HPLC法同時(shí)測(cè)定氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松的含量

★ 丁志軍羅美蘭 廖銀根 許時(shí)貴 徐瑞 （江西省皮膚病專科醫(yī)院藥劑科 南昌 330001）

HPLC法同時(shí)測(cè)定氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松的含量

★ 丁志軍*羅美蘭 廖銀根 許時(shí)貴 徐瑞 （江西省皮膚病專科醫(yī)院藥劑科 南昌 330001）

目的：建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松含量的方法。方法：Agilent C18色譜柱（150mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇（A）-水（B），梯度洗脫；流速1.0m L/m in；柱溫20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm。結(jié)果：氯霉素、醋酸地塞米松的線性范圍分別為0.784～7.840μg（r=0.999 8）、0.019 84～0.198 40μg（r=0.999 7）；平均加樣回收率分別為99.00%、98.91%，RSD分別為0.29%、0.89%（n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于氯地霜的質(zhì)量控制。

氯地霜；氯霉素；醋酸地塞米松；高效液相色譜法

氯地霜是我院制劑室自制制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：贛藥制字H20090303），由氯霉素、醋酸地塞米松、羥苯乙酯等組成的水包油型乳膏劑，具有抗菌、消炎作用，臨床上常用于皮炎、濕疹、痤瘡等，療效良好。制劑原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)2種主要成分的含量測(cè)定分別采用抗生素微生物檢定法、高效液相色譜法。但抗生素微生物檢定法的專屬性差，凡具有抗菌活性的物質(zhì)都會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，并且操作繁瑣，影響因素多，難以掌握，致使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確，為了更好地控制制劑的質(zhì)量，保證制劑療效，故筆者研究建立了梯度洗脫高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氯地霜中2種主要成分的含量。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；BP-211D Sartorius電子天平（德國(guó)）；UV-2401紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）。

1.2 試藥 氯霉素對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)130555-201203）；醋酸地塞米松對(duì)照品（含量99.2%，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100122-201206）；甲醇（色譜純，Merck公司）；水（重蒸餾水，江西省皮膚病專科醫(yī)院制劑室）；其余試劑均為分析純；氯地霜（每20 g含氯霉素0.2 g與醋酸地塞米松5mg，江西省皮膚病專科醫(yī)院制劑室，批號(hào)131001,131101,131201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（150mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（見(jiàn)表1）；流速：1.0m L/m in；柱溫：20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；進(jìn)樣量10μL。

表1 梯度洗脫條件

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取氯霉素對(duì)照品、醋酸地塞米松對(duì)照品適量，精密稱定，置量瓶中，加流動(dòng)相溶解制成每1m L分別含392.00,9.92μg的對(duì)照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量（約相當(dāng)于氯霉素、醋酸地塞米松分別為20,0.5mg），精密稱定，加甲醇約20m L，置60℃水浴中加熱，攪拌使氯霉素及醋酸地塞米松溶解，轉(zhuǎn)入50m L量瓶中，同法操作2次，放冷至室溫，用甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2h以上，取出，迅速濾過(guò)，續(xù)濾液放至室溫，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取按氯地霜處方工藝方法制備的缺氯霉素、缺醋酸地塞米松的陰性樣品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果供試品在與對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上有相同的氯霉素峰、醋酸地塞米松峰，而陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液2.0,5.0, 10.0,15.0,20.0μL分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，氯霉素的回歸方程為：Y＝610.789 7X＋2.780 5（r＝0.999 8），線性范圍為0.784～7.840μg；醋酸地塞米松的回歸方程為：Y＝2262.147 8X＋1.170 7（r＝0.999 7），線性范圍為0.019 84～0.198 40μg。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面積值，RSD分別為0.50%、0.84%，表明精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，分別在0，2，4，6，8 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面積值，RSD分別為0.48%（n＝5）和1.39%（n＝5），表明氯霉素、醋酸地塞米松在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)得峰面積值，計(jì)算氯霉素、醋酸地塞米松含量，RSD分別為1.34%，1.69%，表明此法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的樣品（批號(hào)131001）6份，分別精密加入一定量的氯霉素、醋酸地塞米松對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.10 樣品含量測(cè)定 取本品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為10μL，按外標(biāo)法計(jì)算氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別取氯霉素、醋酸地塞米松對(duì)照品溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果二者分別在277，240 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，但因處方中氯霉素與醋酸地塞米松的含量比為40∶1，為了兼顧二者的檢測(cè)靈敏度，經(jīng)試驗(yàn)摸索，最終選擇240 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 分析方法的確定 與抗生素微生物檢定法比較，梯度洗脫反相高效液相色譜法測(cè)定氯地霜中氯霉素和地塞米松的含量，能使制劑中的組分與輔料有效分離，輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，快速，結(jié)果準(zhǔn)確，更加適合于氯地霜生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典·二部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄93、附錄29.

Simultaneous Determ ination of chloramphenicol and Dexamethasone Acetate in Compount Pexamethasone Cream by HPLC

DING Zhi-jun,LUO M ei-lan,LIAO Yin-gen,XU Shi-gui,XU Rui
Departmentof Pharmacy,Dermatology Special Hospital of Jiangxi Province,Nanchang 330001,China.

Objective:To establish an HPLCmethod for the simultaneous determination of chloramphenicol and dexamethasone acetate in Compount Pexamethasone cream.Methods：The chromatographic separation was performed on a Agilent C18column with amixture of methanol-water asmobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min，the column temperature wasmaintained at 20℃and the detection wavelength was 240 nm．Results：The calibration curves in the range of 0.784~7.840μg（r=0.999 8）for chloramphenicol and 0.019 84~0.198 40μg（r=0.999 7）for dexamethasone acetate were good linear，respectively.The average recoveries were 99.00%and 98.91%；RSD were 0.29%and 0.89%（n=6）.Conclusion:An accuratemethod can be used for the quality control of Compount Pexamethasone cream．

Compount Pexamethasone cream;chloramphenicol;dexamethasone acetate;HPLC

R927.2

B

2014-03-18）編輯：曾文雪

*第一作者：丁志軍，男，碩士，中藥師、工程師。研究方向：中藥（藥物）制劑。Tel：15070917985,E-mail：dzj7880@126.com。