3種中藥多糖對雞新城疫疫苗免疫效果的影響

楊慶芳+楊康林+姚靜+蔣春茂

摘要：14日齡健康、非免疫羅曼蛋公雞240羽，隨機均分為8組，用雞新城疫疫苗首次免疫和二次免疫前3 d、當(dāng)日及后3 d，試驗組分別灌胃0.5 mL高、低劑量黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍根多糖（IRPS）溶液，空白對照組和免疫對照組灌胃等量生理鹽水。各組分別于首免后連續(xù)4周隨機取雞10羽稱量體質(zhì)量、測定抗體效價和T淋巴細胞增殖變化。結(jié)果表明，3種中藥多糖均可促進雞體質(zhì)量增加，提高新城疫HI抗體效價，促進外周血T淋巴細胞增殖，其中低劑量的IRPS效果最好。

關(guān)鍵詞：黃芪多糖（ASP）;淫羊藿多糖（EPP）;板藍根多糖（IRPS）;新城疫疫苗;抗體效價;T淋巴細胞

中圖分類號： S858.312.4 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）04-0220-02

收稿日期：2015-01-06

基金項目：西藏自然科學(xué)基金（編號：ZJ2013018）;江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院“鳳凰人才工程”。

作者簡介：楊慶芳（1975—），女，山西介休人，碩士，講師，主要從事動物醫(yī)學(xué)教學(xué)及科研工作。E-mail：474861982@qq.com。

通信作者：蔣春茂，教授。E-mail：1836340739@qq.com。

多糖是自然界含量豐富的重要生物大分子之一，與蛋白質(zhì)、核酸和脂類構(gòu)成了最基本的4類生命物質(zhì)[1]，其結(jié)構(gòu)和功能受到了廣泛關(guān)注，成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后探索生命的第三個里程碑[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，中藥多糖作為中藥的活性成分，其最重要的功能是具有免疫調(diào)節(jié)活性[3]。本研究從黃芪、淫羊藿和板藍根3種中藥中提取多糖，作為佐劑配合新城疫疫苗免疫雛雞，測定雞增重率、血清抗體效價和外周血T淋巴細胞增殖的動態(tài)變化，旨在為中藥多糖類免疫增強劑開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

黃芪、淫羊藿和板藍根購于當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司，分別用水提醇沉法提取黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍根多糖（IRPS），硫酸-蒽酮法測定多糖含量分別為68.5%，63.8%和53.4%。各多糖按凈含量用去離子水稀釋為高劑量（H，8 mg/mL）及低劑量（L，4 mg/mL）濃度，常規(guī)高壓消毒、備用。

1.2 試驗動物與分組

選擇健康、非免疫1日齡羅曼蛋公雞240羽，隨機分為8組，分別為空白對照組（BC組）、免疫對照組（IC組）及各中藥多糖免疫組（ASPH組、ASPL組、EPPH組、EPPL組、IRPSH組和IRPSL組），每組30羽。飼養(yǎng)至14日齡，除BC組用生理鹽水滴鼻、點眼外，IC組和中藥多糖免疫組均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、點眼免疫（2羽份/羽）進行首免，于28日齡時二免。首免和二免前3 d、當(dāng)日及后3 d，中藥多糖免疫組同時分別灌胃高劑量和低劑量ASP、EPP和IRPS，每羽0.5 mL。

1.3 樣本采集與項目測定

分別于首免后7、14、21、28 d，每組隨機取雞10羽，稱量、記錄體質(zhì)量，計算增重率;分別于免疫后7、14、21、28 d翼下靜脈采血0.5 mL，分離血清，用微量血凝抑制法（HI）測定抗體效價[4];心臟采集抗凝血（抗凝劑為檸檬酸鈉），采用MTT法[5]，在酶聯(lián)免疫儀上測定吸光度D570 nm，作為T淋巴細胞增殖指標。

1.4 數(shù)據(jù)處理

運用SPSS軟件對試驗數(shù)據(jù)進行差異性統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同日齡雞增重率的變化

由表1可見，免疫后7 d時，各組雞增重率無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）;免疫后14 d時，各給藥組增重率顯著高于空白對照組（P<0.05），但與免疫對照組不存在顯著差異（P>005），且免疫對照組與空白對照組間也無統(tǒng)計學(xué)差異存在（P>0.05）;免疫后21 d和28 d，除ASPH組外，其他各給藥組增重率均顯著高于免疫對照和空白對照組（P<0.05），但免疫對照和空白對照組無統(tǒng)計學(xué)差異存在（P>0.05）。

