八月桂花籽的化學成分研究

喬春林，秦玉琴，張春燕，張 旭，白雪梅，周奮進，李珊憶，黃 靜

(四川大學華西藥學院，四川 成都 610041)

桂花，亦稱木犀、山桂、巖桂，屬木犀科(Oleaceae)木犀屬植物，是主要分布于中國大陸長江流域及其以南地區的特有植物，資源十分豐富［1］。八月桂(Osmanthus fragrans‘Bayuegui’)為桂花種下的一個類群，包括金桂、銀桂、丹桂。

桂花植物的花、果實、籽、枝干、根或根皮均具有藥用價值［2－3］。其中關于桂花籽的藥用情況，如《本草綱目》中記載為:桂花籽，味甘、辛，性溫，能暖胃、平肝、益胃、散寒;《植物名實圖考長編》中記載為能治心痛以及《江蘇藥材志》中記載“暖胃，平肝，益腎，散寒，止噦”。

Chart 1

目前，有關桂花植物的化學成分有一定研究，康文藝等［4］總結了截止2008年，從桂花植物中已發現的化合物約有45種，分別屬于環烯醚萜類、木脂素類、酚類、苯乙醇類、苯丙素類等，主要來自于金桂、銀桂的樹皮或樹葉。有關桂花籽的化學成分研究，僅見李異政［5］報道的從桂花籽中分離出6個化合物，但該文中未注明桂花品種。

鑒于桂花植物資源的豐富和藥用價值，本課題組開展了對桂花植物的系統研究。在前期，本課題組首先對桂花家族中的一新變種日香桂的花和根進行了研究［6－9］，發現了一些有意義的化合物。為了更多地了解桂花植物的化學成分以及為闡明桂花植物的藥用物質，本文以八月桂花籽為研究對象，開展了系統的化學成分研究。利用多種柱層析法(硅膠，RP-18反相，MCI，Sephadex LH-20)和重結晶法從八月桂花籽的95%乙醇提取物中分離出9個單體化合物［熊果酸(1)，苯甲酸(2)，對羥基苯乙醇(3)，β-谷甾醇(4)，β-胡蘿卜苷(5)，紅景天苷(6)，紅景天苷酯(7)，(－)-methylelenolate(8)和 4，4'-二甲基-3，3'-二甲氧羰基-5，5'-(1″-甲基-1，3″-丙基)-二吡啶(9)］(Chart 1)，其結構經1H NMR，13C NMR，DEPT，HMQC和HMBC確證。1～9均為首次從八月桂花籽中分離得到;7～9為首次以天然產物形式分離得到。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

ACE200型和Varian INO-VA400/54型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內標);Sephadex LH-20凝膠柱(MCI樹脂，RP-18反相硅膠)，薄層層析硅膠GF254和柱層析用硅膠G(100目～200目和200目～300目)，青島海洋化工有限公司。

八月桂花籽，2012年采自四川省江油市，由黃靜教授鑒定為八月桂花(Osmanthus fragrans‘Bayuegui’)籽;其余所用試劑為分析純。

1.2 提取與分離

將干燥八月桂籽粗粉16 kg用石油醚(60℃ ～90℃)脫脂后，再用95%乙醇回流提取(5×2 h)。過濾，濾液減壓濃縮得粗浸膏2.9 kg。粗浸膏用2%鹽酸溶解，過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層，減壓脫溶得浸膏A 646.6 g。乙酸乙酯萃取后的酸水層用5%氫氧化鈉溶液調至pH 9～11，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層，脫溶得浸膏 B 103.5 g。

浸膏A 646.6 g經硅膠柱層析［梯度洗脫劑:A=V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=1 ∶0～0 ∶1］洗脫得7個部分(A1～A7)。A3經硅膠柱層析(梯度洗脫劑:A=30∶1～4∶1)洗脫得4個部分(A3-1～A3-4)。A3-2經減壓濃縮，放置析晶，過濾，濾餅用甲醇重結晶得2 19 mg。A3-3經硅膠柱層析［梯度洗脫劑:B=V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1 ∶0～1 ∶1］分離得1 8 mg。A3-4減壓濃縮，放置折晶，過濾，濾餅用甲醇重結晶得4 87 mg。A7經硅膠柱層析(梯度洗脫劑:A=20∶1～1∶1)分離得白色粉末，用甲醇重結晶得5 102 mg。

