甲狀腺癌患者血清Hpa、uPA檢測(cè)及其臨床意義

李建業(yè)，魯 凱，姚壯凱，耿 強(qiáng)，張哲雄，孫志超

(連云港市第二人民醫(yī)院 蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港醫(yī)院普外科，江蘇 連云港 222023)

甲狀腺癌患者血清Hpa、uPA檢測(cè)及其臨床意義

李建業(yè)，魯 凱，姚壯凱，耿 強(qiáng)，張哲雄，孫志超

(連云港市第二人民醫(yī)院 蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港醫(yī)院普外科，江蘇 連云港 222023)

目的檢測(cè)甲狀腺癌患者血清乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)和尿激酶型纖溶酶原激活劑(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)含量，探討其在甲狀腺癌診斷中的價(jià)值。方法采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）測(cè)定38例甲狀腺癌患者，37例良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者和30例健康人對(duì)照組的血清Hpa和uPA水平，并比較各組之間的差異。結(jié)果甲狀腺癌組Hpa、uPA濃度水平明顯高于其他兩組，其差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而良性甲狀腺結(jié)節(jié)組與正常對(duì)照組比較則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。血清中Hpa濃度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清中的uPA濃度明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Hpa/uPA的曲線下面積為0.812，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌的診斷價(jià)值大于Hpa和uPA單獨(dú)檢測(cè)(P＜0.05)。結(jié)論血清Hpa和uPA聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺良惡性腫瘤的鑒別和預(yù)測(cè)是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面有一定的臨床價(jià)值。

甲狀腺惡性腫瘤；良性甲狀腺結(jié)節(jié)；乙酰肝素酶；尿激酶纖溶酶原激活物

研究顯示乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)、尿激酶纖溶酶原激活物(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移以及預(yù)后有密切關(guān)系[1-3]，但是探討血清中Hpa和uPA聯(lián)合檢測(cè)與甲狀腺腫瘤關(guān)系方面研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)甲狀腺癌患者術(shù)前血清中Hpa、uPA的表達(dá)，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2014年1月兩年間我院普外科甲狀腺結(jié)節(jié)手術(shù)患者75例，乳頭狀甲狀腺癌38例，平均年齡46.11歲，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例。甲狀腺良性結(jié)節(jié)37例，平均年齡50.33歲，其中甲狀腺囊腺瘤17例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫20例。選取健康志愿者30例作為對(duì)照組，平均年齡37.01歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)因甲狀腺結(jié)節(jié)入院行甲狀腺結(jié)節(jié)手術(shù)的患者。(2)根據(jù)血促甲狀腺激素(Thyroid stimulating hormone，TSH)、三碘甲狀腺原氨酸(Triio-dothyronine，T3)、四碘甲狀腺原氨酸(Tetraiodothyronine，T4)、甲狀腺球蛋白抗體(Thyroglobulin antibody，TGAb)甲狀腺球蛋白抗體、甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)等排除患有甲狀腺功能亢進(jìn)癥、甲狀腺功能減退癥、毒性彌漫性甲狀腺腫及橋本甲狀腺炎等自身免疫性甲狀腺疾病者。(3)無(wú)肝腎疾病、心腦血管疾病、胃腸道疾病等重大疾病史，無(wú)其他系統(tǒng)惡性腫瘤。(4)術(shù)前未接受手術(shù)、放療、化療等抗腫瘤治療。(5)排除甲狀腺癌微小癌。

1.3 標(biāo)本采集 血清標(biāo)本均于術(shù)前收集。所有受試者空腹8 h以上，采集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組新鮮外周血6ml，3 000 r/min離心15min，取上清液1ml分裝后標(biāo)本儲(chǔ)存于-80℃深低溫冰箱凍存?zhèn)溆弥翜y(cè)定。標(biāo)本采集、貯存受本院科學(xué)技術(shù)委員會(huì)監(jiān)督、指導(dǎo)。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑及檢測(cè)方法 人乙酰肝素酶(Hpa)ELISA試劑盒(BYS10425B)購(gòu)自博研生物科技有限公司上海分公司；尿激酶型纖溶酶原激活物uPA ELISA試劑盒(EK0535)購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；酶標(biāo)儀(AP-960)為日本協(xié)和藍(lán)怡。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定Hpa及uPA表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說(shuō)明操作，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出血清Hpa與uPA含量。