2.2 不同日齡雞血清抗體效價的變化

由表2可見，免疫后7 d和14 d時，各免疫組抗體效價無顯著差異存在（P>0.05），但均顯著高于空白對照組（P<0.05）;免疫后21 d和28 d時，中藥多糖免疫組抗體效價均顯著高于免疫對照和空白對照組（P<0.05）;其中21 d時，ASPH、ASPL組和IRPSL組抗體效價顯著高于其他給藥組（P>005）;28 d時，除IRPSH劑量組外，其他各給藥組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。表明，適當(dāng)濃度的中藥多糖可提高疫苗免疫的抗體效價，但以ASPL和IRPSL的免疫增強效果較好。

2.3 不同日齡雞外周血T淋巴細胞增殖的變化

由表3可見，免疫后7 d，除ASPH和ASPL組外，其他給藥組D570 nm值顯著高于空白對照組和免疫對照組（P<0.05）;各給藥組相比，除ASPH組外，其余各組均無顯著差異（P>005）。免疫后14、21、28 d，各給藥組D570 nm值均顯著高于空

表1 各組雞免疫后不同日齡增重率變化

組別

首免后不同時間增重率（%）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 89.48±3.84a 176.31±4.72b 273.19±4.87b 347.46±5.64b

IC組 87.53±2.56a 185.48±3.92ab 277.38±3.37b 339.52±4.68b

ASPH組 85.62±3.49a 192. 87±4.46a 296.84±4.66a 392.65±5.71abendprint

ASPL組 88.17±3.20a 194.42±3.67a 306.58±4.59a 416.37±4.28a

EPPH組 92.36±4.74a 190.49±3.26a 305.36±4.48a 412.41±5.57a

EPPL組 89.44±3.58a 184.74±3.78a 312.47±5.32a 430.66±5.62a

IRPSH組 86.74±3.72a 196.58±4.83a 310.58±5.67a 405.06±5.27a

IRPSL組 88.46±2.07a 198.26±4.35a 319.46±5.23a 420.37±4.79a

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。表2、表3同。

表2 各組雞免疫后不同日齡血清HI抗體效價變化

組別

首免后不同時間HI抗體效價（log2）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 2.67±0.34c 2.53±0.26c 2.45±0.33d 2.41±0.27d

IC組 3.76±0.47ab 4.67±0.35ab 5.76±0.24c 4.83±0.41c

ASPH組 3.82±0.35ab 4.85±0.33ab 7.35±0.43a 5.66±0.35ab

ASPL組 4.02±0.51a 5.38±0.36a 7.85±0.54a 6.18±0.41a

EPPH組 4.13±0.62a 5.23±0.45a 6.72±0.52b 5.54±0.26ab

EPPL組 4.26±0.57a 4.97±0.29ab 6.92±0.44b 5.73±0.35ab

IRPSH組 3.80±0.45ab 5.28±0.36a 7.26±0.36ab 5.46±0.42b

IRPSL組 3.94±0.31ab 4.75±0.46ab 7.63±0.49a 6.27±0.37a

表3 各組雞免疫后不同日齡淋巴細胞增殖的動態(tài)變化

組別

首免后不同時間吸光度（D570 nm）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 0.195±0.022bc 0.196±0.015c 0.187±0.024d 0.214±0.016d

IC組 0.189±0.017bc 0.195±0.014c 0.261±0.021c 0.304±0.021c

ASPH組 0.217±0.025b 0.259±0.016b 0.338±0.035b 0.393±0.024b

ASPL組 0.224±0.019ab 0.281±0.017ab 0.386±0.041a 0.445±0.048a

EPPH組 0.235±0.037a 0.274±0.026b 0.352±0.046ab 0.412±0.036ab

EPPL組 0.267±0.029a 0.326±0.014a 0.389±0.029a 0.427±0.031a

IRPSH組 0.237±0.033a 0.277±0.028b 0.361±0.027ab 0.419±0.023ab

IRPSL組 0.257±0.048a 0.318±0.027a 0.415±0.026a 0.452±0.046a

白對照組和免疫對照組（P<0.05）;各給藥組相比，免疫后 14 d 時各低劑量組間無顯著差異，各高劑量組及ASPL間也無顯著差異（P>0.05）;免疫后21 d和28 d時，除ASPH組外，各給藥組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

