CIP2A在宮頸癌中的表達及其臨床意義

車愛文，陳淑蘋，譚旭東，李家梁，馬紅梅

（1.深圳市龍崗區婦幼保健院病理科，廣東 深圳 518172；2.深圳市福田區人民醫院病理科，廣東 深圳 518033）

·臨床病理·

CIP2A在宮頸癌中的表達及其臨床意義

車愛文1，陳淑蘋1，譚旭東1，李家梁1，馬紅梅2

（1.深圳市龍崗區婦幼保健院病理科，廣東 深圳 518172；2.深圳市福田區人民醫院病理科，廣東 深圳 518033）

目的探討CIP2A在宮頸癌(Cervical cancer)、宮頸上皮內瘤變(Cervical intraepithelial，CIN)及正常宮頸組織中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組化S-P法檢測50例宮頸鱗狀細胞癌、34例CINⅠ、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宮頸組織中CIP2A蛋白的表達。結果CIP2A蛋白在宮頸癌中的表達明顯高于宮頸上皮內瘤變及正常宮頸組織，且與宮頸癌淋巴結轉移及臨床分期有關，差異均有統計學意義(P＜0.05)。結論CIP2A在宮頸鱗狀細胞癌中過表達，且與宮頸癌的惡性臨床病理特征密切相關，為將來發展以CIP2A為靶分子的宮頸癌臨床診斷和新的治療策略提供了新的思路。

CIP2A；宮頸腫瘤；免疫組化

宮頸癌是第二常見的婦科惡性腫瘤，最多見的發病年齡為15～44歲[1]，其發生發展是一個多步驟、多基因參與的復雜過程，發病率具有明顯增高趨勢，隨著診斷技術和治療方式的改善，宮頸癌患者的生活質量有所改善，但其5年生存率仍未得到明顯提高，因此需要通過尋找宮頸癌的有效治療靶向標志物來改善患者的預后。

蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A，PP2A)的癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被識別的一種癌蛋白。其通過抑制對c-myc蛋白的去磷酸化作用使c-myc蛋白表達升高，從而導致細胞的惡性轉化，促進細胞的增殖及錨著非依賴性生長，參與腫瘤的形成。已有研究表明，CIP2A在一些實體瘤如頭頸部鱗狀細胞癌、結腸癌、胃癌和乳腺癌中過表達，但CIP2A在宮頸癌中的表達情況及作用機制尚不明確。本實驗利用免疫組化的方法來檢測CIP2A蛋白在宮頸癌中的表達情況，并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集深圳市龍崗區婦幼保健院及深圳市福田區人民醫院2008年1月至2013年12月經活檢、LEEP及手術切除50例浸潤性宮頸鱗狀細胞癌、34例宮頸上皮內瘤變Ⅰ(CINI)、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宮頸組織存檔的蠟塊標本。所有組織切片經HE染色后均經病理學檢查確診，根據國際婦產科聯盟(FIGO，2000年)標準分期，Ⅰ期29例、Ⅱ期17例、Ⅲ期4例；組織分化程度G1、G2、G3分別為27、14、9例；術前均未接受放療、化療；年齡36～71歲，中位年齡53.5歲。標本用40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片，兔抗人CIP2A單克隆抗體凍干粉購自Santa Cruz公司(工作濃度按1:100稀釋)。

