子宮內膜癌中Maspin、uPA、ER、PR 的表達及臨床意義

李美艷 程利芳 陳輝 陳永學 呼君瑜 石媛媛 宋春麗 馬利輝 焦茹

腫瘤的增殖、侵襲、轉移是一個多因素參與、多階段的復雜過程，與多種細胞因子有關［1］。絕大多數子宮內膜癌為雌激素依賴性腫瘤，與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)關系密切。Maspin 作為抑癌基因，Maspin 的低表達也在子宮內膜的發生發展中起到一定的作用。uPA 為一種絲氨酸蛋白酶，通過細胞外基質的降解，導致腫瘤細胞的脫離、遷徙及侵襲，為子宮內膜癌的轉移創造條件。本研究應用免疫組化SP 法檢測Maspin、uPA、ER、PR 蛋白在子宮內膜癌中的表達情況及其相關性，以期了解Maspin、uPA 在子宮內膜癌發生、發展、浸潤、轉移中的作用及與雌、孕激素受體之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2004 年6 月至2014 年6 月在邯鄲市中心醫院病理科存檔的子宮內膜癌患者組織蠟塊50 例，按2009 年FIGO 標準進行分類，Ⅰ期24 例，Ⅱ期17 例，Ⅲ期7 例，Ⅳ期2 例;高分化(G1)22 例，中分化(G2)18 例，低分化(G3)10 例;肌層浸潤深度＜1/2 肌層31 例，≥1/2 肌層19 例;伴有淋巴轉移10例，無淋巴轉移40 例。另取同期因婦科疾病診刮或切除子宮的內膜標本:不典型增生的子宮內膜50 例，正常增殖期子宮內膜30 例。子宮內膜癌患者年齡30 ～75 歲，平均年齡49.03 歲，95%CI(44.50，54.20)歲。所有病例術前均無放療、化療或雌、孕激素使用史，無手術禁忌，且臨床資料及病理資料完整。

1.2 主要實驗試劑 Maspin 一抗為兔抗人多克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)，uPA 一抗為鼠抗人單克隆抗體(即用型)(福州邁新生物技術有限公司)，SP 廣譜超敏試劑盒、PBS 緩沖液、DAB 酶底物顯色劑均購自福州邁新生物技術公司。

1.3 實驗方法 每例標本經常規甲酸固定，石蠟包埋，連續組織切片成4 μm 的切片，分別進行HE 染色和免疫染色，以PBS 緩沖液代替一抗作陰性對照，操作步驟按產品說明書進行。

1.4 結果判定 采用雙盲法觀察結果，高倍鏡下選擇10 個高倍視野，計數100 個細胞，計算其平均陽性百分率。Maspin、uPA 陽性為細胞內出現棕黃色均勻顆粒，以胞漿為主，部分胞核表達。ER 陽性、PR 陽性均定位于細胞核，若同時可見胞漿著色的細胞，以細胞核出現明顯棕黃-棕褐色顆粒為陽性細胞，而胞漿出現棕黃色為非特異性染色。根據著色強度和面積進行綜合評分:(1)著色強度:0 分為無色，1 分為淺黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色。(2)著色面積:0 分為無陽性細胞，1 分為陽性細胞≤10%，2 分為陽性細胞11% ～50%，3 分為陽性細胞51% ～75%，4 分為陽性細胞＞75%;染色強度與陽性細胞百分比的乘積＜3 分為(－)，3 ～6 分為(+)，7 ～9 分為(+ +)，10 ～12 分為(+ + +);(－)和(+)為低表達，(+ +)和(+ + +)為高表達。見圖1 ～6。

1.5 統計學分析 應用SPSS 19.0.0 統計軟件，計數資料采用χ2檢驗和Fisher 精確概率法，兩者相關性用非參數Spearman 等級相關分析，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜癌組織中Maspin、uPA、ER、PR 的陽性表達情況 ER 在正常增殖期子宮內膜，不典型增生子宮內膜，子宮內膜癌中陽性表達率逐漸降低，分別為100%，72.00%，56.00%，PR 的表達情況與ER 呈一致性，分別為96.67%，70.00%，54.00%，Maspin 同樣表現為逐漸降低的趨勢，分別為86.67%，52.00%，34.00%，而uPA 的表達情況卻相反，表現為逐漸升高趨勢，分別為13.33%，40.00%，54.00%，且組間比較均有統計學意義(P ＜0.05)。見表1。

圖1 Maspin 蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP 法×200)

圖2 uPA 蛋白在低分化子宮內膜腺癌中的表達(SP 法×400)

圖3 ER 蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP 法×200)

圖4 PR 蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP 法×200)

圖5 uPA 蛋白在高分化子宮內膜腺癌中的表達(SP 法×200)

