進行檢測。各組標本經甲醛固定、脫水、透明、包埋后4 μm連續切片5張備用。

1.2VEGF、CD105表達檢測采用免疫組化SP法。按CD105、VEGF檢測試劑盒說明書步驟操作。用PBS代替一抗作為空白對照。VEGF陽性染色呈棕黃色，表達于細胞質和細胞核。CD105主要表達于微血管內皮細胞胞質中，被染成棕黃色或棕褐色顆粒。將染色后的切片用Image Pro Plus 6.0行定量分析，分別挑選高倍鏡視野下的表皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞黃染區域作為測量區域(AOI)，測得切片上DAB顯色為棕黃色陽性區域的光密度值，每張切片分別隨機選取10個視野，取其均值即平均光密度值(MOD)表示VEGF、CD105表達強度［4］。

1.3MVD測算在組織切片中，呈現淡黃棕黃或黃褐色單個內皮細胞或內皮細胞簇均作為1個血管計數。CD105標記的MVD計數方法參照Weidner方法［5］，先在低倍鏡下(×100)尋找富含血管的“熱點”區域然后在高倍鏡下(×400)進行血管計數，每張切片選取5個不同的高倍視野計數，取其均值作為單位面積中血管數目的相對值。

1.4統計學方法采用SPSS13.0統計軟件。計量數據用珋x±s表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組、對照組標本中VEGF、CD105、MVD表達見表1。由表1可見，瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組標本中VEGF、CD105、MVD均高于對照組(P均＜0.05)，瘢痕疙瘩組標本中VEGF、CD105、MVD與增生性瘢痕組相比差異無統計學意義。

表1　瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組、對照組VEGF、CD105、MVD比較(±s)

注:與對照組相比，*P＜0.05。

組別　n　VEGF　CD105　MVD(條/HP)瘢痕疙瘩組　47　0.50±0.06*　0.48±0.08*　110.75±5.08*增生性瘢痕組　22　0.48±0.08*　0.46±0.08*　91.67±4.83*對照組16　0.19±0.09　0.17±0.09　16.78±4.64

3　討論

創傷后組織纖維異常增生，肉芽組織過度修復導致病理性瘢痕。這一直是現代醫學研究的熱點。雖然目前對于病理性瘢痕形成的分子生物學機制尚不完全清楚，但在導致其發生的諸多因素中，血管因素越來越受到人們的關注。大量研究顯示，局部微血管的異常增生是造成瘢痕組織增生形成的重要因素［6，7］。

鑒于CD105在新生血管中有很強的表達而在成熟血管中低表達或不表達，通過CD105標記計算出的MVD能較為準確地反映組織中的新生血管的情況。本研究結果顯示，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩組織中MVD明顯高于正常皮膚組織，血管新生現象明顯。相關研究也證實瘢痕增生的程度同微血管流量相關［8］，血液循環豐富的的部位發生病理性瘢痕的概率較循環相對較差的部位增高。瘢痕手術時，處于增生期的創面出血明顯多于成熟期瘢痕。這些均提示局部豐富的微血管同瘢痕組織增生存在著密切的關系［9］。針對新生血管進行抑制可能成為治療瘢痕組織異常增生的一種新途徑。

VEGF是目前已知最強的促血管生成細胞生長因子，在血管形成、促進創傷愈合、組織修復及再生等方面起著十分重要的作用。其生物學功能包括促進細胞增殖、增加血管通透性、促進血管支撐物的形成等［10～12］。本研究結果顯示，病理性瘢痕組織中VEGF表達明顯高于正常組織，結合相關文獻筆者認為其促進瘢痕生成的機制包括以下幾個方面:①VEGF可以促進炎性細胞的聚集，刺激炎性介質的釋放，提高血管通透性，加重炎性反應而導致成纖維細胞增殖及分泌大量膠原，促進病理性瘢痕形成［13］。②成纖維細胞增殖及分泌大量膠原需要消耗大量的氧氣及營養支持，新生血管可以運輸氧氣和營養物質［14］。③VEGF不僅可影響血管內皮細胞增生同時具備促進成纖維細胞增殖的作用［15］。