浸膏B 103.5 g經硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=1∶0～0∶1)分享得 5個部分(B1～B5)。B1經多次硅膠柱層析［梯度洗脫劑:C=V(石油醚)∶V(丙酮)=50 ∶1～10 ∶1］分離得8 228 mg。B2減壓濃縮后，放置析晶，過濾，濾餅干燥后用甲醇重結晶得3 851 mg。濾液經多次硅膠柱層析(梯度洗脫劑:C=30∶1～5∶1)分離得9 26 mg。B3經多次硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=50∶1～20∶1)分離，用甲醇重結晶得7 43 mg。B5經硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=30∶1～1∶1)分離，甲醇重結晶得 6 2.7 g。

2 結構鑒定

1:白色無定形粉末(10%硫酸/乙醇顯紫紅色);1H NMR δ:0.67(s，3H，25-H)，0.73(d，J=13.2 Hz，3H，29-H)，0.81(d，J=6.0 Hz，3H，30-H)，0.85(s，3H，23-H)，0.87(s，3H，24-H)，0.89(s，3H，26-H)，1.04(s，3H，27-H)，4.29(brs，1H，3-H)，5.15(s，1H，12-H);13C NMR δ:38.4(C1)，27.1(C2)，77.0(C3)，39.1(C4)，54.9(C5)，18.1(C6)，32.8(C7)，38.5(C8)，47.1(C9)，36.4(C10)，23.9(C11)，124.7(C12)，138.3(C13)，41.8(C14)，27.7(C15)，23.0(C16)，47.0(C17)，52.5(C18)，38.7(C19)，38.6(C20)，30.3(C21)，36.7(C22)，28.4(C23)，15.2(C24)，15.4(C25)，17.0(C26)，23.4(C27)，178.4(C28)，16.4(C29)，21.2(C30)。NMR 數據與文獻［10－11］數據吻合，故鑒定1為熊果酸。

2:無色針晶(重結晶溶劑甲醇);1H NMR(CDCl3)δ:8.14(d，J=7.5 Hz，2H，2，6-H)，7.49(t，J=7.5 Hz，2H，3，5-H)，7.63(m，1H，4-H)。上述NMR數據與文獻［12］數據吻合，故鑒定2為苯甲酸。

3:無色針晶(三氯化鐵/鐵氰化鉀顯色反應呈陽性示存在酚羥基);1H NMR δ:2.59(t，J=7.2 Hz，2H，7-H)，3.52(dt，J=7.2 Hz，5.4 Hz，2H，8-H)，4.56(t，J=5.4 Hz，1H，CH2OH)，6.65(d，J=8.4 Hz，2H，3，5-H)，6.98(d，J=8.4 Hz，2H，2，6-H)，9.11(s，1H，OH);13C NMR δ:155.7(C4)，129.9(C2，6)，129.7(C1)，115.2(C3，5)，62.9(C8)，39.6(C7)。上述數據與文獻［13］數據吻合，故鑒定3為對羥基苯乙醇。

4:無色針晶(甲醇);Liebermann-Burchard反應呈陽性，顯示該化合物為三萜或甾體類化合物。將4與β-谷甾醇對照品薄層色譜對照，多種溶劑系統展開，兩者的Rf值均一致，斑點顏色相同故鑒定為β-谷甾醇。

5:白色粉末(甲醇);Libermann-Burchard反應陽性，Molish反應陽性;1H NMR δ:譜圖在高場區顯示6個CH3信號［δ:0.65(s，3H，18-H)，0.79 ～0.84(m，9H，26，27，29-H)，0.91(d，J=6.4 Hz，3H，21-H)，0.96(s，3H，19-H)］，一個烯氫信號［δ:5.33(brs，1H，6-H］，一組糖的端基信號［4.22(d，J=7.6 Hz，1H，1'-H)］以及一個含氧取代氫信號［δ:3.43(m，1H，3-H］。其NMR數據與文獻［8］數據吻合。與 β-胡蘿卜苷對照品共薄層，多種溶劑系統實驗，Rf值一致，且斑點顏色相同，故確定5為β-胡蘿卜苷。

