UHPLC/Q-TOF-MS/MS快速鑒定陳皮化學成分

馬 琳，黃小方，歐陽輝，黃檢平，葉鳳玉，葉喜德*

(1.撫州市婦幼保健院，江西 撫州 344000；2.江西中醫藥大學，江西 南昌 330006；3.上高縣中醫院，江西 上高 336400)

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UHPLC/Q-TOF-MS/MS快速鑒定陳皮化學成分

馬 琳1，黃小方2，歐陽輝2，黃檢平3，葉鳳玉2，葉喜德2*

(1.撫州市婦幼保健院，江西 撫州 344000；2.江西中醫藥大學，江西 南昌 330006；
3.上高縣中醫院，江西 上高 336400)

目的：通過超高效液相色譜-飛行時間質譜(UPLC/Q-TOF-MS/MS)聯用技術，對陳皮化學成分進行鑒定。方法：采用 Welchrom C18色譜柱(100mm×2.1mm，1.7μm)，以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)為流動相梯度洗脫進行色譜分離；質譜采用電噴霧(ESI)離子源，在負離子模式下采集數據，運行時間40min，使用質譜分析軟件Peakview中的目標化合物篩查法，結合保留時間、精確相對分子質量和二級質譜裂解碎片鑒定監測到的化學成分。結果：分離并鑒定出32個化學成分。結論：該方法快速、靈敏度高，可作為鑒定陳皮化學成分的一種有效方法。

陳皮；UPLC/Q-TOF-MS/MS；化學成分

陳皮(PericarpiumCitri Reticulatae)為蕓香科植物橘(CitrusreticulataeBlanco)及其栽培變種的干燥成熟果皮，具有理氣、燥濕、化痰等作用。臨床常用治胸腕脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多等證。現代藥理研究表明，陳皮具有升壓[1]、抗血小板聚集[2]、抗氧化[3]、抗衰老[4]、強心[5]、抗休克[6]、抗過敏[7]、抗菌[8]、抗腫瘤等作用[9-15]。其主要成分為黃酮類，如橙皮苷、柚皮蕓香苷以及其他多甲氧基黃酮(如川陳皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黃酮和紅橘素等)，并含生物堿和揮發油[16-19]等。課題組利用超高效液相色譜與飛行時間質譜聯用(UPLC/Q-TOF-MS/MS)等技術對陳皮化學成分進行了系統分析，共鑒定出32個化學成分。此法分離效果較好，具有較強的分子結構表征能力，為今后陳皮及其同屬中藥的化學成分研究提供了較好的借鑒方法。

1 儀器與材料

超高效液相色譜串聯四級桿飛行時間質譜(ABSCIEX Triple TOF 5600+；加拿大)；島津超高效液相色譜儀(Nexera UPLC LC-30A，日本)，含在線真空脫氣機，高壓二元梯度泵，自動進樣器，柱溫箱；Welch C18色譜柱(100mm×2.1mm，1.7μm，上海月旭科技)；Sartorious BT25S 型十萬分之一電子分析天平(賽多利斯公司，德國)；KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

乙腈、甲醇(色譜純，美國Fisher 公司)；甲酸(色譜純，美國TEDIA 公司)；水為Milli-Q 系統純化水(美國Millipore 公司)，其余試劑為分析純。陳皮由樟樹藥材市場提供，經江西中醫藥大學賴學文教授鑒定陳皮為橘(CitrusreticulataeBlanco)及其栽培變種的干燥成熟果皮。

2 實驗方法

2.1 質譜條件

離子源為電噴霧離子化源(ESI)，負離子模式；質量掃描范圍100～1 500m/z；噴霧電壓：4 500 V，霧化氣溫度：550℃，氣簾氣：50psi，霧化氣和輔助氣：50psi ；去簇電壓(DP)：80eV；采用TOF-MS-IDA-MS/MS 方法采集數據，TOF/MS 一級預掃描和觸發的二級掃描TOF/MS/MS 離子累積時間分別為200、100ms，CE 碰撞能量為45eV，CES碰撞能量疊加為(±15)eV，觸發二級的方法為IDA，多重質量虧損(MMDF)和動態背景扣除(DBS)為觸發二級的條件，滿足該條件的優先進行二級掃描。

2.2 液相條件

流動相：0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，以梯度洗脫，0.1～2.0min，1% B；2～5min，1%～20%B；5～25min，20%～40% B；25～33min，40%～90% B；33～37min，90% B；37.1～40.0min，10%B。采用UPLC Welch C18色譜柱(100mm×2.1mm，1.7μm)，體積流量0.25mL/min，柱溫箱控溫45℃，進樣量2.0μL。