3 討論

許多研究表明，中藥多糖具有促生長作用。王學(xué)斌等研究表明，APS粉劑和APS注射液具有促進雛雞生長的作用[6]。梁英等研究也表明，飼糧中添加適量的黃芩多糖，可提高肉仔雞的生長性能[7]。本試驗結(jié)果表明，除ASPH組外，其他各給藥組雞增重率顯著增加。可能較高劑量的ASP與脂肪絡(luò)合抑制脂肪吸收，進而降低了雞的生長性能[8]。

血清抗體效價反映機體B淋巴細胞介導(dǎo)的特異性體液免疫應(yīng)答。抗體效價越高，雞對抗病毒的能力增強，雞群抗感染能力也越強[9]。本試驗結(jié)果表明，適量的中藥多糖能顯著增強雛雞的體液免疫，提高ND疫苗特異性抗體效價，增強雞抗ND感染的能力，該結(jié)果與邱妍等[10]和Wang等[11]的研究結(jié)果一致。

T淋巴細胞是機體免疫調(diào)節(jié)樞紐，其增殖反映機體細胞免疫水平[12]。T細胞的免疫活性與機體抗病毒能力相關(guān)，當(dāng)T細胞活性功能降低時，各種細胞因子（如白介素、干擾素及腫瘤因子等）生成減少，且T輔助性淋巴細胞輔助B細胞抗體生成作用受到影響[13]。本試驗結(jié)果表明，3種中藥多糖均可促進T淋巴細胞增殖，并呈現(xiàn)一定的量效和時效關(guān)系，表明適量的中藥多糖能促進T淋巴細胞增殖。

本試驗以已經(jīng)應(yīng)用于動物生產(chǎn)中的黃芪多糖為參照，觀察了EPP和IRPS的免疫增強作用，結(jié)果表明，中藥多糖的促生長和免疫調(diào)節(jié)作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，低劑量IRPS的促增重和免疫增強作用最好，高劑量IRPS和EPP也具有一定的促增重和免疫增強作用。因此，在應(yīng)用和開發(fā)中藥多糖時，需進行進一步的有效劑量篩選。

參考文獻：

[1]Lowe J B，Marth J D. A genetic approach to mammalian glycan function[J]. Annual Review of Biochemistry，2003，72（1）：643-691.endprint

[2]Bertozzi C R，Kiessling L L. Chemical glycobiology[J]. Science，2001，291（5512）：2357-2364.

[3]謝明勇，聶少平. 天然產(chǎn)物活性多糖結(jié)構(gòu)與功能研究進展[J]. 中國食品學(xué)報，2010，10（2）：1-11.

[4]Thekisoe M M，Mbati P A，Bisschop S P. Different approaches to the vaccination of free ranging village chickens against Newcastle disease in Qwa-Qwa，South Africa[J]. Veterinary Microbiology，2004，101（1）：23-30.

[5]郭振環(huán)，胡元亮，馬 霞，等. 硫酸化香菇多糖對新城疫疫苗免疫效果的影響[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2010，33（1）：76-80.

[6]王學(xué)斌，陳功義，魏戰(zhàn)勇，等. 黃芪多糖粉劑和注射劑對雛雞免疫功能和生長的影響比較[J]. 中國家禽，2007，29（3）：21-23.

[7]梁 英，姜 寧，何雯娟，等. 黃芩多糖對肉仔雞生長性能和免疫功能的影響[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報，2010，22（4）：1031-1036.

[8]赫 剛. 殼聚糖對肉仔雞生長性能與免疫功能的影響[J]. 中國飼料，2005（24）：19-21.

[9]薛 峰，吳圣龍，唐應(yīng)華，等. 不同免疫程序的雞群新城疫和禽流感抗體水平與免疫保護之間的相關(guān)性試驗[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2005，41（9）：23-25.

[10]邱 妍，崔保安，胡元亮，等. 4種多糖對免疫雛雞抗體效價和T淋巴細胞的影響[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，31（1）：77-81.

[11]Wang Deyun，Hu Yuanliang，Sun Junling，et al. Comparative study on adjuvanticity of compound Chinese herbal medicinal ingredients[J]. Vaccine，2005，23（28）：3704-3708.

[12]Kim H M，Han S B，Oh G T，et al. Stimulation of humoral and cell mediated immunity by polysaccharide from mushroom Phellinus linteus[J]. International Journal of Immunopharmacology，1996，18（5）：295-303.

[13]王德云，胡元亮，張寶康，等. 幾種中藥成分與IL-2免疫協(xié)同作用的比較[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，28（3）：140-142.endprint