豬藍耳病的防控及其免疫

曾亮明

(福州大北農生物技術有限公司，福建福州350014)

豬繁殖與呼吸綜合征是當今國內乃至世界養豬業的主要殺手，如何有效地控制豬繁殖與呼吸綜合征帶來的危害，保證養豬業的健康發展，一直以來是全球性的豬病熱點。針對本病，筆者就近年來防控PRRS的工作經驗、教訓和學習心得談幾點不成熟的看法，謹與同行交流。

1 當前PRRS對豬群危害的主要表現

1.1 繁殖障礙時有發生

母豬繁殖障礙主要表現為妊娠后期母豬的流產、早產、難產、產死胎；圍產期母豬的持續高熱；初生仔豬的大批死亡；公豬精液受損、母豬返情率高，發病豬場的病程約4個月，圍產期母豬的病死率3%～5%不等，哺乳仔豬的全群死亡率高達40%左右，母豬返情率高達50%。

由藍耳病導致的繁殖障礙現象在很多情況下都能發生。

首先在PRRS陰性或無臨床危害的陽性（感染低毒力毒株或感染率較低）豬場。如果很難長時間地與外界切斷所有的聯系，那么一旦強毒株入侵，勢必暴發PRRS。

其次，許多免疫了藍耳病疫苗的豬場，仍然存在嚴重的繁殖障礙現象，即使種豬群加強藍耳病疫苗的免疫，該現象仍不能得到有效解決。

1.2 致死性呼吸道障礙隨處可見

致死性呼吸道障礙多發生在陽性 （毒力偏強，感染率高）豬場。盡管之前有研究發現，在陽性豬場內，母乳抗體可使大部分初生仔豬獲得3～4周的被動免疫保護，但從目前國內的情況看，母乳抗體的保護是極其有限的，甚至許多早期（14日齡左右）免疫過PRRS弱毒疫苗的仔豬仍然發病，主要表現為保育豬繼發感染（副豬嗜血桿菌、鏈球菌等）嚴重，發病高峰多出現在40～60日齡，藥物防制無明顯效果，死淘率15%～40%不等。

1.3 藍耳病導致的免疫抑制日趨嚴重

1.3.1 影響豬瘟免疫質量

豬瘟免疫檢測不達標的現象越來越普遍，許多豬場的母豬豬瘟抗體陽性率徘徊在60%左右。碰上這種現象，許多豬場會理性地深挖豬瘟疫苗及免疫操作等因素，這是必要的，但往往對藍耳病因素缺乏關注。

關于藍耳病影響豬瘟免疫質量的問題，國內許多專家很早就發現并呼吁關注。早在2001年，西南農業大學佘永健教授從臨床現象結合實驗室檢測求證了該現象的存在。中國農大楊漢春教授于2005年通過攻毒實驗證實并著文報道了該現象的存在。

筆者從近幾年的實驗室檢測總結發現，當豬群中藍耳病抗體S/P值高的比例偏大（未免群S/P值＞1.0者比例＞10%；免疫群S/P值＞2.0者比例＞10%），且S/P值離散度偏大（樣品S/P值變異系數超過40%）時，該豬群豬瘟抗體檢測合格率不理想。以2011年福州大北農技術服務檢測中心對全國200多個規模化豬場的跟蹤檢測數據看，100%符合以上規律。

1.3.2 毒力偏強疫苗導致嚴重的免疫抑制

眾所周知，藍耳病導致免疫抑制。在此筆者著重關注的是接種毒力偏強的PRRS活疫苗導致免疫抑制的問題。這種現象主要表現為持續免疫某種PRRS活疫苗一定時期后，豬群繼發感染加重，豬場生產水平持續惡化。這是許多豬場認為免疫PRRS疫苗無效甚至有害的根源。

