牛病毒性腹瀉黏膜病的流行、診斷和防控

盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫局,黑龍江綏濱 156200)

牛病毒性腹瀉黏膜病的流行、診斷和防控

盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫局,黑龍江綏濱 156200)

牛病毒性腹瀉黏膜病簡稱牛病毒性腹瀉或牛黏膜病,是由牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒引起的一種世界廣為傳播的牛傳染病。本病以發熱、厭食、鼻漏、咳嗽、腹瀉、白細胞數減少以及消化道黏膜發炎、糜爛和淋巴組織顯著損害為特征,尤以腹瀉為其主要臨診表現。

牛病毒性腹瀉;診斷;防控

1 流行特點

本病可感染黃牛、水牛、牦牛、山羊、豬、鹿等動物，家兔可實驗感染。傳染源主要是病畜和隱性帶毒牛。病畜可發生持久性的病毒血癥，其血、脾、骨髓、腸淋巴結等組織以及呼吸道和眼等的分泌物、乳汁、糞便等排泄物均含有病毒，健康牛與病牛或帶毒牛發生直接、間接接觸，經口、消化道、呼吸道感染以及通過胎盤垂直感染、自然交配和人工授精等途徑而傳染。各種年齡都有易感染性，但以2歲以下牛只最敏感，特別是6個月以下的小牛最易發病。豬有自然感染本病的報道，但不出現臨診癥狀。本病常年均可發生，冬季與早春多見，以6～18月齡的犢牛發病率較多。該病在封閉式牛群中可呈暴發式發病，犢牛急性病例可達25%，病死率為90～100%。在疫區只見散發病例，大多數呈隱性感染。

2 臨診癥狀

本病的潛伏期7～10d。本病在牛群中僅見少數輕型病例，多數呈隱性感染，有時也可能出現全群突然發病。6個月至2歲的牛只易發生急性病例。急性病牛主要表現為體溫升高到40.5～41℃，精神委頓，食欲減退或廢絕，腹瀉，流涎，咳嗽，有漿液性或黏液性鼻漏，眼結膜潮流淚，呼吸困難，口腔黏膜充血，唇黏膜、齒齦、頰及舌的兩側出現潰瘍。重癥病例呈現水樣腹瀉，糞便惡臭，帶有腸黏膜或黏性血液，嚴重脫水衰竭而死。慢性病牛臨診癥狀不明顯，主要表現為生長遲緩、消瘦，出現持續或間歇性下病，病程可長達數月，最后因生產性能降低而淘汰。

3 病理變化

尸體消瘦，重度失水，眼窩下陷。腸黏膜出血、水腫、潰瘍和壞死性病變。淋巴結腫大，切口外翻，有渾濁液體流出。特征性損害為食道黏膜糜爛，呈大小不等形狀與直線排列。瘤胃黏膜偶見出血和糜爛。剖檢可見鼻鏡、齒齦、舌、軟腭及硬腭、咽等黏膜形成小的、形狀不規則的淺爛斑。鼻腔內有淡黃色膠胨樣滲出物，氣管內有大量膿性分泌物，肺出血、水腫，切面有干酪樣物；皺胃炎性水腫和糜爛，腸壁水腫增厚，小腸呈急性卡他性炎癥，空腸和回腸有點狀或斑狀出血，黏膜呈片狀脫落；盲腸和大結腸末端有出血條紋，腸淋巴結水腫。

4 實驗室檢驗

牛病毒性腹瀉黏膜病檢疫檢驗方法有直接免疫熒光抗體檢查、微量血清中和試驗。

4.1 材料準備

病毒：本試驗使用的病毒株為Oregon C24，按常規方法在犢牛腎、睪丸（初代或次代）或鼻甲骨細胞上繁殖，待75%細胞出現典型病變時收毒，凍融2次，測定毒價，分裝于小瓶內低溫保存。細胞：按牛原代腎細胞、睪丸細胞、鼻甲骨細胞或MDBK細胞。細胞培養液：為細胞加入10%犢牛血清；細胞維持液：為細胞加入2～3%犢牛血清；血清稀釋液：為細胞中不加血清。溶液pH為7.0～7.2，加入青霉素和鏈霉素，使終濃度為100國際單位（μg）/ml。乙二胺四乙酸鈉-胰酶消化液：按9：1的比例加入0.02%乙二胺四乙酸鈉和0.25%胰酶。24孔平底帶蓋塑料培養板：新的密封的培養板可直接使用；重復使用的培養板需經重鉻酸鉀清潔液浸泡24h，再依次用自來水和雙蒸水沖洗干凈，烘干，紫外線照射1h備用。加樣器：50～200μl調節加樣器。

4.2 實驗方法

（1）定量測定：被檢血清、陽性對照血清及陰性對照血清在試驗前應分別于56℃滅活30min。在微量細胞培養板上加入稀釋液50微升/孔。取被檢血清分別加入一至四排第一孔（每份血清縱向作四排，微量板可橫向或縱向使用）。用多頭加樣器（調至50μl）從每排第一孔橫向連續倍比稀釋到最后一孔，棄去最后一孔中溶液50μl。

用稀釋液將病毒稀釋成每1ml含100個半數感染量的工作液。用多頭加樣器于第二至四排各孔中加病毒工作液50μl，第一排孔中加50微升稀釋液作為血清對照，加蓋于置37℃、5%二氧化碳中感作60min。將生長良好的單層細胞用乙二胺四乙酸鈉-胰酶消化液消化分散后用培養液配制含40萬/ml的細胞懸液。每孔加細胞懸液100μl，加蓋于置37℃、5%二氧化碳中培養6d。從第四天開始觀察結果，于第六天最終判定。

（2）定性測定：被檢血清只做1：5稀釋，其他操作同上。

4.3 結果判定

當細胞對照正常，陰性血清孔對照各孔細胞出現細胞病變，陽性血清對照孔不出現細胞病變，病毒回歸的毒價與原測定的毒價相關必須在±0.5 log10以內，本試驗有效。定量試驗：每份血清同一稀釋度的4個孔中有2個以上孔完全被保護而不出現細胞病變時，該稀釋度即為該血清的抗體滴度。定性試驗：被檢血清在1：5稀釋度時有2孔以上的細胞完全被保護，該血清即為陽性。

4.4 注意事項

第一，被檢血清、陽性對照血清及陰性對照血清在實驗前應分別于56℃滅能30min。第二，如需測定被檢血清的抗體效價，只需先將待檢血清作4倍倍比稀釋后，再按本法進行測定。

5 防控

本病目前尚無有效療法，主要是對癥治療，控制繼發病。嚴禁從疫區購進牛和羊，如引進種牛、種羊時須進行血清學檢查，防止引進帶毒牛、羊，加強檢疫。發病牛要隔離治療或急宰，防止疫情發展。疫區除做好消毒、隔離以外，可定期進行預防注射，目前應用弱毒疫苗和滅活苗來預防和控制本病。疫苗免疫：對威脅較大的牛群應每隔3～5年接種1次。育成母牛和種公牛于配種前3周再接種1次，多數牛可獲得終生免疫。弱毒苗能引起流產和胎兒畸形，妊娠母牛應禁用。

[1] 李健明，馮海峰，時坤，等.牛病毒性腹瀉-黏膜病的流行現狀和

診斷技術研究進展[J].經濟動物學報，2014，（2）：111-115. [2] 周洛.牛病毒性腹瀉流行現狀及診斷防控[J].中國動物保健，

2015，（7）：46-48.

盧方軍（1971—），男，獸醫師，本科。