丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和毒素分泌的影響

羅 曼,姜 辣,陳成花,李 楊,孟祥紅

(中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和毒素分泌的影響

羅 曼,姜 辣,陳成花,李 楊,孟祥紅*

(中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

為了更全面、合理的評(píng)價(jià)丁香精油作為防腐保鮮劑對(duì)病原菌生長的控制效應(yīng)及毒素合成間的相關(guān)性,以熏蒸的方式,通過離體和活體實(shí)驗(yàn),研究了不同濃度的丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和毒素分泌的影響。結(jié)果表明,固體培養(yǎng)中,26.0 μL/L的丁香精油熏蒸對(duì)擴(kuò)展青霉的孢子萌發(fā)、菌體生長和毒素分泌均起到明顯的抑制作用;雖然在液體培養(yǎng)和活體實(shí)驗(yàn)中,相同濃度的丁香精油熏蒸抑制菌體生長同時(shí)促進(jìn)了毒素分泌,但是在這兩種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ较?當(dāng)丁香油濃度達(dá)到130 μL/L以上時(shí),才達(dá)到同時(shí)抑制生長和產(chǎn)毒的效果。因此,將丁香精油作為防腐保鮮劑開發(fā)時(shí),需同時(shí)考慮其對(duì)展青霉素分泌的影響,以期達(dá)到抑菌效果和食用安全性。

丁香精油,擴(kuò)展青霉,生長,展青霉素

擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)是引起蘋果、梨和桃等大宗水果發(fā)生青霉病害的主要病原菌[1],其在生長代謝過程中會(huì)分泌一種被稱作展青霉素的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物。展青霉素具有潛在的細(xì)胞和動(dòng)物毒性,對(duì)人和動(dòng)物存在致畸性、致癌性和免疫毒性[2]。該毒素是一種常見的水果污染物,在蘋果、桃、葡萄、梨、櫻桃等多種水果及其制品中均有發(fā)現(xiàn)[3]。食品中展青霉素的殘留問題已引起世界衛(wèi)生組織的高度關(guān)注,許多國家對(duì)其最低限量做出了嚴(yán)格規(guī)定[4]。

長期以來,安全高效的果實(shí)貯藏保鮮技術(shù)的研發(fā)是農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的工作重心之一。目前,使用化學(xué)殺菌劑仍是控制果蔬產(chǎn)品采后病害的主要手段,但高劑量化學(xué)殺菌劑的使用所造成的環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留和抗藥性增加等問題,已引起全社會(huì)廣泛的關(guān)注。因此,尋找安全環(huán)保的新型抗菌劑成為國內(nèi)外抗菌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[5]。丁香精油是從丁香的花蕾、葉子等處提取的芳香精油,屬藥食同源物品。有研究表明,丁香精油可以抑制柑橘采后主要病原菌指狀青霉(Penicilliumdigitatum)、枝孢樣枝孢霉(Cladosporiumcladosporioides)的生長[6]。丁香精油對(duì)黃曲霉(Aspergillusflavus)、橘青霉(Penicilliumcitrinum)、黑根霉(Rhizopusnigricans)的最小抑菌濃度分別為25、25、50 μL/mL。李鵬霞等[7]發(fā)現(xiàn)丁香精油對(duì)采后蘋果的主要致病菌擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)、灰霉(Botrytiscinerea),炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)、蘋果褐腐病菌(Moniliafructigena)的生長均有較好的抑制作用,并且丁香油處理蘋果果實(shí)還有利于保持蘋果的品質(zhì)和風(fēng)味。之前有關(guān)丁香精油抑菌作用的研究主要集中在其對(duì)菌體生長的抑制作用和對(duì)水果品質(zhì)的影響方面,但丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉的毒素分泌方面的研究鮮有報(bào)道。

本文研究了用熏蒸處理的方式,通過離體和活體實(shí)驗(yàn),揭示了丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和展青霉素分泌的影響作用,為丁香精油作為抑菌劑的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

