花生殼木犀草素的研究進展

路立峰，李赫宇，李增緒，鄭丹，呂艷

（1.山東藥品食品職業學院，山東威海264210；2.天津市益倍健生物技術有限公司，天津300457）

花生殼木犀草素的研究進展

路立峰1，李赫宇2，李增緒1，鄭丹1，呂艷1

（1.山東藥品食品職業學院，山東威海264210；2.天津市益倍健生物技術有限公司，天津300457）

對花生殼中木犀草素的提取、純化、含量測定和藥理活性研究進行綜述，并對其進一步開發提出展望。

花生殼；木犀草素；研究進展

花生是世界上最重要的5大油料作物之一，其生產遍及世界各地；花生殼是豆科一年生草本植物落花生（Arachishypogaea L.）的干燥果殼，近年來隨著花生的種植面積在逐年增大，隨之而來花生殼年產量已達450萬t，但大部分被當作燃料燒掉或作廢棄物丟棄，因此花生殼的開發利用潛力巨大，如何合理利用開發花生殼，具有十分重要的現實意義。目前我國對花生殼的綜合利用水平有待提高，充分挖掘并利用花生殼中的成分勢在必行，其將廣泛用于食品、保健品、醫藥和化工等行業。

1提取

1.1 回流提取法

王超等［1］首先通過單因素試驗，考察在影響花生殼中木犀草素的5個提取因素乙醇體積分數、回流溫度、回流次數、回流時間、料液比，確定了回流溫度影響最顯著；然后通過正交試驗，研究乙醇回流提取花生殼中木犀草素的因素影響和工藝條件，并對提取工藝條件進行優化。確定為選擇70%乙醇溶液作溶劑，按照料液比（g/mL）為1∶20，控制溫度85℃，提取1.5 h，木犀草素的提取量可達7.41 mg/g。

1.2 堿處理法

丁愛鳳等［2］針對影響花生殼中木犀草素堿液提取工藝的有關因素，進行單因素分析和正交試驗探討，確定最佳優化工藝條件為：選擇20倍于花生殼重量的0.2 mol/L氫氧化鈉溶液，在95℃下提取2次，每次時間1.0 h。堿提酸沉后，沉淀物用乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，蒸干，出膏率0.64%，干膏中含木犀草素達19.50%。

1.3 萃取法

肖淑娟等［3］選用木犀草素、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈分別作模板分子、功能單體、交聯劑、引發劑，在一定條件下，采用分子印跡技術，合成了木犀草素分子印跡聚合物。再用固相萃取柱（SPE）為固定相，上樣，甲醇為流動相進行洗脫，收集洗脫液，對洗脫液進行印跡聚合物（MIPs）進行識別特性及分離能力的定性分析。結果表明，該印跡聚合物能較好的吸附并選擇木犀草素，所得到的木犀草素96.2%的純度遠遠高出硅膠柱20%，且MIPs-SPE柱穩定性好，洗脫再生后可反復使用。

1.4 超聲提取法

肖淑娟等［4］報道超聲波輔助法提取花生殼木犀草素具有高效、節能、省時的優點，超聲提取后用紫外分光光度法測定其含量，確定最佳工藝條件為：70%乙醇為提取溶劑，料液比為1∶10（g/mL），提取3次，每次15 min。

李洪娟［5］以40目花生殼粉為原料，在單因素試驗基礎上，選取提取時間、料液比、提取溫度、乙醇體積分數等為考察因素，采用L9（34）設計正交試驗，紫外可見分光光度法測定木犀草素含量，計算提取率，考察了在4個影響因素中，料液比＞乙醇體積分數＞提取時間＞提取溫度，并確定了超聲波法提取木犀草素最佳工藝為30倍量70%乙醇60℃下提取30 min。

1.5 纖維素酶法

丁桂峰等［6］用纖維素酶改善花生殼通透性，以乙醇為溶媒，考察了影響因素中的酶解溫度、酶解液pH值、酶用量及酶解時間，確定了纖維素酶法在酶解溫度50℃，酶解液pH值5.2，酶用量0.10%，酶解時間1.5 h時，從花生殼提取的木犀草素比未預處理法的提高將近2倍。