2.3 樣品制備及檢測

稱取陳皮藥材約50.0g，經粉碎后過篩，精密稱取10.0g，過100目篩，放于250mL平底燒瓶中，加入水100mL，在60 ℃水浴下加熱回流提取1h，放冷后真空過濾，藥渣加入100mL水后以同樣的操作提取2次，每次1h，過濾后將濾液合并，減壓濃縮，移至100mL容量瓶內，加水定容，則為樣品原液。精密量取1mL原液，放于100mL容量瓶內，以水定容達刻度，搖勻，采用0.22μm的微孔濾膜過濾，即得。然后采用高效液相色譜-飛行時間質譜(UPLC/Q-TOF-MS/MS)聯用技術對樣品進行檢測。

3 結果

通過 Scifinder 數據庫對陳皮中的化合物進行檢索，得陳皮潛在化學成分數據庫。采用Analyst TF1.6 和Peakview(Version1.2，AB SCIEX)軟件對陳皮提取物的質譜數據進行處理。依據測定相對分子質量與理論精確相對分子質量的偏差小于 5×106的原則，確定各色譜峰對應化合物的分子式，在已建立的陳皮化學成分數據庫中檢索匹配的化合物。

本實驗共鑒定出陳皮色譜峰32個，結果見表1。然后對同分異構體進行鑒別，通過二級質譜獲得化合物的碎片信息，推測出離子裂解狀況，結合數據庫中各個化合物結構，區分同分異構體。

表1 陳皮化學成分的鑒定結果

續表1 陳皮化學成分的鑒定結果

續表1 陳皮化學成分的鑒定結果

4 討論

2010年版的《中國藥典》以索氏提取法，以橙皮甙作為標準，采用石油醚脫色以及甲醇反復回流方法對陳皮成分進行分析，但該法繁瑣，效率低。本實驗基于化合物的精確相對分子質量，分析了陳皮中不同化合物的質譜行為，總結質譜裂解規律，從陳皮提取物中共確定了32個化合物。該方法科學簡便，可省去常規提取方法所耗時間，極大地提高了鑒定成分結構效率，為深入研究陳皮提供了科學依據。但該法也存在不足，如無法提供化合物的幾何構型。我們認為今后在對中藥進行常規化學成分分離之前，應采取UHPLC/Q-TOF-MS/MS方法首先對化合物進行全景掃描，然后對可能的新化合物進行重點分離，這樣就可避免重復地分離大量已知化合物。

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(責任編輯：余 婷)

Identification of Chemical Compositions inPericarpiumCitri Reticulatae by UPLC/Q-TOF-MS/MS

Ma Lin1,Huang Xiaofang2,Ouyang Hui2,Huang Jianping3,Ye Fengyu2,Ye Xide2*

(1.Fuzhou City Maternity and Child Care Service Centre, Fuzhou 344000,China;2.Jiangxi University of Traditonal Chinese Medicine,Nanchang 330004,China;3.Shanggao County in Traditonal Chinese Medicine hospital, Shanggao 336400,China)

Objective:To identify the chemical composition ofPericarpiumCitri Reticulatae by using UPLC/Q-TOF-MS/MS technology. Methods:The separation was performed on UPLC Welch C18column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm), with a mobile phase using 0.1% formic acid (A) and water containing acetonitrile (B) for gradient elution. Q-TOF/MS and electrospray ion (ESI) source were applied for the analysis under the negative ion mode, and the running time was 40 min. Using target compound screening method, the structures of monitored chemical constituents were identified by retention time, exact relative molecular mass, and cleavage fragments of MS/MS. Results:Thirty-two chemical compositions were separated and identified from the methanol extract ofPericarpiumCitri Reticulatae. Conclusion:UPLC/Q-TOF-MS/MS method can identify the main chemical constituents fromPericarpiumCitri Reticulatae rapidly and accurately, which develops a new strategy for identification of the chemical constituents inPericarpiumCitri Reticulatae.

PericarpiumCitri Reticulatae; UPLC/Q-TOF-MS/MS; Chemical Composition

2015-05-10

江西省衛生廳課題(2013A031)；江西中醫藥大學校基金(ZX1014)

馬琳(1978-)，女，撫州市婦幼保健院主管中藥師，研究方向為臨床中藥學。

葉喜德(1977-)，男，博士，江西中醫藥大學講師，研究方向為中藥成分鑒定。

R284

A

1673-2197(2015)19-0033-04

10.11954/ytctyy.201519014