圖6 HE 染色對照片(×200)

表1 Maspin、uPA、ER、PR 蛋白在不同內膜組織中的表達 %

2.2 Maspin、uPA、ER、PR 在子宮內膜癌中的表達及其與臨床參數的關系 Maspin 蛋白及uPA 蛋白的表達與子宮內膜癌的手術病理分期，肌層浸潤深度，有無淋巴結轉移組3 種病理特征均有關，子宮內膜癌的臨床分期越晚，肌層浸潤深度越深及有淋巴結轉移，則二者的表達越高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，但在年齡組陽性表達率無統計學意義(P ＞0.05)。而ER、PR 的表達與臨床-病理分期及組織學分化均有關，PR 與肌層浸潤深度及淋巴結轉移情況無關(P ＞0.05)。見表2。

2.3 Maspin、uPA、ER、PR 在子宮內膜癌中表達的相關性 Maspin 與uPA 呈負相關(r = －0.341，P ＜0.05);Maspin 和ER 呈 正 相 關(r = 0.287，P ＜0.05);Maspin 和PR 呈正相關(r =0.293，P ＜0.05);uPA和ER 呈負相關(r = －0.293，P ＜0.05);uPA 和PR呈負相關(r = －0.339，P ＜0.05);ER 和PR 呈正相關(r =0.302，P ＜0.05)。

表2 Maspin、uPA、ER、PR 與子宮內膜癌臨床參數的關系 %

3 討論

3.1 Maspin 在子宮內膜癌中的表達及意義 Maspin是一種腫瘤抑制基因，其抑制腫瘤浸潤轉移、抑制血管生成及與其他抑癌基因的聯合作用在腫瘤的發生發展過程中發揮著重要作用。諸多資料研究顯示，Maspin的表達缺失或低表達參與了人體多種腫瘤的發生發展，如食管鱗癌，乳腺癌，結腸癌，非小細胞癌等［2］。本研究結果顯示:在子宮內膜由正常增殖期內膜到不典型增生再到子宮內膜癌的發展過程中，Maspin 陽性表達率逐漸降低(86.67%，52.00%，34.00%)，在Maspin 的表達與腫瘤臨床病理特征間的關系上，研究發現臨床期別越早，組織分化越好，Maspin 表達越高;有淋巴轉移和肌層浸潤深度組中，Maspin 陽性表達率明顯降低，這與文獻報道中Maspin 為抑癌基因一致，可能與Maspin 抑制腫瘤細胞穿透基底膜的能力有關。方世蘭等［3］研究宮頸癌中Maspin 的表達與臨床分期，腫瘤浸潤深度及淋巴結轉移密切相關，且隨訪發現Maspin 陰性組和陽性組生存狀態有密切關系。本實驗結果與其一致，故可預測Maspin 可能參與了子宮內膜癌的轉移、侵襲過程，其表達降低也暗示了子宮內膜癌的預后不良。

3.2 uPA 在子宮內膜癌中的表達及意義 uPA 是一種多功能絲氨酸蛋白水解酶，位于10 號染色體的長臂上，由10 個內含子和11 個外顯子構成，成熟的mRNA長度為2.4kb，由成纖維細胞、單核細胞、中性粒細胞、上皮細胞及腫瘤細胞等合成，與其受體(uPAR)結合后激活纖溶酶原，使之活化為纖溶酶，進而降解細胞外基質，參與腫瘤的侵襲、轉移，也可以直接激活血管內皮因子，降解細胞外基質和微血管基膜，為內皮細胞的遷移、增殖及腫瘤血管生成創造了良好的微環境，即對細胞的遷移和腫瘤侵襲轉移過程有重要作用。據報道進展期乳腺癌的外周血循環腫瘤細胞uPAR mRNA 和蛋白水平的增加與惡性腫瘤如結腸癌、肺癌、胃癌和乳腺癌的預后密切相關［4－6］。本研究結果顯示:uPA 蛋白的陽性表達率隨著子宮內膜癌的發展過程逐漸升高(13.33%，40.00%，54.00%)，且子宮內膜癌的惡性程度越高，臨床期別越晚，組織分化越差，伴淋巴結轉移，uPA 的表達越高，可見uPA 是子宮內膜癌的發生、發展、浸潤的重要因子，通過檢測uPA 的表達情況可用來判斷子宮內膜癌的預后，uPA 表達越高，患者的預后越差。