2 結(jié)果

2.1 不同組受試者血清中Hpa、uPA水平比較 采用方差分析比較三組Hpa、uPA濃度水平，甲狀腺癌組Hpa、uPA濃度水平明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；良性甲狀腺結(jié)節(jié)組與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。血清中Hpa濃度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血清中uPA濃度淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表1和表2。

表1 不同組血清中Hpa、uPA含量比較(±s)

表1 不同組血清中Hpa、uPA含量比較(±s)

組別 例數(shù)Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)甲狀腺癌組良性甲狀腺結(jié)節(jié)組正常對(duì)照組F值P值38 37 30 89.36±7.21 41.23±4.36 40.81±5.17 2169.633 0.000 1678.63±413.27 858.13±127.39 891.59±113.21 280.421 0.000

表2 淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與血清中Hpa、uPA含量的關(guān)系(±s)

表2 淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與血清中Hpa、uPA含量的關(guān)系(±s)

組別 例數(shù)Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組t值P值18 20 90.23±6.21 88.79±7.31 0.625 0.538 1978.43±313.17 1384.15±213.27 10.458 0.000

2.2 Hpa與uPA診斷甲狀腺癌效能比較 血清Hpa診斷的樣本工作特性曲線(ROC)下AUC為0.694，與uPA的ROC曲線下AUC(0.713)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=1.413，P＞0.05)，而血清Hpa與uPA聯(lián)合診斷的ROC曲線下AUC為0.812，明顯高于Hpa或uPA(Z值分別為2.021、2.371，P均＜0.05)。

3 討 論

目前臨床上確診甲狀腺癌的方法主要是依靠術(shù)中冰凍或術(shù)后石蠟切片。針對(duì)甲狀腺癌的診斷以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移方面，尋找特異性的甲狀腺癌腫瘤標(biāo)記物是近年來(lái)學(xué)者們所探討的重點(diǎn)。研究顯示Hpa、uPA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移以及預(yù)后有密切關(guān)系。

Hpa發(fā)現(xiàn)于1999年，是一個(gè)內(nèi)源性葡萄糖醛酸酯酶，能特異性識(shí)別并剪切HS側(cè)鏈。在正常組織中，Hpa mRNA在胎盤(pán)之外的成熟非免疫組織中均不表達(dá)，但在惡性腫瘤細(xì)胞中普遍高表達(dá)。通過(guò)檢測(cè)腫瘤患者血清中乙酰肝素酶含量，探討二者關(guān)系的文獻(xiàn)較多，但是血清中Hpa檢測(cè)與甲狀腺癌關(guān)系的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。涂祥俊[4]通過(guò)對(duì)72例非小細(xì)胞肺癌患者血清Hpa水平和MMP-9水平表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果顯示觀察組患者的血清Hpa和MMP-9水平均明顯高于對(duì)照組，且表達(dá)水平高低與腫瘤TNM分期呈正相關(guān)，提示Hpa和MMP-9對(duì)非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生及發(fā)展有重要作用。Tang等[5]應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)健康婦女、良性和惡性乳腺疾病患者血清MMP-9及HPSE表達(dá)水平，結(jié)果顯示血清MMP-9及HPSE在乳腺癌患者明顯高于乳腺良性疾病和健康對(duì)照組，提示MMP-9及HPSE可能進(jìn)一步評(píng)估作為預(yù)測(cè)乳腺癌的進(jìn)展及預(yù)后的生物標(biāo)志物。在本研究首次應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)甲狀腺癌組、良性甲狀腺結(jié)節(jié)組、正常對(duì)照組血清中Hpa濃度進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果甲狀腺癌組Hpa濃度水平明顯高于其他兩組，良性甲狀腺結(jié)節(jié)組與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示患者血清中Hpa含量檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌的診斷具有重要意義，為Hpa作為甲狀腺癌新的腫瘤標(biāo)志物提供理論依據(jù)。本研究試圖探討血清Hpa含量與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。結(jié)果二者之間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示術(shù)前血清Hpa含量尚不能用來(lái)預(yù)測(cè)甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

