3種中藥多糖對雞新城疫疫苗免疫效果的影響

楊慶芳+楊康林+姚靜+蔣春茂

摘要：14日齡健康、非免疫羅曼蛋公雞240羽，隨機均分為8組，用雞新城疫疫苗首次免疫和二次免疫前3 d、當日及后3 d，試驗組分別灌胃0.5 mL高、低劑量黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍根多糖（IRPS）溶液，空白對照組和免疫對照組灌胃等量生理鹽水。各組分別于首免后連續4周隨機取雞10羽稱量體質量、測定抗體效價和T淋巴細胞增殖變化。結果表明，3種中藥多糖均可促進雞體質量增加，提高新城疫HI抗體效價，促進外周血T淋巴細胞增殖，其中低劑量的IRPS效果最好。

關鍵詞：黃芪多糖（ASP）;淫羊藿多糖（EPP）;板藍根多糖（IRPS）;新城疫疫苗;抗體效價;T淋巴細胞

中圖分類號： S858.312.4 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）04-0220-02

收稿日期：2015-01-06

基金項目：西藏自然科學基金（編號：ZJ2013018）;江蘇農牧科技職業學院“鳳凰人才工程”。

作者簡介：楊慶芳（1975—），女，山西介休人，碩士，講師，主要從事動物醫學教學及科研工作。E-mail：474861982@qq.com。

通信作者：蔣春茂，教授。E-mail：1836340739@qq.com。

多糖是自然界含量豐富的重要生物大分子之一，與蛋白質、核酸和脂類構成了最基本的4類生命物質[1]，其結構和功能受到了廣泛關注，成為繼蛋白質和核酸之后探索生命的第三個里程碑[2]。近年來研究發現，中藥多糖作為中藥的活性成分，其最重要的功能是具有免疫調節活性[3]。本研究從黃芪、淫羊藿和板藍根3種中藥中提取多糖，作為佐劑配合新城疫疫苗免疫雛雞，測定雞增重率、血清抗體效價和外周血T淋巴細胞增殖的動態變化，旨在為中藥多糖類免疫增強劑開發提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

黃芪、淫羊藿和板藍根購于當地醫藥公司，分別用水提醇沉法提取黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍根多糖（IRPS），硫酸-蒽酮法測定多糖含量分別為68.5%，63.8%和53.4%。各多糖按凈含量用去離子水稀釋為高劑量（H，8 mg/mL）及低劑量（L，4 mg/mL）濃度，常規高壓消毒、備用。

1.2 試驗動物與分組

選擇健康、非免疫1日齡羅曼蛋公雞240羽，隨機分為8組，分別為空白對照組（BC組）、免疫對照組（IC組）及各中藥多糖免疫組（ASPH組、ASPL組、EPPH組、EPPL組、IRPSH組和IRPSL組），每組30羽。飼養至14日齡，除BC組用生理鹽水滴鼻、點眼外，IC組和中藥多糖免疫組均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、點眼免疫（2羽份/羽）進行首免，于28日齡時二免。首免和二免前3 d、當日及后3 d，中藥多糖免疫組同時分別灌胃高劑量和低劑量ASP、EPP和IRPS，每羽0.5 mL。

1.3 樣本采集與項目測定

分別于首免后7、14、21、28 d，每組隨機取雞10羽，稱量、記錄體質量，計算增重率;分別于免疫后7、14、21、28 d翼下靜脈采血0.5 mL，分離血清，用微量血凝抑制法（HI）測定抗體效價[4];心臟采集抗凝血（抗凝劑為檸檬酸鈉），采用MTT法[5]，在酶聯免疫儀上測定吸光度D570 nm，作為T淋巴細胞增殖指標。

1.4 數據處理

運用SPSS軟件對試驗數據進行差異性統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同日齡雞增重率的變化

由表1可見，免疫后7 d時，各組雞增重率無統計學差異（P>0.05）;免疫后14 d時，各給藥組增重率顯著高于空白對照組（P<0.05），但與免疫對照組不存在顯著差異（P>005），且免疫對照組與空白對照組間也無統計學差異存在（P>0.05）;免疫后21 d和28 d，除ASPH組外，其他各給藥組增重率均顯著高于免疫對照和空白對照組（P<0.05），但免疫對照和空白對照組無統計學差異存在（P>0.05）。

2.2 不同日齡雞血清抗體效價的變化

由表2可見，免疫后7 d和14 d時，各免疫組抗體效價無顯著差異存在（P>0.05），但均顯著高于空白對照組（P<0.05）;免疫后21 d和28 d時，中藥多糖免疫組抗體效價均顯著高于免疫對照和空白對照組（P<0.05）;其中21 d時，ASPH、ASPL組和IRPSL組抗體效價顯著高于其他給藥組（P>005）;28 d時，除IRPSH劑量組外，其他各給藥組間無統計學差異（P>0.05）。表明，適當濃度的中藥多糖可提高疫苗免疫的抗體效價，但以ASPL和IRPSL的免疫增強效果較好。

2.3 不同日齡雞外周血T淋巴細胞增殖的變化

由表3可見，免疫后7 d，除ASPH和ASPL組外，其他給藥組D570 nm值顯著高于空白對照組和免疫對照組（P<0.05）;各給藥組相比，除ASPH組外，其余各組均無顯著差異（P>005）。免疫后14、21、28 d，各給藥組D570 nm值均顯著高于空

