河北涉縣不同采收期柴胡藥材的質(zhì)量研究*

★ 侯芳潔 李英宋軍娜鄭玉光*（.河北中醫(yī)學(xué)院 石家莊05000；.河北醫(yī)科大學(xué) 石家莊05007）

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根，按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”及“南柴胡”，具有解表和里、疏肝解郁、升舉陽氣之功效[1]。迄今已從柴胡中分離鑒定出約60種皂苷類化合物、上百種揮發(fā)油類化合物及多糖類成分[2]。其中，柴胡皂苷是柴胡主要有效成分之一，是柴胡重要的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)，具有廣泛的生物學(xué)活性，尤其以柴胡皂苷d的藥理活性最強(qiáng)[3]。

在第四次全國中藥資源普查過程中，發(fā)現(xiàn)河北省涉縣地區(qū)柴胡分布范圍很廣，但是采收時(shí)間不統(tǒng)一，導(dǎo)致藥材質(zhì)量參差不齊。影響中藥藥效的因素有很多，諸如種質(zhì)、土壤、水質(zhì)、采收時(shí)間、產(chǎn)地加工、炮制等，其中采收時(shí)間對中藥材次生代謝產(chǎn)物的累積有重要影響。不同季節(jié)、不同時(shí)辰、不同生長年限等都會影響中藥質(zhì)量。柴胡一般春秋兩季采挖，由于我國南北、東西氣候的巨大反差，藥材適宜采收期的制定應(yīng)該因地制宜。因此加強(qiáng)中藥材采收期研究，對規(guī)范藥材科學(xué)合理采收加工、保證中藥療效具有重要意義。為此，筆者對不同采收時(shí)間的柴胡樣品進(jìn)行了收集，通過其主要有效成分柴胡皂苷進(jìn)行動態(tài)分析，為明確河北省涉縣地區(qū)柴胡的最佳采收期提供依據(jù)，對保證藥材質(zhì)量和臨床療效具有重要的意義。

1 材料

1.1 藥材 21個(gè)柴胡樣品2013年采自河北省涉縣，經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院鄭玉光教授鑒定為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.的干燥根，見表1。

表1 柴胡樣品

1.2儀器 島津LC-15C高效液相色譜儀（日本島津制作所）；SPD-15C紫外檢測器（日本島津制作所）；CP225D型雙量程電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.3 試劑 柴胡皂苷a（批號110777-201108）和柴胡皂苷d（批號110778-201208）均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇（色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司）；氨水（石家莊市華迪化工工貿(mào)有限公司），水為自制超純水。

2 方法

2.1 對照品溶液的制備 精密稱定柴胡皂苷a對照品7.98 mg、柴胡皂苷d對照品9.94 mg，分別置10 mL容量瓶中，甲醇超聲溶解，定容，得柴胡皂苷a，柴胡皂苷d的甲醇溶液。再分別精密量取配制好的柴胡皂苷a、d各5 mL，同置于10 mL容量瓶中，甲醇定容，得柴胡皂苷a（0.399 mg/mL）、柴胡皂苷d（0.497 mg/mL）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，即為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱定柴胡粉末約0.5 g，至具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL，密塞，30℃超聲處理（功率200W，40Hz）30 min，濾過，用甲醇20 mL分2次洗滌容器和藥渣，洗液與濾液合并，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙廪D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，臨用前過0.22μm微孔濾膜，即得。

2.3 色譜條件 按2010版《藥典》柴胡項(xiàng)下柴胡皂苷含量測定的方法：色譜柱為Sinochrom ODS-APC18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；乙腈-水為流動相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，檢測波長為210 nm，進(jìn)樣量20μL，理論板數(shù)按柴胡皂苷a峰計(jì)算應(yīng)

不低于10000，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取柴胡皂苷a對照品3.45 mg，柴胡皂苷d對照品4.06 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量超聲溶解并定容至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液5，10，20，30，40，50μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程。

2.5 含量測定 取收集的21份不同產(chǎn)地和采收期的柴胡藥材粉末各0.5 g，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。

3 結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，得到柴胡皂苷a的回歸方程為Y=309603.3X+2242.9（r=0.9999），柴胡皂d的回歸方程為Y=369868.3X+7970.86（r=0.9999），實(shí)驗(yàn)表明柴胡皂苷a在1.725~17.25μg呈良好的線性關(guān)系，柴胡皂苷d在2.03~20.3μg呈良好的線性關(guān)系。

3.2 含量測定 21份不同產(chǎn)地和采收期的柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量測定結(jié)果見圖2-圖4。

4 討論

圖2 不同采收期石峰同生柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量

圖3 不同采收期山神廟柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量

圖4 不同采收期石峰永會柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量

4.1 涉縣地處太行山東麓，河北省西南角，山西、河北、河南三省交界處，年降水量590mm，屬半濕潤大陸性季風(fēng)易旱氣候[4]。從柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量測定結(jié)果上可以看出，不同產(chǎn)地與采收時(shí)間柴胡的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量有明顯的差別。

4.2 不同產(chǎn)地的柴胡為同一品種，且皆為一年生柴胡，石峰同生地區(qū)柴胡的柴胡皂苷a，d含量明顯高于其他兩個(gè)產(chǎn)地，因?yàn)槭逋貐^(qū)屬于石灰?guī)r土地，含鈣量比較高，對植株生長和有效成分的積累比較有利。

4.3 在同一產(chǎn)地中，不同采收時(shí)間的柴胡樣品含量差異也較大，在石峰同生地區(qū)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以6月份較高，10月份較低；在山神廟地區(qū)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高，10月份最低；在石峰永會柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高，11月份最低。綜上所述，河北涉縣地區(qū)的柴胡在6、8月份有效成分含量比較高，質(zhì)量較好，可以作為河北涉縣地區(qū)柴胡最佳采收期確定的重要依據(jù)，但是由于不同地區(qū)的最佳采收時(shí)間可能與當(dāng)?shù)貧夂颉⒎N植環(huán)境有關(guān)，還要從多方面考慮。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：263.

［2］謝東浩，蔡寶昌，安益強(qiáng)，等.柴胡皂苷類化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（1）：63-65.

［3］呂曉慧，孫宗喜，蘇瑞強(qiáng)，等.柴胡及其活性成分藥理研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（12）：105-107.

［4］牛永良，張虹，王仁如，等.對涉縣石灰?guī)r山地農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的思考［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2013，12（4）：299-301.