丁香精油 上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;乙腈,冰乙酸為色譜純,其他試劑均為分析純;展青霉素標(biāo)準(zhǔn)品 美國sigma公司 純度≥98%;實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum) 實(shí)驗(yàn)室從感染青霉病的蘋果果實(shí)中分離純化,回接驗(yàn)證所得,于4 ℃ PDA斜面培養(yǎng)基中暫存;PDA培養(yǎng)基 配方為馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,蒸餾水1 L,自然pH;PDB培養(yǎng)基 配方為馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,蒸餾水1 L,自然pH。

霉菌培養(yǎng)箱BMJ-250C 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;液相色譜儀Agilent-1260 安捷倫科技有限公司;IS-RDS3恒溫振蕩器 美國精騏有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;氮吹儀YGC-12 鄭州寶晶電子科技有限公司;光學(xué)顯微鏡BK5000-LEDR 重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司;高速分散機(jī)T18 basic IKA公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌種的活化和菌懸液的制備 將擴(kuò)展青霉接種到新鮮PDA斜面上,25 ℃下培養(yǎng)7 d后,加入無菌生理鹽水,將菌落表面的孢子刮下,用4層紗布過濾去除菌絲等雜質(zhì),用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下觀測并將孢子懸浮液濃度調(diào)整至106cfu/mL。

1.2.2 孢子萌發(fā)實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)均在經(jīng)UV照射滅菌的無菌操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。將已滅菌的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板,每皿15 mL,均勻涂布50 μL濃度為1×106cfu/mL的擴(kuò)展青霉的孢子懸浮液,將培養(yǎng)皿倒置,在培養(yǎng)皿蓋中央放置一片直徑20 mm的已滅菌的圓形濾紙片。用移液槍移取一定體積(0.5、1.0、1.5、2.0 μL)的丁香精油于濾紙片上,使最終濃度分別為6.5、13.0、19.5、26.0 μL/L,以濾紙片上未加丁香精油的平板作為對(duì)照。迅速扣好培養(yǎng)皿蓋,用封口膜封好培養(yǎng)皿邊緣。于25 ℃,相對(duì)濕度90%的霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 h后,在顯微鏡下觀察,測量并計(jì)算孢子萌發(fā)率。每個(gè)處理重復(fù)3次,每次重復(fù)至少統(tǒng)計(jì)200個(gè)孢子。

1.2.3 含擴(kuò)展青霉孢子懸浮液菌餅的制作 取一定體積的孢子懸浮液與45 ℃的PDA培養(yǎng)基混勻,制成含孢子濃度為105cfu/mL的培養(yǎng)基,混勻后倒入90 mm的無菌培養(yǎng)皿中,每皿10 mL,制成厚薄均勻的平板。用無菌打孔器在含菌培養(yǎng)基上切取得到直徑9 mm的圓形菌餅。

1.2.4 固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 將已滅菌的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板,每皿15 mL,培養(yǎng)皿內(nèi)PDA培養(yǎng)基凝固后,取一片9 mm菌餅置于平板中央。將培養(yǎng)皿倒置,在培養(yǎng)皿蓋中央放置一片直徑20 mm的已滅菌的圓形濾紙片。用移液槍移取一定體積(0.5、1.0、1.5、2.0 μL)的丁香精油于濾紙片上,使最終濃度分別為6.5、13.0、19.5、26.0 μL/L,以濾紙片上未加丁香精油的平板作為對(duì)照。迅速扣好培養(yǎng)皿蓋,用封口膜封好培養(yǎng)皿邊緣。于25 ℃,濕度90%的霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng),從培養(yǎng)第5 d開始取樣,以后每隔2 d取樣。所取樣品用十字交叉法測量菌餅直徑并計(jì)算抑菌率,抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)×100。用無菌水將PDA培養(yǎng)基上的孢子洗去后全部取出,加入15 mL無菌水,用高速分散機(jī)打碎均質(zhì),提取測量PDA培養(yǎng)基中的展青霉素含量。共統(tǒng)計(jì)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù),每組實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)平行。