1.6 微波法

熊清平等［7］研究微波輔助提取花生殼中木犀草素的最佳工藝條件。以木犀草素提取率為指標條件，高效液相法測定其含量，應用單因素和正交試驗，分別考察影響微波輔助提取的三個因素：微波時間、料液比及提取時間，篩選最佳工藝條件。結果表明，微波輔助提取木犀草素微波時間2.0 min，料液比1∶6，提取時間4 h時，提取工藝有較好的穩定性。在木犀草素含量、提取率及收率方面，微波輔助提取工藝比傳統的乙醇回流提取工藝更具有優勢。

2純化

周萍等［8］選擇Dl01、AB-8、HPD1O0、HPD400、HPD100（藥用級）、HPD600、DA201等7種型號的大孔吸附樹脂為固定相，水為洗脫液，對花生殼提取液進行洗脫，通過比較洗脫前后總黃酮及木犀草素的含量，考察靜態吸附容量和洗脫率，篩選確定出7種大孔樹脂中Dl01型樹脂對花生殼提取液進行精制純化的效果最佳。Dl01型樹脂純化后，總黃酮提高了近5倍，含量達到56.8%；同時木犀草素提高了近4倍，含量可達9.65%。

3含量測定

3.1 分光光度法

楊增明等［9］對8省17份花生殼藥材利用分光光度法，以木犀草素為對照品，測定總黃酮含量，結果顯示，在17份花生殼藥材中黃酮類成分含量在0.25%～1.42%之間，含量差異較大。

周萍等［10］用三氯化鋁-乙酸鉀比色法測定總黃酮含量，對花生殼中總黃酮建立含量測定方法，結果顯示總黃酮在1.04 μg/mL～10.4 μg/mL范圍內線性關系良好，r=0.999 2，平均加樣回收率100.3%（n=9），所建立的方法操作簡便快速，結果準確可靠；并認為在11份不同產區、年份的花生殼中山東產花生殼的含量最高。

3.2 間接原子吸收法

徐文峰等［11］以木犀草素為對照品，對花生殼進行提取處理后，利用堿式醋酸鉛與木犀草素分子結構上的酚羥基絡合，生成難溶于水的鉛鹽沉淀，再用原子吸收法對上清液中剩余的Pb2+測定濃度，從而間接測定花生殼中木犀草素的含量。此法簡單快速。

3.3 高效液相色譜法

唐麗萍等［12］用甲醇作溶劑超聲處理遼寧、山東等7個省區18份花生殼樣品，以C18鍵合硅膠為填充劑，柱溫30℃，甲醇∶乙醇∶乙酸（50∶50∶1）為流動相，波長254nm波長下進行檢測，結果顯示，在0.174 4 μg～1.744 μg范圍內木犀草素成良好的線性關系，并且在7個省區中山東，河南產的花生殼含有較高的木犀草素含量。

丁愛鳳等［13］用高效液相色譜法對我國8個省區不同品種的120份花生殼樣品（其中45份中間型、31份普通型、23份珍珠豆型、14份龍生型、7份多粒型）進行木犀草素的含量測定。結果表明，在5種類型的花生殼中，中間型、多粒型和珍珠豆型木犀草素含量比龍生型和普通型含量高。

王晴晴等［14］采用Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈和0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長340 nm，柱溫27℃，同時測定花生殼木犀草素、綠原酸和3，4-二咖啡酰奎尼酸含量。結果表明三種成分質量濃度分別在17.25μg/mL～276μg/mL，3.75 μg/mL～60 μg/mL，3.63 μg/mL～58.08 μg/mL范圍內與色譜峰面積呈現良好的線性關系，RSD分別為0.71%，1.49%，0.44%。建立和完善了花生殼資源產業開發中質量標準，此方法具有快速、準確可靠、重現性好的優點。

3.4 熒光法

張志恒等［15］根據木犀草素與人血清白蛋白（HSA）分子中某些氨基酸結合后，引起熒光強度降低、熒光峰位變化，確定木犀草素對HAS的結合。通過木犀草素在不同溫度下對HSA的熒光猝滅作用，遵循Stem-Volmer方程計算，確認靜態猝滅是HSA熒光強度被猝滅的原因，而且有較強的熒光猝滅作用。根據Forster理論，通過計算木犀草素與HSA間的結合常數和結合位點數，說明木犀草素對HSA的猝滅能力較強，主要依賴于疏水能力。同時用同步熒光光譜分析，木犀草素與HSA中的色氨酸結合后，降低了氨基酸殘基的疏水性，是木犀草素對HSA構象產生的原因。

