一例農戶小型種豬場偽狂犬病的凈化

黨曉鵬，寧明正

（陜西金冠牧業有限公司，西安 710018；陜西省蒲城縣龍陽畜牧獸醫站，陜西 蒲城 715507）

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種急性傳染病[1]，我國將其列為二類傳染病。近年來，豬偽狂犬病在陜西省流行范圍較廣，特別是農戶散養豬場和小規模種豬場，野毒感染率較高。該病對種豬的危害主要是侵害繁殖系統，導致豬群繁殖力下降，產死胎、木乃伊數量增加，新生仔豬成活率下降[2]。

農戶小型種豬場（基礎母豬100頭左右）在豬病凈化方面難度較大，豬場衛生隔離消毒防疫等設施較差，種豬來源復雜多樣，豬瘟（HC）、豬2型圓環病毒（PCV-2）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬傳染性胸膜肺炎（APP）、副豬嗜血桿菌病（HPS）等混合感染普遍，感染豬及帶毒豬淘汰措施難以執行等。但針對豬偽狂犬病的凈化條件目前已基本具備，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接種，二是有可區分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體的PRV?gE抗體ELISA試劑盒和檢測PRV病原的實時熒光PCR檢測試劑盒，在此基礎上結合消毒隔離等生物安全措施，逐步淘汰陽性感染豬，引入陰性種豬，在2～3年的時間里完全可以將豬偽狂犬病徹底凈化。國內許多大型規模化種豬場已經按照此方案對偽狂犬病成功進行凈化，消滅了偽狂犬病野毒感染[3]。本試驗用偽狂犬病病毒?gE抗體ELISA檢測試劑盒，對陜西省蒲城縣一農戶小型種豬場的偽狂犬病野毒感染情況進行連續抽樣監測，同時應用實時熒光PCR檢測試劑盒，對表現有臨床癥狀的乳仔豬進行實時熒光PRV病原檢測。然后根據抗體和病原檢測結果制定切實可行的凈化方案。

通過科學嚴格的疫苗接種，連續對豬群進行5次抽樣檢測，包括PRV?gE抗體和疑似病仔豬病原檢測，嚴格隔離飼養抗體陽性豬，并實時逐步淘汰處理。該豬場的偽狂犬病野毒感染率由最初的45.45%逐步降低至1.72%，發病仔豬偽狂犬病野毒陽性率由48.28%降至0%，基本達到凈化豬群偽狂犬病的目標。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

陜西蒲城某種豬場。存欄種公豬7頭，能繁母豬135頭。年出售商品仔豬近2?000頭。將豬群分組：哺乳仔豬、保育豬、中大豬、后備母豬、空懷母豬、妊娠母豬及種公豬。種公豬逐只采樣，其他每組分別抽樣20%。

1.2 豬群接種疫苗

豬場偽狂犬病免疫接種采用基因缺失弱毒疫苗。

1.3 檢測試劑盒

偽狂犬病gE缺失ELISA診斷試劑盒，購自武漢科前公司；豬偽狂犬病病毒(gE基因)實時熒光PCR檢測試劑盒，購自北京世紀元亨公司。

1.4 血樣采集時間

豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測在2014年3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血樣1次，按照豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒說明書要求檢測PRV野毒感染抗體效價。

檢測結果判定：在酶標儀上測各孔OD630?nm值。試驗成立條件是陰性對照孔平均OD630?nm值與陽性對照孔平均OD630?nm值之差≥0.4.