1.2.5 液體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 于無菌250 mL錐形瓶中加入40 mL PDB培養(yǎng)基,接入0.4 mL 1×106cfu/mL的擴(kuò)展青霉孢子懸浮液,在瓶口內(nèi)側(cè)固定一片直徑20 mm的滅菌濾紙片,用移液槍移取一定體積(1.44、7.22、36.10 μL)的丁香精油于濾紙片上,使最終濃度分別為5.2、26.0、130.0 μL/L,以濾紙片上未加丁香精油的錐形瓶作為對(duì)照,用封口膜封住瓶口。將錐形瓶置于25 ℃,相對(duì)濕度90%的霉菌培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。從培養(yǎng)第5 d開始取樣,以后每隔2 d取樣。所取樣品抽濾后,收集菌體,于60 ℃下烘干至恒重,稱重。量取5 mL抽濾所得濾液,在濾液中加入15 mL無菌水,混勻,用于提取測量展青霉素含量。共統(tǒng)計(jì)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù),每組實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)平行。

1.2.6 活體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 挑選成熟期的紅富士蘋果(MaluspumilaMil),要求外觀整齊、大小均勻、無病蟲害和機(jī)械損傷。用2%的次氯酸鈉溶液消毒晾干后,在無菌條件下,用打孔器在蘋果的橫徑上對(duì)稱地打2個(gè)直徑4 mm,深4 mm的洞,接入0. 15 mL的1×106cfu/mL的孢子懸浮液。果實(shí)晾干后放在330 mm×240 mm×100 mm塑料筐中,用移液槍移取一定體積(178.9、1789.1 μL)的丁香精油于無菌濾紙片上,將該濾紙片迅速放入筐中(勿直接接觸蘋果),以濾紙片上未加丁香精油的筐作為對(duì)照。立即用保鮮膜密封塑料筐,使最終濃度為26.0、260.0 μL/L。置于25 ℃,相對(duì)濕度90%的霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每個(gè)處理重復(fù)3次,每次10個(gè)蘋果。從培養(yǎng)第3 d開始取樣,以后每隔2 d取樣。每次所取樣品測量蘋果病斑直徑,將蘋果腐爛病斑部位挖出,加入15 mL無菌水,用高速分散機(jī)打碎,用于提取測量展青霉素含量。共統(tǒng)計(jì)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù),每組實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)平行。

表1 固體培養(yǎng)方式下不同濃度丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉菌絲擴(kuò)展的抑制率(%)

1.2.7 展青霉素測定方法 將各組取出的待測樣品置于錐形瓶中,加入20 mL乙酸乙酯震蕩提取1 h,靜置分層后,收集上層有機(jī)相。重復(fù)提取3次,合并3次提取收集的有機(jī)相,加入10 mL 1.5%的Na2CO3溶液,震蕩1 min,靜置分層后,再用10 mL的乙酸乙酯對(duì)碳酸鈉水層提取一次,合并乙酸乙酯提取液于150 mL梨形蒸發(fā)瓶中。于40 ℃水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1～2 mL,將濃縮液移至離心管中,于40 ℃氮?dú)獯蹈?以1.0 mL pH4.0的乙酸鹽緩沖液溶解殘留物,經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后,供高效液相色譜測定。測定條件:色譜柱,Agilent SB-C18柱,250 mm×4.6 mm,粒徑5 μm;流動(dòng)相,乙腈-水(10∶90 v/v);流速,1.0 mL/min;柱溫,30 ℃;檢測波長,276 nm;進(jìn)樣量,20 μL。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過ANOVA進(jìn)行鄧肯式多重差異分析。當(dāng)p<0.05 時(shí),即表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉孢子萌發(fā)的影響

如圖1所示,不同濃度丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉孢子都有抑制效果,抑制作用具有濃度依賴性,高濃度組的抑制效果優(yōu)于低濃度組。在培養(yǎng)9 h后,對(duì)照組(CK)的孢子萌發(fā)率已達(dá)到93.2%,此時(shí)丁香精油濃度最小的6.5 μL/L組的孢子萌發(fā)率已低至52.8%,而丁香精油濃度為26.0 μL/L組的孢子萌發(fā)率僅為9.9%。

圖1 不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)擴(kuò)展青霉孢子萌發(fā)的影響Fig.1 Effect of clove oil with different concentrations on spore germination of P. expansum