2 藍耳病的免疫機制

2.1 體液免疫

IgM感染后5～7天出現，2～3周降至檢測限以下，IgG感染后7～10天出現，4周達高峰，中和抗體（NAs）感染后3周出現，60天達高峰，并以較低水平長期存在。

多年的免疫實踐揭示，免疫PRRS疫苗所產生的特異性體液免疫的臨床保護意義是極其有限的。有幾個原因值得我們考慮。一、許多抗體在免疫后一周左右出現并持續存在數月，但與保護作用無關；二、中和性抗體產生延遲，免疫后3周才出現，并以較低水平長期存在，低水平的中和性抗體不僅不能控制病毒的復制，反而增強PRRSV在肺泡巨噬細胞中的復制（抗體依賴性增強作用，ADE）。

PRRSV的ADE現象在體外和體內都已被證實，在培養物中加入一定滴度的PRRSV抗體，可使PRRSV的增殖滴度提高10～100倍；在病毒中加入一定量PRRSV抗體，再注射妊娠中期的胎兒，結果比單獨注射PRRSV的致病性顯著增強。

所以藍耳病的特異性體液免疫的臨床保護意義存在許多不確定的因素。縱觀歷年來PRRSV滅活疫苗臨床應用的局限性，能給我們更多的啟示。

2.2 特異性細胞免疫

免疫PRRS弱毒疫苗后，誘導的特異性細胞免疫水平低。因為，T細胞對PRRSV的初次反應弱，PRRSV特異性的IFN-γ分泌細胞最早在接種后3周出現，之后10周在50～100萬單位/每百萬外周血單核細胞（PBMCs）范圍內不規律地波動（水平偏低），感染1年后T細胞反應逐步增強，在接種后48周IFN-γ分泌細胞增長到400～500萬單位/每百萬 PBMCs。

一般，如偽狂犬基因缺失疫苗，接種后3周IFN-γ分泌細胞數量在200～300萬單位/每百萬PBMCs間波動，這是免疫PRV基因缺失疫苗能產生有效的特異性細胞免疫保護的根源。而免疫PRRS弱毒疫苗IFN-γ分泌水平低，提示產生的特異性細胞免疫力低，沒有臨床保護意義。

2.3 巨噬細胞默許感染的改變

巨噬細胞默許感染的改變是針對PRRSV弱毒疫苗免疫假定賦予的功能，這是目前大多數PRRS弱毒疫苗的主要臨床功能。研究表明，巨噬細胞默許感染的改變是免疫調節所致，但其完整機制尚未明了，實驗室研究和田間使用表明，這種機制對PRRS的防控作用是極其脆弱的。因為，近幾年大量免疫過PRRS弱毒疫苗的豬群仍然可以感染其他毒株，并暴發藍耳病。

2.4 PRRS特異性免疫的現實啟示

綜上所述，PRRS弱毒疫苗在臨床免疫中產生的特異性免疫力是極其脆弱的。從多年的防控實踐中，我們發現許多免疫過PRRS弱毒疫苗的仔豬，繼發感染現象仍然十分嚴重。造成這種現象的根本原因是PRRS弱毒疫苗免疫保護力在仔豬早期缺席所致。眾所皆知，PRRSV破壞的主要是豬的肺泡巨噬細胞，致使豬體的非特異免疫功能受到傷害，導致繼發感染加重。

通常，我們于14日齡左右對仔豬免疫PRRS弱毒疫苗，免疫后難以產生有效的特異性免疫保護。即仔豬14日齡左右免疫PRRS弱毒疫苗后，大多數情況下只能使其獲得藍耳病弱毒的一致性感染，而相應的特異性免疫保護極其微弱。由此我們發現，14日齡免疫過PRRS弱毒疫苗的仔豬，第一，仍然一直受到養殖場內藍耳病野毒的攻擊，非特異性免疫功能遭受嚴重破壞；第二，隨著仔豬群非特異性免疫功能的降低，細菌性疾病隨時可以乘虛而入。 細菌性疾病多數是環境中的常在菌，以副豬嗜血桿菌為例，仔豬出生后一周齡就可以在其鼻腔內分離到該菌，隨著日齡的增長，該菌逐漸向仔豬的肺部移生，而且在很多情況下，抗生素對副豬嗜血桿菌的這種移生現象的封阻作用極其有限，一旦遇上非特異性免疫功能遭受嚴重破壞的仔豬，該菌就能輕易突破肺部屏障，形成菌血癥，導致臨床常見的多發性漿膜炎。

