油紅O和蘇丹Ш染色劑對脂肪樣病變肝組織脂質染色效果的比較

摘要：目的 比較油紅O和蘇丹Ш染色劑對脂肪樣病變肝組織脂質染色效果。方法 選取高脂飲食小鼠脂肪樣病變肝組織，分別用油紅O和蘇丹Ш染色劑進行染色，比較肝組織內脂肪滴的染色效果及脂肪滴的輪廓界面清晰度。結果 脂肪樣肝病變組織經蘇丹Ⅲ染色后，肝組織內脂肪滴被染成橘紅色，或淡橘紅色，但是大多數被染脂肪滴的輪廓界面不清晰；相反，經油紅O染色肝細胞內的脂肪滴呈紅色或鮮紅色，而且大多數被紅染的脂肪滴的輪廓界面清晰。結論 油紅O進行脂肪樣病變肝組織脂質染色效果好于蘇丹Ш染色。

關鍵詞：脂肪樣病變肝組織；油紅O染色；蘇丹Ш染色

肝脂肪樣病變是肝纖維化、肝硬化甚至肝癌的過渡階段，當前臨床上采用超聲等影像學檢查方法為其診斷提供了極大的便利，然而要想準確地掌握肝脂肪樣病變的病變程度、主要病理特征等內容，以便更有效第進行防治，顯然單靠影像學手段難以達到預期目標[1-2]。在這方面，傳統的染色法就顯示出了其較好的優勢。比如，通過染料染色后，可以清楚地觀察到肝胞脂肪變、肝細胞氣球樣變、炎癥細胞浸潤等主要病理特征，為肝脂肪樣病變的預防和治療提供極大的保障[3]。近年來，很多臨床一線的醫務工作者和研究人員在嘗試著在傳統的染料中找到一種/幾種最佳染料，通過將脂質染色，準確地了解肝脂肪樣病變程度。近年來，我們課題組在分析現有的蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、油紅O、尼羅藍等脂溶性染料的基礎上[4-5]。通過多樣本及和三峽大學醫學院病理教研室合作研究，發現上述染料中以油紅O和蘇丹Ⅲ進行脂質染色較好，通過進一步比較油紅O和蘇丹Ⅲ的脂質染色效果，發現油紅O顯好于蘇丹Ⅲ明。現將實驗結果總結進行了總結，以供臨床參考。

1資料與方法

1.1一般資料 小鼠經過高脂飲食造模，使肝組織發生脂肪樣變。動物經乙醚麻醉，甲醛-鈣液灌注固定。取固定好后的肝組織，冰凍切片，切片厚8～10μm。

1.2試劑 油紅O，上海化學試劑分裝廠；蘇丹Ⅲ，上海化學試劑總廠第三分廠；95%乙醇，國藥集團上海化學試劑有限公司。

1.3試劑配制 油紅O染色液：準確稱量油紅O：0.5g，溶解于70%乙醇中，配制成0.5%油紅O溶液，置于磨口瓶內保存備用。注意染液用前過濾、即用即配。蘇丹Ⅲ染色液：準確稱量蘇丹Ⅲ 0.5g，溶解于70%乙醇中，配制成0.5%蘇丹Ⅲ溶液，過濾后置于磨口瓶內保存備用。

1.4染色步驟 油紅O 染色步驟：常規冷凍切片將小鼠肝組織切成8～10μm薄片，冷風機吹干，然后用10% 福爾馬林/1% CaCl2固定液固定15min，50%乙醇漂洗1min，油紅O染液染色15min，50%乙醇分化漂洗，水洗終止分化，然后蘇木素復染核，自來水浸泡30min返藍，用甘油明膠封片。蘇丹Ⅲ染色驟：常規冷凍切片將小鼠肝組織切成8～10μm薄片，冷風機吹干，然后用雙蒸水洗2min，50%乙醇漂洗1～5min，蘇丹Ⅲ染液染色15～20min，50%乙醇分化漂洗，水洗終止分化，然后蘇木素復染核，自來水浸泡30min返藍，用甘油明膠封片。

2結果

由于肝脂肪樣病變的主要病理特征是肝組織中脂質較正常肝組織的含量高，細胞內的脂肪滴主要以大泡、多囊泡特征，此外也可見肝細胞腫脹、變形，排列不規則等變化。通過蘇丹Ⅲ染色和油紅O染色進行肝脂肪樣病變組織染色發現，脂肪樣肝病變組織經蘇丹Ⅲ染色后，肝組織內脂肪滴雖然被染成橘紅色，或淡橘紅色，但是大多數被染脂肪滴的輪廓界面不清晰；相反，經油紅O染色肝細胞內的脂肪滴呈紅色或鮮紅色，而且大多數被紅染的脂肪滴的輪廓界面清晰，見圖1。

3討論

近年來，隨著人們生活水平的提高，各種不良生活方式的影響，肝脂肪樣患者愈來愈多，并且年齡逐步趨向于年輕化。隨著超聲等影像學檢查的廣泛普及，肝脂肪樣病變發現率明顯提高，重癥脂肪肝B 超檢出率在95% 以上[6-8]。當前，它和高血壓、糖尿病一樣，成為當代人常見的慢性病之一，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，它可以進展為肝纖維化、肝硬化，甚至肝癌，發展為肝硬化和肝癌的比例分別為5%～10% 和1%～2%，嚴重威脅著人們的身體健康[9-11]。因此，采取準確可靠地診療手段就顯得尤為重要。當前采取的影像學檢查為其早發現提供了可能，但是如果能夠將其與肝組織形態學分析結合起了，將肝的脂肪樣的防治提供更直觀地保障。我們的實驗研究就較好的地實現了這一目標。

總所周知，油紅O為脂溶性染料，在脂肪中能很好地溶解，并可特異性的使組織內甘油三酯等中性脂肪著色；而蘇丹Ⅲ是弱酸性染料，呈紅色粉末狀，易溶于脂肪和酒精，也是非常常用的用于顯示脂類物質的染色劑。但是哪種染料更適合于肝脂肪樣變，尚不清楚。我們通過仔細分析肝脂肪樣病變的發病機理和病理特征后，發現，肝臟脂肪樣變雖也表現為甘油三酯的含量高，但與人體的脂肪組織相比存在著較大的差異，比如：脂質總量少，脂肪滴分散、粒徑小等[3，5]。因此，對脂質染料的選擇要求較高。染色時如果把握不好，其結果是：要么染色不到位，要么造成組織內的脂肪丟失，或結構受損，進而影響準確的診斷。所以，好的染色效果，對我們充分利用結果、獲得更多也更準確的信息至關重要。油紅O屬于偶氮染料，是很強的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結合呈小脂滴狀。實驗中，我們發現，油紅O所染脂肪滴結果色彩更為鮮亮，反差更為明顯，脂肪滴輪廓界面清晰更為清晰，對于細微一些的脂滴，也有良好的顯示效果。相反，蘇丹Ⅲ染料所染脂肪滴呈橘黃色，色彩不夠艷麗，反差不夠明顯，染色均勻度也較差，對染色較大脂肪滴顯示尚可，而對較小的脂肪滴滴顯示效果不夠理想。由于肝臟脂肪樣變中，其脂肪滴的特點是脂質總量少，脂肪滴分散、粒徑小，因而選用油紅O進行肝臟脂肪樣變脂質染色效果好。

綜上所述，對于以肝脂肪樣變的組織來說，欲要使組織內的脂肪成分得到良好的顯示，選擇油紅O將會比蘇丹Ⅲ取得更好的染色效果。

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編輯/馮焱