1.2 免疫組織化學染色 免疫組化染色采用S-P法，實驗步驟按說明書進行。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。CIP2A的表達主要位于細胞質，以細胞質染為棕黃色物質為陽性。所有染色的片子都要經過兩位病理科專家的分別觀察和打分。打分方法如下：根據免疫組化檢測陽性瘤細胞的百分比打分，分為0分(沒有陽性的腫瘤細胞)、1分(陽性腫瘤細胞為≤25%)、2分(陽性腫瘤細胞為25%～50%)、3分(陽性腫瘤細胞為50%～75%)和4分(陽性腫瘤細胞為75%～100%)；根據免疫組化染色強度打分，分為陰性、弱染色、中度染色和強染色。每張切片最后的得分為兩次評分的乘積，最終記為四種結果：乘積為0，陰性，記為“-”；乘積≤4，低表達，記為“+”；乘積為5～8，中度表達，記為“++”；乘積≥大于9，強表達，記為“+++”。如果兩位病理醫師的打分結果不一致，則棄去此數據。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件對相關的數據資料進行統計學處理。各組間樣本率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05確定為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CIP2A蛋白在宮頸組織各種病變中的表達情況 CIP2A免疫組化的陽性表達主要為棕黃色顆粒，在細胞質和細胞核均有表達，但在胞質中的信號更強。50例宮頸鱗狀細胞癌中CIP2A陰性表達16例(32%)，弱陽性9例(18%)，陽性17例(34%)，強陽性8例(16%)，CIP2A在12例正常宮頸組織、34例CINⅠ及40例CINⅡ組織陽性表達率均為0，與宮頸癌之間(χ2=16.71，χ2=14.67，χ2=14.96，P＜0.05)差異均有統計學意義；在45例CINⅢ中有6例表達，陽性表達率為13.3%(如圖1～圖4)，與宮頸癌之間(χ2=11.61，P＜0.05)差異有統計學意義(見表1)。

2.2 CIP2A蛋白表達水平與宮頸癌臨床病理特征分析 CIP2A蛋白表達與年齡無關，與腫瘤分期、腫瘤大小、組織學分級及轉移均有關，見表2。

圖1 CIP2A在CINⅠ中的表達(×100)；圖2 CIP2A在CINⅡ中的表達(×100)；圖3 CIP2A在CINⅢ中的表達(×200)；圖4 CIP2A在宮頸癌中的表達(×200)

表1 CIP2A蛋白在宮頸組織各種病變中的表達情況（例）

表2 CIP2A蛋白的表達與宮頸癌臨床病理特征的關系[例（%）]

3 討論

CIP2A(Cancerous inhibitor of PP2A)也稱為KIAA1524，定位于3號染色體上，是近年來識別的能夠抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白，與多種基因蛋白如PP2A、myc等相互作用而發揮其功能，其可以通過抑制PP2A的B56α調節亞基對癌蛋白c-myc第62位絲氨酸的脫磷酸化作用，從而穩定c-myc蛋白二元磷酸化結構，抑制c-myc蛋白被泛素化水解。同時，c-myc作為核轉錄調節因子又能夠調節CIP2A mRNA轉錄水平的變化，從而形成一個正反饋環路[2-3]。細胞學實驗進一步證實[4]，CIP2A在維持細胞表形轉化，促進細胞增殖和體內腫瘤生長方面起關鍵作用。CIP2A的過度表達可以阻止細胞衰老，促進細胞轉化和增殖[5]。由于其在良性組織中不表達或低表達，而在實體腫瘤及骨髓增生異常綜合征中均有高表達，如在人類頭頸部鱗狀細胞癌[4]、結腸癌[4]、胃癌[5-6]、乳腺癌[7]、肝癌[8]以及非小細胞肺癌[9]中存在高表達。最近新的研究顯示CIP2A還能在慢性粒細胞白血病中高表達[10]，因此，推測CIP2A可能參與腫瘤的發生、發展，被列為一種新的癌候選基因。目前研究發現，CIP2A在不同的實體腫瘤中表達和預后均不同[11]。本研究顯示，50例浸潤性宮頸鱗狀細胞癌中陰性表達16例(32%)，弱陽性9例(18%)，陽性17例(34%)，強陽性8例(16%)，CIP2A在12例正常宮頸、34例CINⅠ、40例CINⅡ組織中不表達，在45例CINⅢ中有6例(13.3%)表達。本研究中CIP2A在約68.0%宮頸癌標本中過表達，與其在胃癌、乳腺癌及喉癌[10]等惡性腫瘤表達相似。推測其致癌作用機制可能是：CIP2A主要通過穩定PP2A介導的c-myc結構來實現。Khanna等[12]也證實了CIP2A在胃癌細胞內的缺失可增加癌細胞的增殖和降低c-myc蛋白的穩定表達；而抑制c-myc可導致CIP2A的mRNA和蛋白表達下降，c-myc也可直接促進CIP2A的基因表達。這說明CIP2A與c-myc具有協同作用，共同促進腫瘤細胞的增殖和生長。此外，CIP2A與c-myc之間的相互作用在乳腺癌、非小細胞肺癌和結直腸癌中也有發現[13-15]。