S=樣品孔OD630?nm值，N=陰性對照孔平均OD630?nm值。

若S/N比值≤0.6,樣品判為PRV抗體陽性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,該樣品必須重測，如果結果相同，則過一段時間后重新采集血樣進行檢測。

若S/N比值＞0.7,樣品判為PRV抗體陰性。

1.5 豬偽狂犬病病毒實時熒光PCR檢測

對有臨床癥狀的仔豬采集淋巴結組織，處理后進行病原檢測，操作方法按照試劑盒生產廠家說明書操作。

檢測結果判定：被檢組織樣品Ct?值≤30并出現特定的擴增曲線為豬偽狂犬病病毒野毒陽性，被檢樣品30＜Ct＜37并出現特定的擴增曲線，需要重新取樣提取DNA，擴增后進行結果判定，如仍為可疑，則判定為陽性；被檢樣品Ct值＞37時，判定為陰性；對于某些未呈現特定的擴增曲線，但本底值較高的樣品，判為陰性。

1.6 免疫程序

2014年3月以來，選用豬偽狂犬病基因缺失弱毒疫苗進行全群免疫。新生仔豬3日齡滴鼻免疫，8周齡時再肌注加強免疫1次；種公豬及后備母豬每3個月免疫1次。

1.7 飼養管理措施

每天及時打掃圈舍衛生，清理生產垃圾，保持舍內外干凈整潔，及時清理豬糞，盡量做到豬、糞分離，保持豬體、圈舍干凈。豬舍空圈后要清洗、消毒，種豬上床或調圈，要把空圈先沖洗后用廣譜消毒藥消毒，產房每斷奶一批、育成每育肥一批、育肥每出欄一批，先清掃，再用火堿噴霧消毒。注意通風換氣，冬季做到保溫，舍內空氣良好。夏季通風防暑降溫，排出有害氣體。使用過的藥盒、藥瓶、疫苗瓶、消毒劑瓶、一次性輸精瓶等應及時焚燒或銷毀處理。料袋能利用的返回飼料廠，不能利用的焚燒掉。四季滅鼠，夏季滅蚊蠅。

2 結果

2.1 PRV?gE抗體檢測結果（見表1）

豬群gE野毒抗體的陽性率由首次檢測的45.45%降至第5次檢測的1.72%，說明豬群偽狂犬病野毒抗體逐步降低，凈化初步成功。最后1頭陽性帶毒豬建議豬場盡快淘汰，半年后應再復查1次。

2.2 偽狂犬病野野毒實時熒光PCR檢測結果（見表2）

表 1?PRV?gE 野毒抗體檢測結果

表2 偽狂犬病野野毒實時熒光PCR檢測結果

在凈化之初，對有臨床癥狀的仔豬進行偽狂犬病野野毒實時熒光PCR檢測，結果表明豬場新生仔豬及保育豬群呈現較為嚴重的感染狀態，陽性率高達48.28%。采取凈化方案后，豬群繁殖性能明顯改善，產仔數、健仔數、新生仔豬成活率等指標明顯提高。3個月后進行第2次檢測時，新生仔豬群偽狂犬病野毒陽性率已降至27.78%，效果明顯；到2015年3月，豬場新生仔豬抽樣結果顯示偽狂犬病野野毒實時熒光PCR檢測陽性率已經為0%，且再無新的偽狂犬病仔豬出現。

3 討論

我國預防豬偽狂犬病主要采取免疫接種的方式，首選疫苗為豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗。豬偽狂犬病基因缺失疫苗免疫原性好、抗體產生快，保護力強，可把疫苗免疫豬與野毒感染豬區分開。偽狂犬病gE抗體ELISA檢測試劑盒能區分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產生的抗體，通過檢測結果可判斷豬只是否感染偽狂犬病野毒。豬偽狂犬病病毒(gE基因)實時熒光PCR檢測試劑盒可對病料進行野外強毒病原檢測。通過5次連續監測結果表明，農戶小型種豬場在實施科學免疫接種的基礎上，結合抗體和病原檢測，嚴格隔離、淘汰、凈化，完全能夠清除野毒感染,使種豬場成為偽狂犬病陰性豬場。

[1]?殷震，劉景華.動物病毒學[M].第2版.?北京：科學出版社，1997：998—1009.

[2]?趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.豬病學[M].第9版.北京：中國農業大學出版社，2008：465—476.

[3]?萬遂如.關于養豬場偽狂犬病的凈化問題[J].今日畜牧獸醫，2014(8)：1—4.