2.2 固體培養(yǎng)方式下丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和產(chǎn)毒的影響

如表1所示,不同濃度丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉孢子都具有一定程度的抑制效果,其抑制作用具有濃度依賴性,抑制作用隨著濃度的升高而加強(qiáng)。并且隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,抑制率不斷降低。丁香精油供試濃度最低的6.5 μL/L組抑制效果最差,當(dāng)培養(yǎng)至11～13 d時(shí),抑制率出現(xiàn)負(fù)數(shù),說明此時(shí)丁香精油幾乎沒有抑制效果,甚至表現(xiàn)出對(duì)擴(kuò)展青霉生長的輕微促進(jìn)作用。丁香精油濃度為26.0 μL/L的處理組抑制效果最佳,從培養(yǎng)第5 d直到第13 d,抑制率始終高于其他組別。

由圖2可以看出,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,各組的PDA培養(yǎng)基中展青霉素含量均有不同程度的增加。CK、6.5 μL/L、19.5 μL/L這三組的毒素含量隨天數(shù)變化的趨勢相似,均為5～11 d毒素含量增加,培養(yǎng)至第11 d達(dá)到峰值,11～13 d毒素含量顯著下降。其中,6.5 μL/L組中毒素含量在5～11 d的培養(yǎng)過程中均高于對(duì)照組,19.5 μL/L組中毒素含量在5～9 d低于對(duì)照組,于第11 d超過對(duì)照組。13.0 μL/L組可以看到毒素含量有一個(gè)從升高到降低的變化趨勢,但具體的變化過程并不明確。僅丁香精油濃度最高的26.0 μL/L組在5～13 d的培養(yǎng)過程中,雖毒素含量隨著時(shí)間延長逐步升高,但始終低于對(duì)照組。

圖2 固體培養(yǎng)方式下不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)展青霉素含量的影響Fig.2 Effect of clove oil with different concentrations on the content of patulin in solid medium

由固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)可以得出,丁香精油濃度為 26.0 μL/L的處理組對(duì)擴(kuò)展青霉菌絲生長和毒素分泌的抑制程度均明顯高于其他組別。低于該濃度的丁香精油處理組對(duì)擴(kuò)展青霉的菌絲生長也起到一定的抑制作用,但對(duì)展青霉素分泌的抑制作用較差,甚至在培養(yǎng)到一定時(shí)間后,促進(jìn)了毒素分泌。

2.3 液體培養(yǎng)方式下丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和產(chǎn)毒的影響

由圖3可以看出,較低濃度(5.2 μL/L)丁香精油熏蒸對(duì)擴(kuò)展青霉菌體生長沒有明顯作用。而較高濃度的另外兩組對(duì)擴(kuò)展青霉菌體生長有明顯的抑制作用,且抑制作用隨丁香精油濃度升高而增強(qiáng)。濃度最高的130.0 μL/L組菌體生長量極少,并且不隨培養(yǎng)時(shí)間延長而表現(xiàn)明顯差異。

圖3 液體培養(yǎng)方式下不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)擴(kuò)展青霉菌體生長的影響Fig.3 Effect of clove oil with different concentrations on the mycelial growth of P. expansum in liquid medium

液體培養(yǎng)方式下的展青霉素產(chǎn)量與固體培養(yǎng)方式下有很大區(qū)別。其中丁香精油濃度為26.0 μL/L的處理組顯著促進(jìn)了展青霉素的分泌,而另外兩個(gè)處理組(濃度分別高于和低于26.0 μL/L)均抑制了毒素的分泌。其中,低濃度的5.2 μL/L組對(duì)展青霉素的分泌有一定的抑制作用;高濃度的130.0 μL/L組抑制毒素分泌量的效果十分明顯(圖4)。Garcia等[8]的研究表明,通過強(qiáng)烈抑制菌體生長來阻止菌體分泌次級(jí)代謝產(chǎn)物是一種阻止毒素積累的方法。所以本實(shí)驗(yàn)中高濃度組可能是因?yàn)閺?qiáng)烈抑制了菌體生長而導(dǎo)致的產(chǎn)毒量降低。

