平橋區(qū)人間布氏桿菌病血清學(xué)檢測(cè)分析

摘要：目的：為提高疾控機(jī)構(gòu)布病發(fā)現(xiàn)處置能力，加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)，管理和治療病例，降低布病的發(fā)病率。方法：采用特異性血清學(xué)診斷技術(shù)，即虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）初篩和試管凝集試驗(yàn)（SAT）確認(rèn)。結(jié)果：共采集400份血樣，其中共檢出陽(yáng)性7人，陽(yáng)性率為1.8%，且全為男性。結(jié)論：采用RBPT和STA相結(jié)合的方法進(jìn)行檢測(cè)提高了檢測(cè)速度和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

關(guān)健詞：人間布氏桿菌病 虎紅平板試驗(yàn) 試管凝集試驗(yàn) 準(zhǔn)確性

【中圖分類號(hào)】R392.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-8602（2015）03-0026-01

布氏桿菌病是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體引起人獸共患傳染病，是嚴(yán)重危害人類健康、阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的傳染病。布病在我國(guó)絕大多數(shù)省都有不同程度的發(fā)生和流行，人間流行以20世紀(jì)50年代及60年代最嚴(yán)重，70年代顯著下降，90年中期及21世紀(jì)后疫情回升趨勢(shì)愈加嚴(yán)重①。近年來(lái)平橋區(qū)疫情同全國(guó)一樣呈上升態(tài)勢(shì)，年發(fā)病人數(shù)達(dá)2011年來(lái)最高峰，為加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)早發(fā)現(xiàn)并規(guī)范管理降低布病的慢化水平，提高重點(diǎn)人群自我防治意識(shí)，遏制重點(diǎn)地區(qū)布病發(fā)病上升勢(shì)頭，平橋區(qū)疾控中心根據(jù)2013-2014年河南省布魯氏菌防治實(shí)施方案，于2014年8月下旬對(duì)全區(qū)重點(diǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的畜牧養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、皮毛加工廠及散養(yǎng)戶的高危人群進(jìn)行布病的篩查工作，由疾控中心工作人員對(duì)高危人群進(jìn)行采集血樣，并由疾控中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行布病的血清學(xué)檢測(cè)，此次調(diào)查檢測(cè)共采集血樣400份，其中男性367人，女性33人。現(xiàn)將血清學(xué)檢測(cè)分析如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 被檢血清：從平橋區(qū)10個(gè)重點(diǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)高危人群中提前采集血清400份，并保存冰箱待檢。

1.1.2 試劑：虎紅平板凝集抗原、試管凝集抗原由市疾控中心統(tǒng)一從中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所購(gòu)進(jìn)，批號(hào)為201401，滅菌生理鹽水，所有試劑在保質(zhì)期內(nèi)使用。

1.1.3 主要儀器和器材：清潔脫脂玻片、中試管、加樣槍、吸頭、試管架、玻璃杯、1mL、10mL吸管、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.1.4 檢驗(yàn)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)：按照衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局編著的《布魯氏菌病防治手冊(cè)》規(guī)定的檢驗(yàn)方法，虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初篩，對(duì)初篩陽(yáng)性和可凝者作試管凝集試驗(yàn)確認(rèn)，滴度為1：100及以上方可確診為陽(yáng)性。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)（RBPT）：原理：虎紅平板凝集試驗(yàn)又稱班氏孟加拉紅平板凝集試驗(yàn)，由于所用的抗原是酸性帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時(shí)能抑制血清中的IgM抗體的凝集活性，查出的抗體是IgG類，因此提高了該項(xiàng)反應(yīng)的特異性。方法：在玻片上加0.03mL被檢血清，然后加入虎紅平板抗原0.03mL，充分混勻，在5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)可見(jiàn)凝集反應(yīng)就判斷陽(yáng)性。

1.2.2 試管凝集反應(yīng)（SAT）：

1.2.2.1 將每份初篩陽(yáng)性和可疑者的血清取6支小試管，放于試管架上；第一支管加生理鹽水2.3mL，第二支不加，第三支到第五支各加0.5mL生理鹽水，然后用加樣槍取0.2mL被檢血清加入第一管中混勻后各取0.5mL加入二、三管中，第三管混勻后再吸0.5mL加入第四管中，以此類推到第五管吸0.5mL棄去，此時(shí)血清稀釋倍數(shù)從第二管開(kāi)始到第五管分別為1：12.5、1：25、1：50、1：100。

