WISP-2及FGFBP1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)①

閻紅娥，秦 越，鮑文華，孫云暉

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

WISP-2及FGFBP1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)①

閻紅娥，秦 越，鮑文華，孫云暉

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究WISP-2及FGFBP1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，并剖析兩者之間的相互關(guān)系，及評(píng)估兩種因子與非小細(xì)胞肺癌患者在相關(guān)的臨床參數(shù)之間的關(guān)系。方法：采用IHC-P法對(duì)經(jīng)病理證實(shí)為NSCLC患者40例，取其癌組織標(biāo)本及遠(yuǎn)離癌腫5cm的組織標(biāo)本40例作為對(duì)照組。所有患者在術(shù)前未經(jīng)經(jīng)放、化療、激素的應(yīng)用及其它抗癌治療。結(jié)果：①NSCLC中WISP-2的陽(yáng)性表達(dá)率25例(62.5%)明顯低于對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率33例(82.5%)，NSCLC中FGFBP1的陽(yáng)性表達(dá)率30例(75%)明顯高于對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率12例(30%)。②WISP-2(+)FGFBP1(+)13例、WISP-2(-)FGFBP1(+)12例、WISP-2(+)FGFBP1(-)13例、WISP-2(-)FGFBP1(-)2例，兩因子表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.95，P<0.05)。③WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽(yáng)性表達(dá)率不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而其他臨床參數(shù)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：在NSCLC中，WISP-2呈低表達(dá)而FGFBP1則相反，兩者呈負(fù)相關(guān)，且WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)相關(guān)性而在其他臨床參數(shù)之間關(guān)系密切，可以作為臨床診斷的參考指標(biāo)，也可以為NSCLC的臨床治療提供新的思路。

WISP-2；FGFBP1;非小細(xì)胞肺癌

WISP-2(CCN5)是CCN家族就在近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新成員，即Wnt-1有道分泌蛋白2，其具體作用尚未明確及生物學(xué)相關(guān)特征報(bào)道較少，但近年來(lái)的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，WISP-2基因與某些腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著緊密的關(guān)系，因此組織學(xué)類(lèi)型不同表達(dá)也不相同。有數(shù)據(jù)相關(guān)研究表明WISP-2基因具有雙向調(diào)節(jié)的作用，因此近年來(lái)成為CCN家族的主要研究熱點(diǎn)。FGFBP1最初是在表皮的鱗狀細(xì)胞癌株(A431)的培養(yǎng)基液中分離出來(lái)得到的,目前認(rèn)為它與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族(FGFs)有著密切的關(guān)系。FGFBP1的作用即是結(jié)合未活化的FGFs至細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中，使其從ECM上解離并活化后提呈至FGFs受體，從而發(fā)揮其生物學(xué)的功能。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，在人類(lèi)不同癌組織中，均發(fā)現(xiàn)FGFBP1呈現(xiàn)高表達(dá)，其對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖及血管組織的生成具有正向調(diào)控的作用，充分的證實(shí)了FGFBP1可能在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了非常重要的作用。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用了IHC-P原理來(lái)檢測(cè)兩因子在NSCLC中的表達(dá)研究，并分析兩者之間的相互關(guān)系，及評(píng)估兩因子與NSCLC患者在相關(guān)的臨床參數(shù)之間的關(guān)系，從而為NSCLC提供新的臨床診斷及治療。

1 材料與方法

1.1 材料采集

隨機(jī)選取2013-12～2014-05佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科經(jīng)病理診斷證實(shí)共40例NSCLC病人的石蠟標(biāo)本，并以遠(yuǎn)離癌腫5cm的組織標(biāo)本40例作為對(duì)照組。其中腺癌20例，鱗癌17例，其它3例，患者平均年齡45～70歲(男26例女14例)，根據(jù)臨床分期Ⅰ～Ⅱ期22例Ⅲa期18例及組織高分化7例中分化12例低分化21例伴有淋巴轉(zhuǎn)移24例無(wú)轉(zhuǎn)移16例，以及個(gè)人因素吸煙23例不吸煙17例。排除所有患者在術(shù)前未經(jīng)經(jīng)放、化療、激素的應(yīng)用及其它抗癌治療。

1.2 診斷依據(jù)

NSCLC2014年NCCN指南采用了根據(jù)WHO肺癌組織學(xué)分類(lèi)及國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)2009年第七版肺癌最新的TNM分期。依據(jù)腫瘤大小、附近淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的信息進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)分期。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