圖4 液體培養(yǎng)方式下不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)展青霉素含量的影響Fig.4 Effect of clove oil with different concentrations on the content of patulin in liquid medium

2.4 活體培養(yǎng)中丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉生長和產(chǎn)毒的影響

如圖5所示,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長,各組蘋果的病斑直徑逐漸擴(kuò)大,5 d以內(nèi)丁香精油處理組對(duì)病斑擴(kuò)展有一定的抑制作用。而7～9 d的培養(yǎng)結(jié)果顯示,處理組的病斑直徑與對(duì)照組無顯著差異。可能的原因是隨著培養(yǎng)時(shí)間延長,丁香精油揮發(fā)損失,導(dǎo)致筐內(nèi)丁香精油濃度降低,從而抑菌效果減弱。

圖5 不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)蘋果病斑直徑的影響Fig.5 Effect of clove oil with different concentrations on lesion diameter of apple注:不同小寫字母代表同天不同處理間差異顯著(p<0.05)，圖6同。

如圖6所示,較低濃度的處理組對(duì)展青霉素的分泌量沒有明顯的作用。高濃度組在3～5 d培養(yǎng)過程中可以顯著地抑制毒素的分泌,毒素幾乎無法檢出,5 d后對(duì)擴(kuò)展青霉的抑制作用減弱,毒素含量迅速增多。活體實(shí)驗(yàn)中起丁香精油發(fā)揮抑菌作用的濃度高于離體實(shí)驗(yàn),可能是由于活體實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)環(huán)境復(fù)雜,干擾因素增多,丁香精油中的主要抑菌成分與蘋果中的其他成分相互作用,減弱了抑制產(chǎn)毒的效果。

圖6 不同濃度丁香精油熏蒸對(duì)蘋果上展青霉素分泌量的影響Fig.6 Effect of clove oil with different concentrations on the content of patulin from apple

3 討論與結(jié)論

離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丁香精油的熏蒸處理對(duì)抑制擴(kuò)展青霉的孢子萌發(fā)和菌體生長具有良好的效果,并且隨著丁香精油濃度升高而抑制效果增強(qiáng)。之前的研究表明大蒜精油、百里香精油、薰衣草精油也可抑制擴(kuò)展青霉的孢子萌發(fā)[9],這一點(diǎn)上丁香精油的作用效果與其他精油類物質(zhì)一致。而丁香精油的熏蒸處理對(duì)展青霉素的分泌表現(xiàn)出了不同的影響作用。同一丁香精油濃度下,固體培養(yǎng)中擴(kuò)展青霉的產(chǎn)毒量顯著降低,展青霉素的分泌受到強(qiáng)烈抑制;液體培養(yǎng)中,該濃度的丁香精油熏蒸促進(jìn)了展青霉素的分泌,并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長毒素產(chǎn)量增多。但當(dāng)丁香精油濃度提高5倍后,其對(duì)展青霉素的分泌也起到了很好的抑制作用。在其他抑菌劑的研究中也存在這種抑菌劑對(duì)菌體生長和產(chǎn)毒作用效果不一致的情況。Mossini等[10]研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可抑制擴(kuò)展青霉的產(chǎn)毒,但不一致菌體的生長。另有研究表明小豆蔻可減緩黃曲霉的生長但不影響黃曲霉素G1的分泌量[11]。

在活體實(shí)驗(yàn)中,丁香精油熏蒸的作用結(jié)果與離體培養(yǎng)存在一定差異。在3～5 d的培養(yǎng)過程中,丁香精油對(duì)蘋果病斑擴(kuò)展和毒素分泌均有較好的抑制效果,但在培養(yǎng)時(shí)間5 d后,效果顯著降低。活體實(shí)驗(yàn)中抑菌劑效力降低的情況也在抑菌實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)。Feng等[12]研究了肉桂精油對(duì)櫻桃番茄中鏈格孢病害的抑制作用,在固體培養(yǎng)基中肉桂精油可強(qiáng)烈抑制菌體生長,但在櫻桃番茄上用同一濃度的肉桂精油處理時(shí)抑制強(qiáng)度有一定程度的降低。Davidson等[13]認(rèn)為在玉米上有多種因素可影響抑菌劑效力,如脂質(zhì)可降低起主要抑菌作用的疏水化合物活性,蛋白質(zhì)可與抑菌劑中某些成分結(jié)合。

