分光光度法測定葛根葉中總黃酮的含量

王翰華　陸元勛　胡夢月　周松青　金雯

摘 要：目的：建立葛根葉中總黃酮含量的測定方法。方法：以蘆丁為對照品，選擇510nm為測定波長，采用分光光度法測定葛根葉中總黃酮的含量。結果：蘆丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范圍內線性關系良好（r=0.9996），平均回收率為98.72%，RSD為2.6%。結論：分光光度法精密度高，重復性好，可用于葛根葉中總黃酮含量的測定。

關鍵詞：葛根葉；總黃酮；含量測定；分光光度法

中藥葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd） Ohwi或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。在我國具有悠久的歷史，在《本經》、《別錄》等均有記載。味甘、辛、涼，歸脾、胃經，具有解肌退熱、生津、透疹、升陽止瀉之功效。由于葛根具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量及降低血壓等作用[1，2]，含有多糖及多種微量元素[3]，現已被廣泛應用于保健食品中，是我國衛生部批準的第一批藥食同源的植物[4，5]。臨床上主要用于冠心病、高血壓、心絞痛、高黏血癥、腦梗死、椎-基底動脈供血不足等多種疾病的治療。[6]目前，未見有葛根葉的相關研究報道。為了擴大葛根的藥用部位，文章采用分光光度法測定葛根葉中總黃酮含量，為葛根葉的后續研究和開發打下基礎。

1 實驗材料

1.1 儀器

TU-1818型紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；BS124S型電子分析天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；KQ-100B型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑

葛根葉藥材購于安徽省亳州市藥材市場。蘆丁對照品（中國生物制品檢定所，批號：100080-200707）。所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品15.1mg，置于50mL容量瓶中，加入60%乙醇適量，溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備。取葛根葉粉末5g，精密稱定，置錐形瓶中，加入60%乙醇50mL，稱重，超聲30min，60%乙醇補足失重，濾紙過濾，取續濾液，即得。

2.3 測定波長的選擇

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1.0mL，置25mL容量瓶中，先加入5%的亞硝酸鈉溶液1.0mL，搖勻，放置5min，再加入10%的硝酸鋁溶液1.0mL，搖勻，放置5min，再加入4%的氫氧化鈉溶液10.0mL，加60%的乙醇至刻度，混勻，靜置l5min。以上述不加蘆丁對照品液的混合液為空白參照，在200nm-800nm波長范圍內掃描，確定最大吸收波長為510nm。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線的制備。精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置于25mL容量瓶中，照“2.3”項下方法，自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起依法測定各個標準品溶液的吸光度，以吸光度A為縱坐標，濃度C為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程A=0.1529C-0.0023，r=0.9996，表明蘆丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.4.2 精密度試驗。精密吸取對照品溶液3.0mL，共6份，分別置于25mL容量瓶中，照“2.3”項下方法操作，測定吸光度，結果吸光度的RSD為0.98%，表明本方法精密度良好。

2.4.3 重復性試驗。取葛根葉粉末6份，按“2.2”項的方法制備供試品溶液，精密量取供試品溶液1mL，置25mL容量瓶中，按“2.3”項下的方法操作，測定吸光度，計算葛根葉中總黃酮含量的RSD值為1.3%，表明本方法重復性良好。

2.4.4 穩定性試驗。精密吸取葛根葉供試品溶液1.0mL，按“2.3”項下方法操作，在0min、5min、10min、15min、20min、30min時依法測定吸光度，RSD值為1.6%，表明本法在30min內測定是穩定的。

2.4.5 加樣回收率。精密稱取已知總黃酮含量的葛根葉，分別精密加入高、中、低濃度蘆丁對照品適量，照“2.3”項下方法操作，每個濃度平行三份，測定吸光度，以計算的檢測量減去本底，比上加入量算得回收率，結果見表1。

2.5 樣品的測定

取葛根葉6份，按照“2.2”項下的方法制備供試品溶液，依法測定吸光度，計算得總黃酮含量9.08mg/g，RSD=1.9%。

3 討論

目前關于總黃酮含量的測定方法有比色法、紫外分光光度法、薄層色譜法等，其中以比色法最常用，且多以蘆丁為對照品。該法操作簡便，穩定性和重現性好，因此本實驗選擇以蘆丁為對照品的比色法為測定方法。

在供試品的提取過程中，比較了回流提取和超聲提取兩種方法，結果表明回流提取效率高。同時考察了不同比例的乙醇溶劑，發現60%乙醇提取效率高。

葛根因含葛根素，大豆苷及大豆苷元，金雀異黃素和芒柄花黃素等異黃酮類成分，近年來葛根在防治骨質疏松癥方面的作用得到廣泛關注。[7，8]綜合國內外數據庫檢索的結果，未見有葛根葉的相關報道。基于同株植物含有相同化學成分的原理，對葛根葉的研究開發，有利于擴大葛根的藥用部分，有利于葛根的深入開發和研究，有利于推進抗骨質疏松藥物的研究。

參考文獻

[1]姚丹，丁選勝.葛根素藥理作用機制探討及臨床應用[J].中國臨床藥理學與治療學，2008，13（4）：468-472.

[2]白東義，佟春玲，韓慧，等.葛根素的藥理作用及其臨床應用研究進展[J].江蘇中醫藥，2009，41（3）：76-78.

[3]易紅，楊華.葛根的品種產地和提取工藝研究進展概況[J].中國實驗方劑學雜志，2006（11）：601.

[4]李悅，李艷菊.國內外葛根功能食品研究進展[J].食品研究與開發，2007，28（12）：174-177.

[5]李玉山.葛根的綜合開發和利用[J].林產化學與工業，2009，29（6）：109-114.

[6]楊杰忠.葛根素的臨床應用進展[J].中國醫藥指南，2012，10（21）：465-466.

[7]姚紅，黃少華，蘇子仁.葛根總黃酮對去卵巢大鼠骨密度及骨鈣影響的實驗研究[J].新中醫，2005，37（2）：92-93.

[8]Wong R，Rabie B.Efect of puerarin on bone formation[J].Osteoarthritis Cartilage，2007，15（8）：894-899.

作者簡介：王翰華（1982-），男，浙江寧波人，碩士，浙江醫藥高等專科學校講師，從事中藥質量標準研究和中藥相關課程教學。