表1 各組雞免疫后不同日齡增重率變化

組別

首免后不同時間增重率（%）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 89.48±3.84a 176.31±4.72b 273.19±4.87b 347.46±5.64b

IC組 87.53±2.56a 185.48±3.92ab 277.38±3.37b 339.52±4.68b

ASPH組 85.62±3.49a 192. 87±4.46a 296.84±4.66a 392.65±5.71abendprint

ASPL組 88.17±3.20a 194.42±3.67a 306.58±4.59a 416.37±4.28a

EPPH組 92.36±4.74a 190.49±3.26a 305.36±4.48a 412.41±5.57a

EPPL組 89.44±3.58a 184.74±3.78a 312.47±5.32a 430.66±5.62a

IRPSH組 86.74±3.72a 196.58±4.83a 310.58±5.67a 405.06±5.27a

IRPSL組 88.46±2.07a 198.26±4.35a 319.46±5.23a 420.37±4.79a

注：同列數據后不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。表2、表3同。

表2 各組雞免疫后不同日齡血清HI抗體效價變化

組別

首免后不同時間HI抗體效價（log2）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 2.67±0.34c 2.53±0.26c 2.45±0.33d 2.41±0.27d

IC組 3.76±0.47ab 4.67±0.35ab 5.76±0.24c 4.83±0.41c

ASPH組 3.82±0.35ab 4.85±0.33ab 7.35±0.43a 5.66±0.35ab

ASPL組 4.02±0.51a 5.38±0.36a 7.85±0.54a 6.18±0.41a

EPPH組 4.13±0.62a 5.23±0.45a 6.72±0.52b 5.54±0.26ab

EPPL組 4.26±0.57a 4.97±0.29ab 6.92±0.44b 5.73±0.35ab

IRPSH組 3.80±0.45ab 5.28±0.36a 7.26±0.36ab 5.46±0.42b

IRPSL組 3.94±0.31ab 4.75±0.46ab 7.63±0.49a 6.27±0.37a

表3 各組雞免疫后不同日齡淋巴細胞增殖的動態變化

組別

首免后不同時間吸光度（D570 nm）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 0.195±0.022bc 0.196±0.015c 0.187±0.024d 0.214±0.016d

IC組 0.189±0.017bc 0.195±0.014c 0.261±0.021c 0.304±0.021c

ASPH組 0.217±0.025b 0.259±0.016b 0.338±0.035b 0.393±0.024b

ASPL組 0.224±0.019ab 0.281±0.017ab 0.386±0.041a 0.445±0.048a

EPPH組 0.235±0.037a 0.274±0.026b 0.352±0.046ab 0.412±0.036ab

EPPL組 0.267±0.029a 0.326±0.014a 0.389±0.029a 0.427±0.031a

IRPSH組 0.237±0.033a 0.277±0.028b 0.361±0.027ab 0.419±0.023ab

IRPSL組 0.257±0.048a 0.318±0.027a 0.415±0.026a 0.452±0.046a

白對照組和免疫對照組（P<0.05）;各給藥組相比，免疫后 14 d 時各低劑量組間無顯著差異，各高劑量組及ASPL間也無顯著差異（P>0.05）;免疫后21 d和28 d時，除ASPH組外，各給藥組間無統計學差異（P>0.05）。

3 討論

許多研究表明，中藥多糖具有促生長作用。王學斌等研究表明，APS粉劑和APS注射液具有促進雛雞生長的作用[6]。梁英等研究也表明，飼糧中添加適量的黃芩多糖，可提高肉仔雞的生長性能[7]。本試驗結果表明，除ASPH組外，其他各給藥組雞增重率顯著增加。可能較高劑量的ASP與脂肪絡合抑制脂肪吸收，進而降低了雞的生長性能[8]。

血清抗體效價反映機體B淋巴細胞介導的特異性體液免疫應答。抗體效價越高，雞對抗病毒的能力增強，雞群抗感染能力也越強[9]。本試驗結果表明，適量的中藥多糖能顯著增強雛雞的體液免疫，提高ND疫苗特異性抗體效價，增強雞抗ND感染的能力，該結果與邱妍等[10]和Wang等[11]的研究結果一致。

T淋巴細胞是機體免疫調節樞紐，其增殖反映機體細胞免疫水平[12]。T細胞的免疫活性與機體抗病毒能力相關，當T細胞活性功能降低時，各種細胞因子（如白介素、干擾素及腫瘤因子等）生成減少，且T輔助性淋巴細胞輔助B細胞抗體生成作用受到影響[13]。本試驗結果表明，3種中藥多糖均可促進T淋巴細胞增殖，并呈現一定的量效和時效關系，表明適量的中藥多糖能促進T淋巴細胞增殖。

本試驗以已經應用于動物生產中的黃芪多糖為參照，觀察了EPP和IRPS的免疫增強作用，結果表明，中藥多糖的促生長和免疫調節作用呈現一定的量效關系，低劑量IRPS的促增重和免疫增強作用最好，高劑量IRPS和EPP也具有一定的促增重和免疫增強作用。因此，在應用和開發中藥多糖時，需進行進一步的有效劑量篩選。

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