雄激素受體和NF-κB在人乳腺癌中的表達及臨床意義

陳雙龍，高德宏，歐陽忠，楊清默

（廈門大學附屬第一醫(yī)院乳腺外科，福建廈門 361003）

雄激素受體和NF-κB在人乳腺癌中的表達及臨床意義

陳雙龍，高德宏，歐陽忠*，楊清默

（廈門大學附屬第一醫(yī)院乳腺外科，福建廈門 361003）

*通信作者（corresponding author）:oyzh_ouyang@163.com

雄激素受體（androgen receptor，AR）可在70%以上的乳腺癌中表達，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，其主要生物功能是通過調(diào)控一系列基因表達參與炎性反應、細胞增殖和細胞凋亡的調(diào)節(jié)。NF-κB在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用［2］。在不同乳腺癌分子亞型中AR與NF-κB的表達是否有差異，該差異是否可作為不同乳腺癌分子亞型的預后指標或治療靶點仍不清楚。

本研究檢測人乳腺癌組織中AR和NF-κB的表達，探討AR和NF-κB與乳腺癌臨床病理特征、分型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，揭示AR、NF-κB與乳腺癌不同分子分型的關(guān)系，為不同乳腺癌分子亞型預后和治療靶點的選擇提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源及病例分組:收集廈門大學附屬第一醫(yī)院病理科2010年1月至2012年2月的乳腺癌手術(shù)標本204例，女性，發(fā)病年齡34～74歲。其中101例三陰型乳腺癌及103例非三陰型乳腺癌，所有標本均經(jīng)病理鑒定證實。

1.1.2 試劑:兔抗人AR單克隆抗體、兔抗人NF-κB磷酸化P65（p-P65）單克隆抗體、兔抗人β-actin單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG以及Western blot發(fā)光試劑（Santa Cruz公司）。

1.2 方法

1.2.1 病理組織學觀察:乳腺癌及癌周組織均經(jīng)病理學診斷證實為浸潤性導管癌，采用WHO（2002版）診斷標準進行乳腺癌組織學分級，常規(guī)病理切片，HE染色，觀察組織學情況。

1.2.2 Western blot檢測AR和NF-κB蛋白表達情況:提取組織總蛋白，Bradford法檢測蛋白濃度。經(jīng)SDS-PAGE電泳后，電轉(zhuǎn)至PVDF膜，分別用兔抗人AR和NF-κB P65單克隆抗體進行雜交，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG反應后，顯色后凝膠成像系統(tǒng)檢測蛋白熒光。β-actin作為內(nèi)參，目的蛋白表達水平用目的蛋白/內(nèi)參吸光度比值進行表示。

1.2.3 統(tǒng)計學分析:應用SPSS 13.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間對比采用t檢驗;相關(guān)性分析采用Spearman檢驗和直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 AR蛋白在乳腺癌中的表達水平及其與臨床病理特征的關(guān)系:101例三陰乳腺癌細胞中有28例AR呈陽性表達（圖1），表達量為2.76±0.43;而103例非三陰乳腺癌中有76例呈陽性表達，表達量為4.24±1.03。在三陰型乳腺癌中，組織分級高的患者AR表達明顯低于組織分級低的患者（P＜0.05），腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯低于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.01）（表1）。

2.2 NF-κB P65蛋白在乳腺癌中的表達水平及其與臨床病理特征的關(guān)系:101例三陰乳腺癌細胞中有76例NF-κB P65呈陽性表達（圖2），表達量為2.23±0.64，而103例非三陰乳腺癌中僅有49例呈陽性表達，表達量為1.32±0.31。在三陰乳腺癌中，組織分級低（P＜0.05）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）的患者NF-κB P65陽性率高;在非三陰乳腺癌中，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）相關(guān)（表2）。

圖1 乳腺癌及癌旁乳腺組織AR的表達Fig 1 Expression of AR in or around mammary cancer tissue

表1 AR與三陰性和非三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Table 1 Analysis of AR in triple-negative and nontriplenegative breast cancer

圖2 乳腺癌及癌旁乳腺組織NF-κB P65的表達Fig 2 Expression of NF-κB P65 in or around mammary cancer tissue

3 討論

最新研究表明AR和NF-κB在乳腺癌的生長和發(fā)展中具有重要作用［3］。雄激素通過降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表達促使細胞凋亡或降低細胞周期調(diào)節(jié)蛋白cyclin D1的表達，影響細胞周期，抑制細胞增殖，AR表達與組織分級明顯相關(guān)［4］。在乳腺癌中NF-κB的表達也異常活躍，其在乳腺癌中的差異表達及其對乳腺癌預后意義，目前國內(nèi)鮮見報道。本研究表明NF-κB P65在三陰型和非三陰型乳腺癌表達率存在顯著差異。NF-κB P65的表達水平與三陰型乳腺癌的組織分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。而在非三陰型乳腺癌中NF-κB的表達僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定的相關(guān)。在三陰和非三陰乳腺癌中NF-κB與臨床病理特征不盡相同，說明NF-κB在三陰和非三陰乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及預后中所起作用也有差異，NF-κB在三陰乳腺癌高表達預示其可能與三陰乳腺癌發(fā)病有關(guān)。提示AR和NF-κB可望作為三陰乳腺癌的重要預后指標，成為三陰型乳腺癌亞群治療靶點。

表2 NF-κB P65與三陰性和非三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Analysis of NF-κB P65 in triple-negative and nontriple-negative breast cancer

［1］劉曉珍，牛昀.雄激素受體與乳腺癌分子分型的研究進展［J］.中華病理學雜志，2014，43:498-500.

［2］陳學東，錢立元，易剪梅，等.三陰乳腺癌雄激素受體表達與瘤體大小、淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系［J］.中國普通外科雜志，2014，23:695-697.

［3］Song L，Lin C，Gong H，et al.miR-486 sustains NF-κB activity by disrupting multiple NF-κB-negative feedback loops［J］.Cell Res，2012，23:274-289.

［4］劉敏，李琳，劉峰，等.人乳腺癌 MCF-7細胞中TRIM22下調(diào)NF-κB的表達［J］.沈陽藥科大學學報，2013，30:972-976.

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A

10.16352/j.issn.1001-6325.2015.09.024

1001-6325（2015）09-1259-02

2015-03-19

2015-05-28

福建省衛(wèi)生廳青年科研課題（2012-2-77）