1.2.2.2 將試管凝集抗原充分混勻后，做10倍稀釋，然后從第二管開(kāi)始每管加入0.5mL，加入抗原后，血清最終稀釋倍數(shù)從第二管開(kāi)始為1：25、1：50、1：100、1：200，第一管為血清對(duì)照，第六管為抗原對(duì)照。然后充分混勻，放于37℃恒溫箱中20～22小時(shí)取出，在室溫放置1～2小時(shí)后觀察結(jié)果。

1.2.2.3 陽(yáng)性、陰性對(duì)照稀釋和加抗原的方法與受檢血清相同，做抗原對(duì)照的目的是觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。為判定準(zhǔn)確，同時(shí)制備凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)比濁管，作為判定透明程度的依據(jù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)是1：100（++）及以上者為陽(yáng)性，1：50為可疑。

2 結(jié)果

2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)：陽(yáng)性7份，可疑4份。

2.2 試管凝集試驗(yàn)：陽(yáng)性7份，陽(yáng)性率為1.8%。

2.3 陽(yáng)性分布：全為男性，年齡在20～60歲之間，其中有7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢出。

3 分析與討論

3.1 國(guó)外采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）檢測(cè)布病獲得滿意結(jié)果，試管凝集試驗(yàn)（STA）一直是各國(guó)用做布病的常規(guī)血清學(xué)診斷方法，實(shí)踐證明RBPT簡(jiǎn)便、快速、容易操作，適用基層大面積檢測(cè)，但其特異性不高，受試驗(yàn)溫度、凝集時(shí)間相對(duì)較短，人為主觀因素的影響，不易準(zhǔn)確判定結(jié)果，只能作為初篩；而STA是比較穩(wěn)定、特異且敏感的方法，可檢測(cè)血清中抗布魯氏菌IgG、IgM、IgA三類免疫球蛋白抗體，且操作簡(jiǎn)便，判定容易的特點(diǎn)，具有較高的診斷價(jià)值。因此，采用RBPT和STA相結(jié)合的方法進(jìn)行檢測(cè)更加提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度②。

3.2 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，受檢血清應(yīng)新鮮、無(wú)溶血、無(wú)污染，存放血清處溫度不能超過(guò)10℃，采血后應(yīng)于3～4日內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致血清效價(jià)降低。在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)規(guī)程，所用器材要清潔、干燥，試劑的加量一定要正確，放入恒溫箱的溫度和時(shí)間都按要求，否則都影響結(jié)果。同時(shí)要有實(shí)驗(yàn)對(duì)照。

3.3 從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，布病陽(yáng)性的全為男性，以青壯年為主，地區(qū)分布呈散發(fā)，都是畜牧養(yǎng)殖人員，由此可見(jiàn)，布病與職業(yè)有密切關(guān)系。在養(yǎng)殖業(yè)里，由于其職業(yè)的特殊性，男性較女性多，且女性在生活細(xì)節(jié)上較男性認(rèn)真仔細(xì)；他們?cè)陲曫B(yǎng)過(guò)程中與畜之間接觸頻繁、密切，從而增加了人類感染的機(jī)會(huì)，特別是產(chǎn)羔季節(jié)，接羔助產(chǎn)中不注重防范，意識(shí)差，病羊流產(chǎn)物、排泄物污染環(huán)境中，極易造成人間布病的流傳。

3.4 通過(guò)上述兩種方法，檢測(cè)出陽(yáng)性患者，說(shuō)明平橋區(qū)養(yǎng)殖業(yè)里確實(shí)存在人布魯氏菌病的感染。布病如不及時(shí)治療，易由急性轉(zhuǎn)為慢性，反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響健康和勞動(dòng)能力，甚至終生不愈，因此，早發(fā)現(xiàn)，早檢測(cè)，對(duì)布病的防治尤其重要。

參考文獻(xiàn)

[1] 衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局.布魯氏菌病防治手冊(cè)（M）.人民衛(wèi)生出版社.2008.

[2] 馮元璋.血清學(xué)技術(shù)在布病診斷的應(yīng)用研究現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)（J）仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)報(bào).1997.10（1）79-87.