所以，PRRS弱毒疫苗特異性免疫力低下是許多豬場免疫PRRS弱毒疫苗無效甚至有害（免疫毒力偏強疫苗，雪上加霜，產生免疫抑制）的癥結所在。而“特異性免疫力低下”是目前大多數藍耳病弱毒疫苗共同存在的硬傷。

3 佐劑改良PRRSV弱毒疫苗的探索

3.1 實驗概況

3.1.1 材料

“藍定抗”抗原 （CH1-R株藍耳病弱毒疫苗）：產品批2011002 106.0TCID50/頭。“藍定抗”專用佐劑（稀釋液）：批號2011002。PRRSV強毒 （TJ株）：5代，4～8周齡藍耳病抗原抗體陰性豬，肌注105.0TCID50/頭，觀察21天應5/5發病，致少 3/5 死亡（45，5/5，4/5）。

3.1.2 實驗動物

15頭同窩仔豬,無任何疫苗免疫，實驗前篩選：CSFV抗原、抗體，PRRSV抗原、抗體，PRV gE抗體，PCV-2抗體、抗原皆為陰性，飼養于無菌室內。

3.1.3 實驗方法

將實驗豬（34日齡）隨機分成3組，每組5頭豬。A組：肌注藍定抗抗原1頭份＋專用佐劑2毫升。B組：肌注藍定抗抗原1頭份＋常規稀釋液2毫升。C組：注射等量生理鹽水。免疫后1、3、5、7、14、21、28 天采血分析細胞免疫指標。 免疫后28天攻毒TJ株（3倍標準劑量），并于攻毒后 1、3、5、7、14、21、28 天采血分析細胞免疫指標。

3.2 實驗結果

3.2.1 細胞因子的變化

IFN-γ檢測分析顯示：免疫3天，專用佐劑（稀釋液）組開始產生IFN-γ。說明相對其他組，專用佐劑使更多的豬在早期產生特異性細胞免疫力。

IFN-γ濃度變化情況

IFN-γ檢測分析顯示：免疫3天，專用佐劑（稀釋液）組開始產生IFN-γ。說明相對其他組，專用佐劑使更多的豬在早期產生特異性細胞免疫力。

IL-18濃度變化情況

IL-18檢測分析顯示：專用佐劑（稀釋液）組IL-18產生速度快（3天），濃度高，適時消減。說明相對其他組，專用稀釋液組豬群產生細胞免疫更快、更強，攻毒后，炎癥反應更少。

3.2.2 淋巴細胞濃度的變化

淋巴細胞濃度分析表明：相對其他組，專用佐劑（稀釋液）組豬群非特異性免疫（NK）和細胞免疫（T、Th、Ts、Tc）沒有抑制；攻毒后，相對其他組，專用佐劑（稀釋液）組非特異性免疫（NK）和細胞免疫（T、Th、Ts、Tc）穩步回升，提供堅強的細胞免疫保護力。

3.2.3 藍定抗的田間表現

藍定抗是CH1-R株藍耳病弱毒疫苗，繼承了CH1-R株安全、交叉保護力強的優秀品質，同時配合專用佐劑，彌補了其他藍耳病弱毒疫苗特異性保護力低的弊端。2011年7月～2012年5月，在全國1000多萬頭豬使用藍定抗的記錄顯示：①免疫副反應極小，對種豬和仔豬都十分安全。②日常免疫，藍耳病預防效果突出，仔豬早期（14日齡左右）免疫藍定抗，可顯著減少后期副豬嗜血桿菌繼發感染的問題。對繁殖障礙問題，免疫可以快速得到有效解決，這與藍定抗可以快速提供堅強的特異性保護息息相關。③配合抗生素使用，還能用于藍耳病以及其他病毒性疾病的緊急處理，收到預想不到的效果。