總之，瘢痕形成是極其復雜的生物學過程，影響的因素眾多。局部微血管的異常增生在其中占有重要作用，VEGF作為創面愈合中微血管生成的關鍵調節因子，不僅能促進新生血管形成，同時作為血管內皮細胞和成纖維細胞的生存因子，對于病理性瘢痕的產生有很強的促進作用，因此以VEGF及其受體作為靶點進一步深入研究將為病理性瘢痕的診斷及治療提供更為理想的手段。

參考文獻:

［1］van der Veer WM，Niessen FB，Ferreira JA，et al.Time course of the angiogenic response during normotrophic and hypertrophic scar formation in humans［J］.Wound Repair Regen，2011，19 (3) : 292-301.

［2］Miyata Y，Mitsunari K，Asai A，et al.Pathological significance and prognostic role of microvessel density，evaluated using CD31，CD34，and CD105in prostate cancer patients after radical prostatectomy with neoadjuvant therapy［J］.Prostate，2015，75(1) : 84-91.

［3］Staton CA，Valluru M，Hoh L，et al.Angiopoietin-1，angiopoietin-2 and Tie-2 receptor expression in human dermal wound repair and scarring［J］.Br J Dermatol，2010，163(5) : 920-927.

［4］Kraan MC，Smith MD，Weedon H，et al.Measurement of cytokine and adhesion molecule expression in synovial tissue by digital image analysis［J］.Ann Rheum Dis，2001，60(3) : 296-298.

［5］Weidner N.Current pathologic Methods for measuring Intratumoral microvessel density within breast carcinoma and othersolid tumors ［J］.Breast Cancer Res Treat，1995，36(2) : 169-180.

［6］黃如林，梁杰，吳志賢.血小板衍生生長因子在病理性瘢痕內的表達與血管生成的關系［J］.廣東醫學，2011，32(4) : 457-460.

［7］潘麗，涂臘根，羅嘉倫.選擇性環氧合酶2抑制劑尼美舒利抑制皮膚瘢痕形成的研究［J］.中國組織工程研究，2012，33:6137-6142.

［8］Bussche L，Harman RM，Syracuse BA，et al.Microencapsulated equine mesenchymal stromal cells promote cutaneous wound healing in vitro［J］.Stem Cell Res Ther，2015，6(1) : 66.

［9］Kumar N，Kumar P，Nayak Badagabettu S，et al.Quantitative fraction evaluation of dermal collagen and elastic fibres in the skin samples obtained in two orientations from the trunk region［J］.Dermatol Res Pract，2014，35(7) : 251-254.

［10］Chappell JC，Bautch VL.Vascular development : genetic mechanisms and links to vascular disease［J］.Curr Top Dev Biol，2010，90: 43-72.

［11］Bates DO.Vascular endothelial growth factors and vascular permeability［J］.Cardiovasc Res，2010，87(2) : 262-271.

［12］Nagy JA，Dvorak AM，Dvorak HF.Vascular hyperpermeability，angiogenesis，and stroma generation［J］.Cold Spring Harb Perspect Med，2012，2(2) : a006544.

［13］Hill LM，Gavala ML，Lenertz LY，et al.Extracellular ATP may contribute to tissue repair by rapidly stimulating purinergic receptor X7-dependent vascular endothelial growth factor release from primary human monocytes［J］.J Immunol，2010，185(5) :3028-3034.

［14］Demidova-Rice TN，Hamblin MR，Herman IM.Acute and impaired wound healing: pathophysiology and current methods for drug delivery，part 2: role of growth factors in normal and pathological wound healing: therapeutic potential and methods of delivery［J］.Adv Skin Wound Care，2012，25(8) : 349-370.

［15］Trisliana Perdanasari A，Lazzeri D，Su W，et al.Recent developments in the use of intralesional injections keloid treatment［J］.Arch Plast Surg，2014，41(6) : 620-629.

(收稿日期:2015-03-29)

文章編號:1002-266X(2015) 22-0067-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R619.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.027