uPA屬于纖維蛋白溶解系統(tǒng)，是由腫瘤細(xì)胞分泌的一種絲氨酸蛋白酶，與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)[2-3]。沈倩雯等[6]通過(guò)測(cè)定結(jié)直腸癌患者血漿中uPA以及CEA濃度，發(fā)現(xiàn)作為早期診斷，uPA好于CEA，血漿UPA、CEA聯(lián)合檢測(cè)，診斷的準(zhǔn)確性更好。丁峰[7]采用ELISA法檢測(cè)血清中uPA含量顯示正常乳腺細(xì)胞組、良性病變細(xì)胞組和乳腺癌細(xì)胞組中uPA值逐漸增高，uPA與腫瘤的分化程度相關(guān)。組織分化越差，uPA濃度越高，這也提示uPA的濃度變化可能在乳腺癌的診斷中發(fā)生著重要作用，其對(duì)乳腺癌的早期診斷和判斷預(yù)后意義重大。在本研究顯示，甲狀腺癌組血清uPA濃度水平明顯高于其他兩組，良性甲狀腺結(jié)節(jié)組與正常對(duì)照組比較差異無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示患者血清中uPA含量檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌的診斷具有重要意義。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清uPA濃度高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示術(shù)前血清uPA含量可以用來(lái)預(yù)測(cè)甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示血清Hpa、uPA檢測(cè)與甲狀腺癌診斷關(guān)系密切。在診斷效能方面，本研究用ROC曲線評(píng)估了血清Hpa和uPA水平作為早期診斷甲狀腺癌的臨床可行性，結(jié)果顯示，兩者聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺癌優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)，且具有更高的敏感性和特異性。當(dāng)然，可能由于樣本例數(shù)的關(guān)系，在血清Hpa水平與甲狀腺癌是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系上存在偏差，術(shù)前血清Hpa含量能否用來(lái)預(yù)測(cè)甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，還需要進(jìn)一步研究。

[1]Zheng L,Jiang G,Mei H,et al.Small RNA interference-mediated gene silencing of heparanase abolishes the invasion,metastasis and angiogenesis of gastric cancer cells[J].BMC Cancer,2010,5(10): 33.

[2]李建業(yè),苗永昌,夏春咸,等.結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者血清HGF、uPA檢測(cè)及其臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué),2013,24(2):218-219.

[3]Wolff C,Malinowsky K,Berg D,et al.Signalling networks associated with urokinase-type plasminogen activator(uPA)and its inhibitor PAI-1 in breast cancer tissues:new insights from protein microarray analysis[J].J Pathol,2011,223(1):54-63.

[4]涂祥俊.非小細(xì)胞肺癌患者血清Hpa和MMP-9水平檢測(cè)及臨床意義[D].瀘州:瀘州醫(yī)學(xué)院,2013.

[5]Tang D,Piao Y,Zhao S,et al.Expression and correlation of matrix metalloproteinase-9 and heparanase in patients with breast cancer [J].Med Oncol,2014,31(7):26.

[6]沈倩雯,金冶寧.UPA，PAI-1在結(jié)直腸癌血漿中的測(cè)定及其臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2010,18(5):938-941.

[7]丁 峰.血清中尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)在女性乳腺癌診斷中的應(yīng)用[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2010.

Detection and clinical significance of serum Hpa and uPA in thyroid carcinoma.

LI Jian-ye,LU Kai,YAO Zhuang-kai,GENG Qiang,ZHANG Zhe-xiong,SUN Zhi-chao.Department of General Surgery,the Second People's Hospital of Lianyungang City,the Affiliated Lianyungang Hospital of Bengbu Medical College,Lianyungang 222023, Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo explore the clinical significance of serum Hpa and uPA detection in patients with thyroid Carcinoma.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was applied to detect the expression of Hpa and uPA in serum of 38 cases of thyroid carcinoma(thyroid carcinoma group)and 37 cases of patients with benign thyroid nodules(benign thyroid nodules group),30 normal persons(the control group).ResultsHpa and uPA levels in thyroid carcinoma group were significantly higher than those in other two groups(P＜0.01),but there was no statistically significant difference between benign thyroid nodules group and the control group(P＞0.05).The expression of Hpa showed no significant difference between the patients with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis(P＞0.05),but the expression of uPA in patients with lymph node metastasis was significantly higher than those without lymph node metastasis(P＜0.05).The area under curve(AUC)of the combination of Hpa/ uPA was 0.812,which was significantly higher than that of Hpa or uPA alone(bothP＜0.05).ConclusionThe combined detection of Hpa and uPAmay have certain application value for the early diagnosis of thyroid carcinoma.

Thyroid carcinoma;Benign thyroid nodules;Heparanase;Urokinase plasminogen activator

R736.1

A

1003—6350（2015）04—0532—03

2014-07-18)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.04.0192

連云港市“科教興衛(wèi)工程”青年科技項(xiàng)目（編號(hào)：Q1206）

李建業(yè)。E-mail：lijianye02101@sina.com