4藥理活性

4.1 體外抗氧化

楊穎等［16］通過建立DPPH、TBA和Xan-XOD 3個體外抗氧化模型，對用70%乙醇提取的花生殼離心后的上清液進行評價，結果顯示，花生殼提取物在清除DPPH試驗中優于BHT的抗氧化效果，其IC50為7μg/mL；花生殼提取物在抗油脂過氧化試驗中表現出了較高的抗氧化能力，其抗亞麻油脂質過氧化效果明顯高于BHT，IC50大豆油中為0.017%，花生油中為1.19%，亞麻油中為0.027%；花生殼提取物在NH2OH-Xan-XOD系統中顯示出清除過氧化氫、超氧自由基和OH的能力，IC50為0.2 mg/mL。木犀草素是花生殼提取物中主要的抗氧化物質，木犀草素含量越高，抗氧化能力越強，抗氧化能力與木犀草素含量成正相關關系。

4.2 體外抗菌

陳春濤等［17］用甲醇回流提取，選取4種有機溶劑（按極性由小到大順序）進行梯度萃取，濾紙片法跟蹤純化組分測定抑菌活性，結果表明乙酸乙酯組分中不僅黃酮類成分含量較高，而且抑菌活性較強，酸堿沉淀法、柱層析法純化后，得到1、2、3 3種化合物。其中1號在3種組分中抑菌范圍最廣、作用最強，2號木犀草素其次，3號最弱。1號在抑制金黃色葡萄球菌、青霉、枯草桿菌和釀酒酵母活性方面作用最強，抑菌譜最廣。而2號僅對枯草桿菌和金黃色葡萄球菌起到一定的抑制作用；3號則對釀酒酵母、金黃色葡萄球菌表現出一定的抑菌活性。

4.3 體外抗炎

張毅等［18］以小鼠單核/巨噬細胞系（RAW264.7細胞）為研究對象，對數生長期的細胞設脂多糖（LPS）處理組（模型組），木犀草素低、中、高劑量處理組和空白對照組，加入藥物后再加入LPS繼續培養，結果表明，木犀草素在LPS誘導下，中高劑量組較低劑量組、對照組能顯著抑制細胞前列腺素（PGE2）的生成；電泳遷移率變動分析（EMSA）檢測，說明中、高劑量木犀草素能顯著抑制NF-kB的DNA結合活性；逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）測定，說明木犀草素愈高，抑制COX-2 mRNA水平愈顯著，Western blot法測定RAW264.7細胞中NF-kB和環氧合酶2（COX-2）蛋白的表達，觀察木犀草素對LPS誘導的RAW264.7細胞核因子kB（NF-kB）和COX-2表達及NF-kBDNA結合活性的影響。木犀草素的抗炎作用可能與其能抑制核內NF-kB的表達和DNA結合活性從而下調COX-2的表達有關。

4.4 抗腫瘤

胡春萍等［19］報道木犀草素對肺癌細胞株A549的生長有顯著的抑制作用，細胞術檢測細胞周期發現隨木犀草素濃度的增大，周期蛋白cyclin A，p-CDC2和p-Rb的表達逐漸抑制，木犀草素能將A549阻滯于G2期。就細胞凋亡率而言，木犀草素處理組明顯高于未處理組，主要依據是Hoechst 33258核染色，AnnexinVFITC/PI雙染后使A549處于凋亡或壞死。木犀草素在促使受JNK磷酸化控制的BAX進入線粒體引起細胞凋亡的同時，還可通過使NF-kB（p65）的磷酸化水平顯著降低，抑制MEKK1使細胞凋亡。細胞經木犀草素、TNF-α刺激后，用免疫熒光染色顯示木犀草素處理后的A549很好的阻滯了受TNF-α刺激的p65入核，使轉錄因子的作用無法發揮，加速細胞凋亡。

王煥等［20］則采用建立模型對照、5-氟尿嘧啶陽性對照、木犀草素實驗組，以肺癌轉移結節總數為指標，考察對小鼠Lewis肺癌和4T1乳腺癌自發性腫瘤轉移和被動轉移；通過計算胸腺指數、脾臟指數，考察對荷瘤免疫的影響。結果表明，木犀草素能顯著減少小鼠Lewis和4T1肺轉移結節數，并明顯抑制轉移，使小鼠的免疫反應得以增強，從而實現抑制腫瘤細胞遷移及免疫調節，達到抗癌目的。