3.3 ER、PR 在子宮內膜癌中的表達及意義 對于ER、PR 在子宮內膜癌中的表達意義，文獻中已有較多較深入的研究。臨床中ER、PR 的水平已經作為子宮內膜癌激素治療的主要指標［7］。研究發現雌、孕激素受體的高表達可引起腫瘤組織自身內分泌微環境的變化，啟動雌、孕激素受體蛋白合成基因，合成具有結合活性的受體蛋白，從而獲得了依賴激素生長的特性［8－11］。即使在低激素水平刺激下也可導致腺體活性過度，從而促使子宮內膜癌的發生［12］，ER、PR 水平為子宮內膜癌預后的獨立影響因素，其高表達與分化好、期別早及預后好相關［13］。本研究結果顯示:ER 的陽性表達率(100%，72.00%，56.00%)與PR 陽性表達率(96.67%，70.00%，54.00%)基本一致。在子宮內膜癌中的表達較正常組織降低，同時發現臨床期別越晚，組織分化程度越低，伴有淋巴結轉移，癌癥浸潤深度越深，ER、PR 陽性表達率越低，證明子宮內膜癌的發生與ER、PR 的水平降低有關。

3.4 ER、PR、Maspin、uPA 之間的相關性 內源性Maspin 是細胞uPA 的強抑制劑，通過與uPA 結合形成一種蛋白酶復合物，降低uPA 的釋放能力，減少纖溶酶原活化為纖溶酶，從而降低細胞的浸潤能力。本研究發現:Maspin 和ER、PR 的表達呈一致性，Maspin 與uPA 呈負相關(r = －0.341，P ＜0.05)，uPA 和ER呈負相關(r = －0.293，P ＜0.05)，可推測ER、PR、Maspin 蛋白表達的下調可能在一定程度上導致uPA蛋白的表達上調，共同參與子宮內膜癌的發生、發展、浸潤、轉移等過程。

綜述所述，本實驗結果認為ER、PR 及Maspin 均陽性而uPA 陰性的子宮內膜癌患者臨床期別早，組織分化好，惡性程度低，其治療效果及預后相對較好，術后可考慮合并內分泌治療，相反則提示腫瘤臨床期別晚，組織分化差，惡性程度高，術后需進一步輔助治療及密切隨訪。但四者能否作為一個組合判斷子宮內膜癌的預后及指導治療，有待進一步大樣本研究明確。

1 趙靜，張佳，宋萌萌，等.趨化因子CXCL12 及其受體CXCR4 在子宮內膜癌組織中的表達及臨床意義.中國實用婦科與產科雜志，2013，29:653-656.

2 劉文會，牛曉東.Maspin 在惡性腫瘤浸潤轉移中的機制研究.醫學綜述，2014，20:1975-1976.

3 方世蘭，嚴倩，張永欣，等.Maspin 與P53 在宮頸癌中的表達及相關性分析.中國婦產科臨床雜志，2009，10:377.

4 Shetty S，Velusamy T，Idell S，et al.Regulation of urokinase receptor expression by p53:novel role in stabilization of uPAR Mrna.Mol Cell Biol，2012，27:5607-5618.

5 Smith HW，Marshall CJ.Regulation of cell signaling by uPAR.Nat Rev Mol Cell Biol，2010，11:23-36.

6 王合兵，肖堅，陳文新，等.尿激酶受體與腫瘤轉移的關系研究進展.中華臨床醫師雜志，2014，8:2536-2538.

7 Mlonas I，Jeschke U，Shabsni N，et al.Normal and malignant human endometrium express immunohistochemically estrogen receptor alpha(ERalpha)，estrogen receptor(PR).Anticancer Res，2005，25:1679-1686.

8 Nose N，Uramoto H，Iwata T，et al.Expression of estrogen receptor beta predicts a clinical response and Ionger progression-free survival after treatment with EGFRTKI for adenocarcinoma of the lung.Lung Cancer，2011，71:350-355.

9 Sien W，Kobel M，Longacre TA，et al.Hormone-receptor expression and ovarian cancer survival，an Ovarian Tumor Tissue Analysis consortium study.Lancet Oncol，2013，14:853-862.

10 Akrish S，Ben-Izhak O，Peled M.P27/SKP-2 histochemical profile is relevant to malignant salibary gland tumors(MST)histogenesis and tumor grade.Head Neck Pathol，2012，6:157-165.

11 Guo T，Li B，Gu C.Expression of hPEBP4 negatively correlates with estrogen and progesterone receptors in endometrial carcinoma.J BUON，2013，18:465-470.

12 周虹，鐘玲，常淑芳，等.聯合檢測維甲酸受體α、β 及雌、孕激素受體在子宮內膜癌中的表達及意義.實用婦產科雜志，2010，26:296.

13 Gottwald L，Sel P，Kiboal R，et al.Effectiveness of tissue microarray technique for the assessment of estrogen and progesterone receptors expression in endometrioid endometrial cancer preliminary report.Ginekol，2012，83:342-346.