氧化苦參堿預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用及其機制研究

蔣 瑩，李 輝

(1.江西醫學高等?？茖W校，江西 上饒 334000；2.江西中醫藥大學 藥學院，江西 南昌 330004)

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氧化苦參堿預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用及其機制研究

蔣 瑩1，李 輝2

(1.江西醫學高等?？茖W校，江西 上饒 334000；2.江西中醫藥大學 藥學院，江西 南昌 330004)

目的：研究氧化苦參堿對大鼠缺血再灌注心肌的保護作用及其機制。方法：通過結扎左冠狀動脈構建心肌缺血再灌注損傷動物模型。將SD大鼠隨機分為三組：對照組、缺血再灌注組、氧化苦參堿預處理組。光鏡檢查心肌病理變化，測定血清肌酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)活性含量，測定心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。結果：氧化苦參堿預處理組光鏡下心肌細胞變性壞死程度及細胞超微結構改變較之缺血再灌注組顯著減輕；氧化苦參堿預處理組大鼠血清中CK活性顯著降低(P<0.05)，SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性顯著提高(P<0.05)。結論：氧化苦參堿對大鼠冠狀動脈結扎所構建的再灌注心肌損傷有顯著保護作用，可能與改善心肌微循環以及抗氧化自由基生成、減輕鈣超載等機制相關。

氧化苦參堿；缺血再灌注損傷；心肌；細胞凋亡

心肌缺血再灌注損傷病理學機制主要與氧自由基過多、炎癥反應、鈣超載以及細胞凋亡等因素有關[1]。氧化苦參堿(oxymatrine，OMT)是從苦參中提取的一種生物堿，具有諸如抗氧自由基等多種生物活性[2]。本實驗擬考察OMT對大鼠心肌缺血再灌注損傷過程的作用及機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康SD大鼠30只，雄性，體重(230±10)g，購自南昌大學醫學院實驗動物中心。將其隨機分為三組：正常對照組(0.9%氯化鈉2 mL，bid×6 d，ip)、缺血再灌注組(I/R，其他處理同前組)、OMT預處理組(O+I/R；OMT博爾泰力藥業股份有限公司OMT注射液4g/2m，bid×6 d，ip)。第6天處死損傷模型大鼠。

1.2 試劑

氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)試劑盒(南京建成生物工程有限公司)。

1.3 模型構建[3]

通過大鼠心冠狀動脈左前降支結扎法，構建缺血再灌注損傷模型。動物麻醉后氣管插管，呼吸機支持、自左側第1至第3肋開胸后暴露心臟，以乳膠片墊底的0號絲線穿過左前降支中上1/3。除對照組不結扎外所有組別結扎30 min后，松開結扎線恢復灌注。于第6天處死大鼠，取心尖3 mm處心肌標本。

1.4 CK、SOD、Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶測定

實驗結束后，立即于左頸總動脈取血5.0mL測定血清CK、SOD活性。結束后，立即取左室游離心肌組織0.5g，制備組織勻漿，取上清液備用，按試劑盒說明書進行測定。心肌組織中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶用無機磷測定法。

1.5 心肌組織病理學觀察

將心肌置于甲醛溶液(90mL·L-1)中固定，石蠟包埋后常規切片染色，光鏡下觀察病理變化。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 OMT對血清CK、SOD，心肌組織中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影響

缺血再灌注組血清CK活性顯著高于正常對照組(P均<0.01)。OMT預處理組CK顯著低于缺血再灌注組(P<0.05)。與正常對照組相比，缺血再灌注組心肌組織Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性均降低(P<0.05)，OMT預處理組Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均顯著高于缺血再灌注組(P<0.05)。詳見表1。

2.2 光鏡下病理觀察

正常對照組心肌纖維排列整齊，無變性壞死，無腫脹斷裂，未見其他明顯異常(圖1A)；缺血再灌注組則見片狀心肌細胞變性壞死，心肌纖維腫脹斷裂(圖1B)；OMT預處理組心肌組織病變較模型組減輕(見圖1C)。

表1 OMT對血清CK、SOD，心肌組織中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影響

注：與缺血再灌注組比較，#P<0.05。

圖1 大鼠心肌組織病理形態學 (HE,×400)

3 討論

目前認為心肌缺血再灌注損傷是急性心肌梗死后再灌注治療中出現的一種常見病理現象。其主要特征表現為：缺血再灌注后，發生活性氧增加，鈣超載，引起細胞因子釋放，啟動凋亡反應，誘導心肌細胞凋亡，從而引起心肌細胞功能喪失，心臟舒縮功能障礙。SOD是一類廣泛存在于動物體內的金屬酶，其可清除體內在利用氧過程中產生的超氧離子，在生命體的自我保護系統中起著重要作用[4]。氧化苦參堿可減少缺血再灌注引起的ROS產生，從而抑制胞質內鈣升高，使Ca2+轉移到線粒體減少，抑制線粒體通透轉換孔開放和其引起的細胞色素C和凋亡誘導因子(AIF)釋放，從而抑制誘導的細胞凋亡，至于氧化苦參堿抗凋亡的具體信號傳導途徑及機制還有待進一步研究。

綜上所述，氧化苦參堿對大鼠冠狀動脈結扎所構建的再灌注心肌損傷有顯著保護作用，其可能與改善心肌微循環，以及抗氧自由基生成、減輕鈣超載等機制相關，可能是通過其抗凋亡作用來實現的。

[1] ZHAO Z Q，MONIS C D，BUDDE J M，et a1.Inhibition of myocardial apoptosis reduces infarct size and improves regional contractile dysfunction during reperfusion[J].Cardiovas Res，2003(59):132.

[2] 孫文基，謝世昌. 天然藥物成分定量分析[M]. 第1版.北京：中國醫藥科技出版社，2003.

[3] 桂敏，翟宏穎. 菟絲子黃酮對心肌缺血再灌注損傷大鼠Bcl-2、Caspase-3表達的影響[J].中國老年學雜志，2012,32(2):343.

[4] 商蕾，王玲，孫宏麗,等.氧化苦參堿對大鼠急性心肌缺血保護作用的研究[J]. 哈爾濱醫科大學學報,2005,39(2):124-127.

(責任編輯：宋勇剛)

2015-04-06

蔣瑩(1980-)，女，江西醫學高等?？茖W校助理實驗師，研究方向為生理學實驗研究。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0012-01

10.11954/ytctyy.201517006