生、炙淫羊藿對腎陽虛小鼠耐寒能力和交配能力研究

熊 瑞，胡昌江，張 美，陳志敏，崔園園

(成都中醫藥大學 藥學院，四川 成都 611137)

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生、炙淫羊藿對腎陽虛小鼠耐寒能力和交配能力研究

熊 瑞，胡昌江*，張 美，陳志敏，崔園園

(成都中醫藥大學 藥學院，四川 成都 611137)

目的：比較淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后對氫化可的松所致腎陽虛模型小鼠耐寒能力和交配能力的影響。方法：采用氫化可的松造成小鼠腎陽虛模型，淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后的水提濃縮物灌胃，交配實驗考察指標為紅外攝像記錄 30min 內小鼠的跨騎潛伏期和跨騎次數，耐寒實驗考察指標為40min后缺氧、-18℃寒冷條件下的存活時間。結果：與正常組比較，淫羊藿炙品高劑量組能明顯提高交配能力(P<0.05)，二仙湯炙品組皆能明顯提高交配能力(P<0.05或P<0.01), 淫羊藿生品中劑量組能明顯縮短潛伏期(P<0.05)；淫羊藿炙品中、高劑量組能明顯提高耐寒能力(P<0.05或P<0.01)，二仙湯炙品組中、高劑量皆能明顯提高耐寒能力(P<0.01)。結論：淫羊藿油炙后能改善腎陽虛小鼠的交配能力和耐寒能力。

淫羊藿；炙品；腎陽虛；交配能力；耐寒能力

淫羊藿，始載于《神農本草經》[1]，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的作用，列為中品。生熟異用是中藥炮制的特色，淫羊藿在中醫臨床上有祛風濕生用、溫腎助陽炙用的傳統用藥經驗。淫羊藿用羊脂油炮制入藥歷史悠久，最早見于《雷公炮炙論》：“凡使(時呼仙靈脾)，需用夾刀去葉、四畔花(枝)盡后，用羊脂相對拌炒過，待羊脂四兩為度也[2]。”羊脂油炙法，從南北朝至現代一直沿用，且為1963-2010版《中華人民共和國藥典》(簡稱《中國藥典》)淫羊藿項下唯一收載的炮制品種。本實驗通過對淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯對腎陽虛小鼠耐寒能力和交配能力進行對比研究，以期為中醫臨床合理用藥提供依據。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，體重18～22g，清潔級，由成都達碩實驗動物有限公司提供(實驗動物生產合格證號：SCXK(川)2008-24)。動物于成都中醫藥大學中藥藥理三級科研實驗室飼養(許可證號：川實動管第015號)，國家中醫藥管理局三級實驗室觀察(NO.TCM-2009-324)。

1.2 藥物與試劑

淫羊藿、黃柏、知母、仙茅、巴戟、當歸均購自荷花池中藥材市場，經成都中醫藥大學生藥教研室盧先明教授鑒定為2010版《中國藥典》收載品種。實驗室前期分別對已購得的淫羊藿(EpimediumbrevicornuMaxim)和箭葉淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)進行入藥標準的考察，結果表明淫羊藿在總黃酮含量、淫羊藿苷含量、醇浸出物等指標上均高于箭葉淫羊藿，且已有文獻[3]報道淫羊藿化學成分較穩定，箭葉淫羊藿種內質量差異較大，故本實驗選擇淫羊藿作為實驗藥物。

氫化可的松(規格100mg/2mL，天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號1103052)；氯化鈉注射液(0.9%，四川科倫藥業股份有限公司，批號M12011117)；乙烯雌酚(合肥久聯制藥有限公司，批號20100920)；金匱腎氣丸(北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠，批號1030582)。

1.3 儀器

LT502 型電子天平(常熟市天量儀器有限責任公司)； AR862A型紅外測溫儀(希瑪SMART SENSOR)；計時秒表(中國卡西歐有限責任公司)；紅外線攝像頭(臺灣多安科技有限公司)。

2 方法與結果

2.1 藥物制備

炙淫羊藿按實驗室前期研究篩選出的最佳工藝條件制得[4]。由于淫羊藿、二仙湯臨床上多以湯劑入藥，故本實驗采用水提液的濃縮物灌胃。淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后，加12倍量水浸泡0.5h，煎煮1h，過濾，濾渣再加12倍量水，煎煮2次，每次1h，過濾，合并藥液，濃縮至相應濃度。金匱腎氣丸懸液制備：劑量參考實驗室前期研究配制(5g·mL-1)，粉碎后過100目篩，制備成濃度為0.25g·mL-1的混懸液。乙烯雌酚混懸液制備:乙烯雌酚片0.5mg碾碎成粉末，用25mL水配制成混懸液[5-7]。

