不同施灸方法對模型大鼠衰老脾臟和胸腺指數以及學習能力、記憶力的影響研究

布仁圖亞 斯欽圖

(1赤峰市蒙醫中醫醫院 內蒙古赤峰 024000;2內蒙古民族大學附屬醫院 內蒙古通遼 028000)

不同施灸方法對模型大鼠衰老脾臟和胸腺指數以及學習能力、記憶力的影響研究

布仁圖亞1斯欽圖2?

(1赤峰市蒙醫中醫醫院 內蒙古赤峰 024000;2內蒙古民族大學附屬醫院 內蒙古通遼 028000)

目的：通過以胃穴為切入點，探討不同施灸方法(正交實驗L9(34))方法)對衰老大鼠模型篩選。方法：將110只SD大鼠隨機分空白對照組、模型對照組和治療組(1-9組)，采用D-半乳糖造模方法，觀察和檢測體重變化、脾臟和胸腺指數以及學習能力，記憶力等指標。結果：脾臟和胸腺指數以及體力、記憶力等相關指標的觀察發現，治療一、二、三、四、五、六、七、八、九之間的胸腺和脾臟指數、體力和記憶力等均無顯著差異。結論：1.D-半乳糖衰老模型適用于不同灸療法抗衰老篩選試驗研究領域。2.闡明不同施灸方法抗衰老生物學方法的基礎。為下一步多因素，多水平研究提供實驗依據。

蒙醫灸療法;抗衰老;不同施灸方法

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物：110只純種4月齡SD大鼠，體重為雄性(304±30)g、雄性(376±40)g、雌雄各半。

1.1.2 器材：755B紫外-可見分光光度機、固定熱水盒、電子分析天平、高速冷凍離心機、4-20 0C和-80 0C冰箱、水迷宮、游泳盒。

1.1.3 試劑及施灸器：AUY120型電子天平、MORRIS水迷宮視屏跟蹤分析機、D-半乳糖(上海楷洋生物技術有限公司，編號：T0047)、艾灸由北京中醫醫藥大學提供。

1.2 方法

1.2.1 分組：將110只SD大鼠按體重隨機分成11組。分別為正常對照組、模型對照組、治療組(用正交試驗L9(34)設計組為：第一、二、三、四、五、六、七、八、九組)。造模前將大鼠雌雄分開、在干凈舒適環境中飼養。每天將更換顆粒資料飲水和窩墊。試驗第六周開始分別對所進資料和飲水量進行記錄。

1.2.2 造模：成正常對照組外均用D-半乳糖按每周體重每日150mg/kg的比例頸皮下注射［1］，正常對照組注射同等劑量生理鹽水。在造模期間每周稱一次大鼠體重，并觀察大鼠運動舉止和皮毛的顏側色等外部特征。造模時間為6周。出現大鼠皮毛顏色變黃脫落，眼光變呆，動作緩慢，出現無精打采、駝背、怕冷，體重增加不明顯等外部特征，與文獻報道一致［2-5］，即造模成功。

1.2.3 施灸：從7周開始施灸，其中對照組和模型對照組只給固定條件，不做任何處理。對灸療組參照文獻在大鼠胃穴(在大鼠第12脊椎下凹處)剪去穴位周圍鼠毛［6］，進行施灸。時間為5min、10min、15min，直徑為0.1cm、0.2cm、0.3cm，灸墊為0.8cm、1.0cm、1.2cm，7天為一療程，隔一天灸一次，共灸三個療程。

1.2.4 水迷宮試驗：灸療結束前一周進行該試驗用于大鼠記憶能力的檢驗，試驗前進行培訓。水深度37cm，水溫度為26±℃，電腦系統只能認同紅色標志，在大鼠的頭上標紅色，采用環形水池，水池的1/4中放入低于1cm左右的逃避平臺。分A、B、C、D等四個區，每次不同的四個區開始放入水中開始訓練，模型大鼠和空白對照組大鼠預先訓練4天，然后開始正常試驗，每支大鼠每天早晚各訓練2次，每次120s或者當大鼠逃到水中的逃避平臺時立即結束。檢測指標：逃避時間每只大鼠從放入水中開始到逃到逃避平臺時的時間(電腦系統自動記錄時間)。