4.5 抗抑郁

劉毅等［21］采用10種應激方法，對小鼠進行慢性不可預知性溫和應激（CUS），建立了抑郁模型，對小鼠行為進行檢測及氧化損傷測定。結果顯示，糖水消耗實驗反應出小鼠“快感缺失”；曠場實驗、懸尾實驗和強迫游泳實驗顯示小鼠緊張程度增加，興趣喪失，表現出對周圍環境絕望，活動能力下降，經木犀草素灌胃后，抑郁樣行為得到改善。氧化損傷測定顯示，提高超氧物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活性，降低丙二醛（MDA）含量，使得氧自由基和過氧化氫清除，小鼠腦組織抗氧化活性提升，氧化/抗氧化平衡改善，應激損傷抑制，是木犀草素治療抑郁的機制。

4.6 鎮痛

劉圓等［22］比較生理鹽水、乙酰水楊酸、木犀草素抗炎鎮痛實驗，對小鼠灌胃給予木犀草素（1 mg/kg/d，ig）后，發現木犀草素能很好地延緩由熱刺激引起的疼痛反應的潛伏期（痛閡值）；同時在10、20 min內木犀草素也能明顯減少對經腹腔注射醋酸后的小鼠扭體次數，抑制率分別為30%、25%；木犀草素能加快吸收，改善血液循環，通過抑制神經末梢，降低刺激敏感性，使二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹及角叉菜引起的大鼠足腫脹癥狀能明顯減輕，木犀草素抗炎鎮痛效果明顯。

4.7 保護心血管

印媛君等［23］采用培養1 d～3 d的乳鼠心肌細胞，作為對照組、模型組、不同濃度的木犀草素預處理組，預處理2 h后，用一定濃度的H2O2氧化損傷2 h，檢測各組噻唑藍MTT值，確定選擇木犀草素預處理組濃度是100 μmol/L。觀察小鼠同組別細胞形態學觀察、心肌細胞搏動頻率測定、Hoechest33342-PI雙染和熒光染料羅丹明Rh123染色，檢測培養上清液乳酸脫氫酶LDH、丙二醛MDA及超氧化物歧化酶SOD活性，表明木犀草素組大、中劑量能較好地保護受H2O2損傷的乳鼠心肌細胞；心肌細胞搏動頻率顯著回升；雙染后呈現藍色細胞系，少見碎核、未見壞死細胞；提高對Rh123的攝取能力，減少細胞線粒體損傷程度，保護氧化損傷的心肌細胞。影響木犀草素作用機制的因素有：心肌細胞活力、心肌細胞膜、抗氧化損傷能力、細胞膜損傷、心肌細胞線粒體膜電位及功能等因素。

4.8 糖尿病

劉濤等［24］對60只采用高脂高糖飲食加腹腔注射鏈脲霉素建立糖尿病模型的雄性大鼠，隨機分為5組，每組12只，木犀草素低、中、高劑量組每日分別灌以不同劑量的木犀草素，模型組每日灌以定量生理鹽水，持續56 d。再建立大鼠大腦中動脈永久性缺血模型，術后24 h斷頭取腦，用細胞凋亡檢測試劑法（TUNEL法）觀察大鼠腦細胞凋亡，原位雜交法測定腦組織HSP70 mRNA及FasmRNA的表達。結果表明，隨木犀草素劑量增大，凋亡細胞呈下降趨勢，抑制糖尿病腦梗死大鼠神經細胞凋亡能力越強；木犀草素對大鼠腦組織HSP70 mRNA表達，與其劑量呈現正相關，劑量越大，HSP70的表達越顯著；對FasmRNA的表達，則呈負相關，劑量越大，FasmRNA表達越不顯著，可較好地保護糖尿病后的腦組織，降低腦梗發生率。

5應用前景

花生殼中含有十分豐富的木犀草素，而木犀草素又具有良好的抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗抑郁、保護心血管等性能，加大對植物資源花生殼的開發力度，變廢為寶，將木犀草素應用在食品中做天然抗氧化劑和防腐劑，具有廣闊的開發前景。

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Research Progress of the Luteolin from Peanutshell

LU Li-feng1，LI He-yu2，LI Zeng-xu1，ZHENG Dan1，Lü Yan1
（1.Shandong Drug and Food Vactional College，Weihai 264210，Shandong，China；2.Tianjin Ubasichealth Nutrition Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China）

The extraction，purification，assay and pharmacological studies of the luteolin from peanutshell and the further research were reviewed.

peanutshell；uteolin；further research

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.041

2015-03-02

路立峰（1980—），男（漢），講師，本科，研究方向：中藥質量控制研究。