6:無色方晶(甲醇);1H NMR δ:9.16(s，1H，p-OH)，7.04(d，J=8.1 Hz，2H，2，6-H)，6.66(d，J=8.1 Hz，2H，3，5-H)，4.80 ～ 5.00(m，3H，2'，3'，4'-OH)，4.48(t，J=5.7 Hz，1H，6'-OH)，4.16(d，J=7.8 Hz，1H，1'-H)，2.90～3.90(m，8H，2'～6'-H)，2.73(m，2H，7-H);13C NMR δ:128.8(C1)，130.0(C2，6)，115.2(C3，5)，155.8(C4)，35.1(C7)，70.3(C8)，Glc:103.0(C1')，73.7(C2')，77.0(C3')，70.2(C4')，77.1(C5')，61.3(C6')。以上數據與文獻［14］數據吻合，故鑒定6為紅景天苷。

7:白色粉末(重結晶溶劑甲醇);1H NMR δ:9.16(s，1H，p-OH)，7.03(d，J=8.4 Hz，2H，2，6-H)，6.66(d，J=8.4 Hz，2H，3，5-H)，5.14(d，J=5.2 Hz，1H，1'-H)，5.03(m，2H，8-H)，4.24(m，2H，7-H)，3.28 ～4.14(m，4H，2'～5'-H)，2.90 ～3.26(m，3H，2'～4'-OH)，2.73(t，J=6.4 Hz，2H，6'-H)，2.00(s，3H，CH3CO);13C NMR δ:129.0(C1)，130.1(C2，6)，115.4(C3，5)，155.9(C4)，35.2(C7)，70.4(C8)，170.7(CO)，21.1(CH3)，Glc:103.3(C1')，73.9(C2')，76.8(C3')，70.4(C4')，73.7(C5')，64.1(C6')。上述數據與文獻［15］數據吻合，故鑒定7為紅景天苷酯。

8:無色油狀液體，［α］20D－ 94.3°(c 0.698，CHCl3);1H NMR(CDCl3)δ:9.65(s，1H，8-H)，7.64(s，1H，6-H)，4.21(q，J=6.0 Hz，1H，2-H)，3.73(s，3H，13-H)，3.70(s，3H，12-H)，3.39(m，1H，4-H)，2.93(dd，J=16.4 Hz，3.0 Hz，1H，9a-H)，2.27(dd，J=16.4 Hz，11.1 Hz，1H，9b-H)，2.65(s，1H，3-H)，1.58(d，J=6.0 Hz，3H，7-H);13C NMR(CDCl3)δ:199.5(C8)，156.6(C6)，106.5(C5)，28.0(C4)，38.3(C9)，171.6(C10)，69.4(C2)，50.8(C3)，166.9(C11)，17.9(C7)，51.4(C12)，51.8(C13)。上述數據與文獻［16］數據吻合，故鑒定8為(－)-methylelenolate。

9:白色無定形粉末;碘化鉍鉀試劑檢測呈橙紅色，示該化合物為生物堿類;1HNMR:譜圖顯示了3個甲基信號［δ:1.29(d，J=6.6 Hz，3H，4″-H)，2.44，2.38(s，each，3H，8，8'-H)］，2 個甲氧基信號［δ:3.88，3.87(s，3H each，9，9'-H)］，4個脂肪族氫信號［δ:3.17，2.69，2.54(m，1H each，1″，3a″，3b″-H)，1.89(m，2H，2″-H)］，以及 4 個芳氫信號［δ:8.69，8.67，8.66，8.42(s，1H each，2，2'，6，6'-H)］;13CNMR(DMSO-d6)譜圖顯示了20個碳信號。HMBC譜圖顯示了各種氫信號與碳信號的遠程相關關系，其中主要的相關為3個甲基氫信號［δ 1.29，2.44和2.38 分別與 δ 32.7(C1″)，37.2(C2″)和 141.3(C5);δ 127.0(C3)，141.3(C5)和145.0(C4);δ 127.2(C3')，137.0(C5')和 145.8(C4')等碳信號之間存在遠程相關;以及2個甲氧基氫信號δ 3.88，3.87則分別與 δ 167.4(C7)和 167.1(C7')存在遠程相關。進一步結合1H，13C NMR，DEPT，HMQC和 HMBC譜圖進行分析，并將NMR數據與文獻［17］數據比較，確認兩者基本一致，故鑒定9 為 4，4'-二甲基-3，3'-二甲氧羰基-5，5'-(1″-甲基-1，3″-丙基)-二吡啶。

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