1.3 標本收集及檢測方法

采用斷頭取血方法，將取脾臟和胸腺，用生理鹽水洗干凈后進行稱重。計算出脾(胸腺)指數公式為：脾(胸腺)=脾(胸腺)重量(mg)/體重(g)。

1.4 數據統計采用正交設計助手v3.1軟件處理。

2.結果

2.1 造模狀況

正常對照組與模型對照組比較，體重有明顯的差異(P＜0.01)，表明造模后模型對照組體重增長變化緩慢，結果見表1。

造模后各灸療組與模型組大鼠體重比較，各灸療組大鼠體重增加比模型組快(P＜0.05)，說明造模成功后模型組大鼠體重增長受限，結果見表2。

表1 造模3周后正常對照組與模型對照組大鼠體重比較(X±S，n=10)

表2 造模后各灸療組和模型對照組大鼠體重比較(X±S，n=10)

除此之外，我們還觀察到，模型大鼠動作比正常對照組拜年遲緩，毛色枯黃，精神萎靡不振等外部特征。

2.2 試驗方法

按照L9(34)正交表進行試驗，并將測定結果填于表3中，結果見表3。

表3 胸腺和脾臟重量指數優化L9(34)表及實驗結果

2.3 結果

從直觀分析及方差分析可知：胸腺和脾臟重量優化。A、B、C各因素水平之間均無顯著性差異，最佳胸腺條件為A2B2C2即為：用10min時間0.2cm灸墊1.0的直徑。最佳脾臟條件為A2B1C1即為：用10min時間0.1cm灸墊0.8的直徑。結果見表4。

表4 胸腺和脾臟重量指數方差分析標記n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

2.4 試驗方法

按照L9(34)正交表進行試驗，并將測定結果填于表5中，結果見表5。

表5 游泳和水迷宮試驗的優化L9(34)表及實驗結果

2.5 結果

從直觀分析及方差分析可知：體力和記憶力的優化，A、B、C各因素水平之間均無顯著性差異，最佳體力的條件為A2B2C2即為：用10min時間0.2cm灸墊1.0cm的直徑。最佳記憶力的條件為A1B2C3即為：用5min時間0.2cm灸墊1.2的直徑。結果見表6。

表6 游泳和水迷宮試驗的方差分析標記n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

3.結論與討論

結論：根據上述試驗，不同施救方法對胸腺的重量最佳時間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm，脾臟重量最佳時間為10min灸墊為0.1cm直徑為0.8cm，體力最佳時間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm，記憶力最佳時間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm。

討論：蒙醫不同的灸療法施灸后具有不同的提高免疫力功能。本實驗通過正交設計對、胸腺和脾臟、游泳和水迷宮指數進行了優化，并多個因素、多個水平研究提供了試驗依據。

［1］斯欽圖，烏云格日樂."胃穴"，"火降穴"施灸對功能性消化不良大鼠的影響及其組穴原理［J］.針灸臨床雜志，2008，3，(24)：163 -165.

［2］徐智，吳國明，錢桂生.大鼠衰老模型的初步建立［J］.第三軍醫大學學報，2003，4(25)：9-11.

［3］博·阿古拉.蒙醫傳統療法大成［M］.赤峰：內蒙古科學技術出版社，2000，3：172-174.

［4］朱亞診，朱虹光.D-半乳糖致衰老動物模型的建立及其檢測方法［J］.針灸臨床雜志，2010，3，(14)：160-161.

［5］斯欽圖，博·阿古拉，于天源，等.蒙醫灸療法抗衰老二三穴組穴配伍規律試驗研究［J］，2010，12(6)：48-49.

［6］烏云格日樂，斯欽圖.蒙醫灸療的保健作用及其機理［J］.中國民族醫藥雜志，2007，4(4)：122-124.

R-332

B

1009-6019(2015)03-0016-02

布仁圖亞，碩士，赤峰市蒙醫中醫醫院蒙醫高血壓科住院醫師

斯欽圖，博士，內蒙古民族大學教授、主任醫師