2.2 交配實驗

取健康KM小鼠雄性150只，雌性50只，體重22g～25g。將雄性小鼠按體重隨機分為15組：正常對照組，模型組，金匱腎氣丸組(即陽性組，5g·kg-1)，生品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙湯生品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙湯炙品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每組10只，正常對照組和模型組灌胃純凈水0.4mL/20g，其余各組分別灌胃相應藥物，每天1次，連續30天。從給藥第 4 天開始，除正常對照組皮下注射生理鹽水0.1mL/20g外，其余各組均注射氫化可的松0.1mL/20g，每天1次，連續7天，造模同時連續給藥。于給藥后第30天給藥1h后將雌雄小鼠按(1∶3)比例合籠觀察 30min內交配能力，雌性小鼠于交配前3天按照0.4mL/20g灌胃乙烯雌酚混懸液使之發情時間同步于交配時間。

2.3 耐寒實驗

取健康KM小鼠雄性150只，雌性150只，體重22 g～25g。將雄性小鼠按體重隨機分為15組：正常對照組，模型組，金匱腎氣丸組(即陽性組，5g/kg)，生品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙湯生品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙湯炙品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每組雌雄各10只。正常對照組和模型組灌胃純水0.4mL/20g，其余各組分別灌胃相應藥物，每天1次，連續16天。從給藥第4天開始，除正常對照組皮下注射生理鹽水0.1mL/20g外，其余各組均注射氫化可的松0.1mL/20g，每天1次，連續7天，造模同時連續給藥。第16天給藥(或給水)后60min，將小鼠放入-18 ℃冰箱內，于40min后每隔5min觀察小鼠存活情況，記錄死亡時間，直至所有小鼠全部死亡。

2.4 數據分析

2.5 結果

2.5.1 交配實驗 與模型組相比，淫羊藿炙品高劑量跨騎潛伏時間明顯延長(P<0.05)，跨騎次數極顯著增加(P<0.01)；二仙湯炙品低、中、高劑量組跨騎潛伏期顯著縮短(P<0.05)，二仙湯炙品中、高劑量組跨騎次數顯著增加(P<0.05或P<0.01)。結果提示，雖然生品淫羊藿與炙品淫羊藿、生品二仙湯與炙品二仙湯，在統計學上無差異，但炙品淫羊藿和炙品二仙湯達到一定劑量時可分別在縮短跨騎潛伏時間和增加跨騎次數上表現出差異，而生品淫羊藿或生品二仙湯并未表現出顯著差異，說明炙品淫羊藿在改善交配能力方面，無論單味使用或是納入二仙湯中，皆優于生品淫羊藿。具體結果見表1。

2.5.2 耐寒實驗 與模型組相比，淫羊藿炙品中劑量雄性小鼠死亡時間顯著縮短(P<0.05)，炙品高劑量雌性、雄性小鼠死亡時間皆顯著縮短(P<0.01)；炙品二仙湯中、高劑量雌性、雄性小鼠死亡時間均極顯著縮短(P<0.01)。結果提示，雖然生品淫羊藿與炙品淫羊藿、生品二仙湯與炙品二仙湯在統計學上沒有差異，但炙品淫羊藿及炙品二仙湯達到一定劑量以上時，可在延長死亡時間上表現出顯著差異，生品及生品二仙湯未出現顯著性差異，表明淫羊藿炙品在對耐寒能力有改善作用上，無論是單味使用還納入二仙湯，均優于生品，結果見表2。

組別跨騎潛伏時間(min)跨騎次數(次/30min)正常對照組17.94±3.873.3±1.30模型組27.80±1.32**0.8±0.64**金匱腎氣丸組22.89±2.35#3.2±1.40##生淫羊藿Min23.67±4.101.5±0.70生淫羊藿Mid23.08±4.822.2±1.04生淫羊藿Max25.31±1.972.5±1.20炙淫羊藿Min25.00±2.051.7±0.90炙淫羊藿Mid23.80±2.231.5±0.90炙淫羊藿Max22.99±1.96#3.3±1.16##生品二仙湯Min25.42±2.351.8±1.20生品二仙湯Mid24.42±2.451.8±1.20生品二仙湯Max26.20±2.472.5±0.90炙品二仙湯Min22.07±3.20#2.5±1.00炙品二仙湯Mid22.90±2.33#3.1±0.94#炙品二仙湯Max22.68±1.43#3.8±1.40##