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，發病呈年輕化趨勢，其發生發展是一個復雜過程，經過上皮非典型增生、原位癌及浸潤癌這一連貫的演變過程。與許多因素有關，例如吸煙、長期口服避孕藥、衣原體感染、高頻性行為、免疫抑制等，但最為重要的誘發因素是高危亞型人類乳頭瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)的持續感染。其中，在宮頸癌患者體內以HPV16和HPV18檢出率最高，兩者總計在60%～80%。過去的研究證實了HPV16、18的E6、E7能誘導宮頸組織正常細胞向癌細胞轉化，并在實現轉化后繼續促進腫瘤細胞的增殖。HPV16、18的這種惡性轉化能力以及促腫瘤細胞增殖能力是通過下調關鍵抑癌基因(例如p53和Rb)的表達和功能的同時，增強原癌基因的表達和功能來實現的[16-18]。近年來，HPV持續感染引起的細胞內的變化仍然是宮頸癌致癌機制領域的研究熱點。本實驗結果顯示，CIP2A其表達高低與宮頸癌的組織分級、臨床分期、淋巴轉移和組織分化有關，以上結果說明CIP2A參與與宮頸癌的發生發展過程，并與宮頸癌的惡性程度相關，推測其作用機制可能是：在HPV16持續感染的情況下，HPV16基因組有機會整合入宿主基因組中，可使E7蛋白的表達升高，E7的升高又促進了的CIP2A表達，表達水平提高的CIP2A通過穩定c-myc蛋白或者其他未知途徑進一步促進了宮頸癌細胞的生長增殖，從而促使腫瘤發展[19]，但其作用機制及相互關系還有待于進一步研究。

綜上所述，CIP2A在宮頸鱗狀細胞癌中的過表達，且與宮頸癌的惡性臨床病理特征密切相關，提示CIP2A基因及其蛋白的異常表達參與了宮頸癌的發生發展。因此，檢測CIP2A在宮頸癌中的表達情況，為將來發展以CIP2A為靶分子的宮頸癌臨床診斷和新的治療策略提供了新的思路。近年來對CIP2A的研究報道也越來越多，但對其具體的分子結構有待解決研究。

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Expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer.

CHE Ai-wen1,CHEN Shu-ping1,TAN Xu-dong1,LI Jia-liang1,MA Hong-mei2.
1.Department of Pathology,the Materal and Child Health Care Hospital of Longgang District of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,the People's Hospital of Futian District of Shenzhen,Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of CIP2A protein in cervical cancer,cervical intraepithelial and normal cervical tissue.MethodsThe expressions of CIP2A in 50 cases of cervical cancer,34 cases of CINⅠ,40 cases of CINⅡ,45 cases of CINⅢand 12 cases of normal tissues were assessed by immunohistochemical S-P method.ResultsThe expression of CIP2A protein in cancer tissues was significantly higher than those in CIN tissues and normal tissues(P＜0.05)and closely correlated with TNM stage and metastasis.ConclusionCIP2A is overexpressed in cervical squamous cell cancer and closely correlated with the malignant clinicopathologic feature of cervical cancer.Therefore,CIP2A,as a target molecule,may provide a new thought for the clinical diagnosis and treatment strategy of cervical cancer.

CIP2A;Cervical cancer;Immunhistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2015）02—0266—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.02.0095

2014-07-05)

車愛文。E-mail：ruochenxiong@163.com