通過比較菌體生長和毒素分泌這兩個(gè)測定指標(biāo)發(fā)現(xiàn),當(dāng)丁香精油熏蒸抑制菌體生長時(shí),對(duì)擴(kuò)展青霉分泌量的影響是不一樣的,根據(jù)培養(yǎng)方式和丁香精油濃度的不同,存在促進(jìn)分泌和抑制分泌兩種結(jié)果。有研究表明[14],逆境可能促使微生物傾向于合成更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物。本實(shí)驗(yàn)中造成促進(jìn)毒素分泌結(jié)果的可能原因是:特定濃度的丁香精油熏蒸造成了一個(gè)逆境環(huán)境,從而促使擴(kuò)展青霉分泌更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物,即展青霉素。以往的研究中往往只注重丁香精油處理對(duì)菌的生長和果實(shí)品質(zhì)的影響,但忽略了對(duì)毒素分泌的影響,而擴(kuò)展青霉在果實(shí)中的存在會(huì)比腐爛本身對(duì)人類造成更為嚴(yán)重的危害。研究結(jié)果說明,不僅需要開展抑菌劑對(duì)擴(kuò)展青霉的抑菌效果的評(píng)價(jià),還應(yīng)重視抑菌劑對(duì)毒素分泌的影響。目前已有人將丁香精油與大蒜精油、肉桂精油、殼聚糖等配合使用[15-17],并取得了較好的抑菌效果。所以在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)注意調(diào)整丁香精油的添加量,并可以采用與其他物質(zhì)復(fù)配的方法,在抑制擴(kuò)展青霉菌體生長的同時(shí),有效抑制展青霉素的分泌。

本研究表明,在一定濃度下,丁香精油對(duì)擴(kuò)展青霉的生長和產(chǎn)毒均具有一定的抑制作用,在不同培養(yǎng)方式下,同一濃度丁香精油處理均表現(xiàn)出抑制擴(kuò)展青霉生長的作用,但對(duì)展青霉素分泌量上的影響作用不同,在固體培養(yǎng)中抑制產(chǎn)毒,在液體培養(yǎng)和活體實(shí)驗(yàn)中促進(jìn)產(chǎn)毒。因此,對(duì)丁香精油的抑菌性進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí),應(yīng)在考慮其對(duì)擴(kuò)展青霉生長影響的同時(shí),重視其對(duì)毒素分泌的影響。該研究可為丁香油作為抑菌劑開發(fā)提供重要的理論依據(jù)。

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Effect of clove oil on the growth ofPenicilliumexpansumand the production of patulin

LUO Man,JIANG La,CHEN Cheng-hua,LI Yang,MENG Xiang-hong*

(College of Food Science and Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

In order to evaluate the antibacterial effect of clove oil in a comprehensive and reasonable way,effects of clove oil with different concentrations on the growth ofPenicilliumexpansumand the production of patulin were investigatedinvitroandinvivo. The results showed that 26.0 μL/L clove oil had obvious inhibitory effects on spore germination,the growth ofPenicilliumexpansumand the production of patulin in solid medium. However,treatment of clove oil at the same concentration promoted the production of patulin in liquid medium andinvivounless improving the content of clove oil to 130 μL/L. This study indicated that the effect of clove oil on the production of patulin needed to be considered in order to obtain the antibacterial effect and food safety.

clove oil;Penicilliumexpansum;growth;patulin

2015-01-13

羅曼(1989-)，女，碩士，主要從事天然防腐保鮮劑的研究，E-mail：102384577@qq.com。

*通訊作者:孟祥紅(1973-)，男，博士，教授，研究方向：食品生物化學(xué)，E-mail：mengxh@ouc.edu.cn。

國家科技計(jì)劃課題(2012AA101607);國家自然科學(xué)基金(31171762)。

TS255.3

A

1002-0306(2015)21-0162-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.21.025