注：30min內未出現跨騎的雄性小鼠，其跨騎潛伏期均按30min計。與正常對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

組別雌性小鼠死亡時間雄性小鼠死亡時間正常對照組101.0±10.288.5±9.5模型組61.0±10.2**57.0±8.0**金匱腎氣丸組84.0±9.0##79.5±9.5##生品淫羊藿Min68.0±5.463.0±6.0生品淫羊藿Mid71.5±6.167.0±6.4生品淫羊藿Max68.5±6.867.5±9.0炙品淫羊藿Min69.0±6.064.5±5.6炙品淫羊藿Mid69.5±4.670.0±5.0#炙品淫羊藿Max74.0±4.2##84.0±6.4##生品二仙湯Min71.5±5.866.5±5.8生品二仙湯Mid69.5±6.565.0±5.0生品二仙湯Max72.0±5.467.5±5.5炙品二仙湯Min69.0±5.266.0±4.2炙品二仙湯Mid84.0±8.2##83.5±5.8##炙品二仙湯Max91.5±9.5##97.0±5.4##

注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

3 討論

采用氫化可的松造模后，與正常對照組比較，小鼠的跨騎潛伏時間明顯延長，跨騎次數明顯減少，說明造模成功。淫羊藿生品與油炙品組比較，無論是單味使用還是納入二仙湯,跨騎潛伏時間和跨騎次數沒有顯著統計學意義, 但炙品淫羊藿有優于生品淫羊藿的趨勢。

動物采用氫化可的松造模后，與正常組比較，小鼠耐寒時間顯著縮短，說明氫化可的松可致模型動物神經系統紊亂、應激反應下降。淫羊藿生品組與炙品組比較，無論單味使用還是納入二仙湯，耐寒時間雖無統計學差異，但炙品有優于生品的趨勢。

傳統藥性理論認為，羊脂油甘溫，具有補虛、 潤燥的功效[7]。但目前關于羊脂油的現代研究僅限于羊脂油的化學成分研究，對單獨應用時羊脂油是否具有溫腎助陽功效或與淫羊藿的相加增效作用，目前尚缺乏報道，還有待進一步研究。

[1] 清· 顧光重輯.神農本草經[M].北京：人民衛生出版社，1955.

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[4] 周一帆,胡昌江,余凌英,等.星點設計-效應面法優選淫羊藿油炙工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(16):16-18.

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(責任編輯：宋勇剛)

Study on the Effect of the Crude and Mutton-fat-processed Epimedii Folium in Er’xian Decoction on Freeze Resistance Capability and Mating Ability in Model of Kidney-yang Asthenia

Xiong Rui,Hu Changjiang*,Zhang Mei，Chen Zhimin，Cui Yuanyuan

(College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)

Objective:Objective To compare the effect of the crude Epimedii folium, mutton-fat-processed Epimedii folium and Er’xian Decoction (EXD) containing the two respectively on freeze resistance capability and mating ability in model of kidney-yang asthenia. Methods:To adopt murine model of kidney-yang asthenia caused by hydrocortisone and gavage water extraction and concentraction. Assessment criteria of mating experiment are straddle latency period and straddle frequency, and assessment criteria of freezing test is survival time in anoxia and a low temperature(-18℃) condition after 40 minutes. Results:Compared with normal control group, the mutton-fat-processed in high dose significantly improved mating ability(P<0.05), also well as mutton-fat-processed in EXD(P<0.05 orP<0.01), and the crude in middle dose significantly shortened latent period(P<0.05). The mutton-fat-processed in middle and high dose significantly improved freeze resistance capability(P<0.05 orP<0.01). It was the same as the mutton-fat-processed in EXD (P<0.01). Conclusion:The mutton-fat-processed Epimedii folium can significantly improve freeze resistance capability and mating ability.

Epimedii Folium ; Mutton-fat-processed ; Kidney-yang Asthenia ; Mating Ability ; Freeze Resistance Capability

2014-09-24

中醫藥行業科研專項(20110700717)

熊瑞(1991-)，女，成都中醫藥大學碩士研究生，研究方向為中藥炮制及制劑研究。

胡昌江(1952-)，男，成都中醫藥大學教授，博士生導師，研究方向為中藥炮制學的教學及科研。Email：hhccjj@hotmail.com

R285.5

A

1673-2197(2015)03-0005-03

10.11954/ytctyy.201503003