嚴(yán)格應(yīng)用IHC-P檢測(cè)法，將腫物及正常肺組織做石蠟包埋且切片5μm厚，脫蠟、水化、修復(fù)等常規(guī)操作，最后在光鏡下觀察。同時(shí)用已知組織切片在同條件下染色作為陽(yáng)性對(duì)照，方法嚴(yán)格參照產(chǎn)品說(shuō)明。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

WISP-2抗體、FGFBP1抗體、化學(xué)超敏SP試劑盒、DAB顯色劑，均以已知陽(yáng)性片做陽(yáng)性對(duì)照。(以上試劑均擬夠于北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)行顯著性分析，校驗(yàn)水準(zhǔn)以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1～3。

表1 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC組織中的表達(dá)(n=40)

注：在NACLC中WISP-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組(χ2=4.01，P<0.05),而FGFBP1則相反(χ2=16.24，P<0.05)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 WISP-2和FGFBP1在40例NSCLC組織中臨床參數(shù)之間的關(guān)系

注：WISP-2與FGFBP1的陽(yáng)性表達(dá)率在年齡及性別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他臨床參數(shù)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 WISP-2和FGFBP1在NSCLC組織中表達(dá)的相關(guān)性

注：兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.95，P<0.05)。

3 討論

人類(lèi)腫瘤一般是經(jīng)過(guò)一個(gè)多階段的過(guò)程形成的，而這個(gè)過(guò)程大約需數(shù)十年之久。腫瘤的形成首先由正常細(xì)胞在外界及自身等因素的刺激下逐漸變異并獲得成具有腫瘤特性的細(xì)胞，這種獨(dú)具特性導(dǎo)致了正常細(xì)胞增殖失控，最終演變?yōu)閻盒缘哪[瘤細(xì)胞[1]。腫瘤細(xì)胞具有侵入正常組織及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移器官的能力，通過(guò)自身豐富的血管以獲得足夠的氧氣及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[1]。近年來(lái)除腫瘤經(jīng)典的特征外還發(fā)現(xiàn)了一些新的特征[1]，因此，梁珊珊等證實(shí)腫瘤的形成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，腫瘤細(xì)胞所具有的特征性的機(jī)制及時(shí)序取決于亞型及類(lèi)型的不同而變化[1]。近年來(lái)隨著肺癌的發(fā)病率逐漸增高，已成為威脅了人類(lèi)生命健康的最常見(jiàn)的惡性腫瘤[2]，而非小細(xì)胞肺癌是肺癌最為常見(jiàn)的腫瘤，它按組織學(xué)類(lèi)型分為腺癌、鱗癌﹑大細(xì)胞未分化癌﹑鱗腺癌(較少見(jiàn))。越來(lái)越多的數(shù)據(jù)顯示肺癌的發(fā)生發(fā)展不僅與外界環(huán)境、吸煙等因素相關(guān)[3]且重要的是與自身基因因素即原癌基因的過(guò)度激活和(或)抑癌基因的失活等有著緊密的關(guān)系。

WISP-2又名-2/CCN5，是CCN家族在近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新成員，CCN家族間在基因及蛋白上有著相似的生物學(xué)功能即細(xì)胞的增殖、分化、遷移及黏附等過(guò)程[4]。因WISP-2在基因即核苷酸序列結(jié)構(gòu)上因缺少C′末端的結(jié)構(gòu)模塊并且僅含有半胱氨基酸28個(gè)，所以可編碼多種多樣重要的病理生理過(guò)程。研究顯示W(wǎng)ISP-2在人及小鼠的不同組織類(lèi)型中幾乎均有表達(dá)，說(shuō)明WISP-2可能具有多功能的調(diào)控作用。且相關(guān)研究結(jié)果闡明了在某些癌組織中呈低表達(dá)，表現(xiàn)為抑癌基因，是腫瘤增殖的負(fù)性調(diào)節(jié)因子[5]。因此在某些腫瘤細(xì)胞中WISP-2的表達(dá)下調(diào)與腫瘤的進(jìn)展有重要關(guān)系，WISP-2的缺失可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)失控的原因[6]。

FGFBP1即FGF-BP，是腫瘤細(xì)胞近年研究的熱點(diǎn)之一，可作為FGFs(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)的載體蛋白而發(fā)揮其生物學(xué)功能且有著密切的關(guān)系。劉愛(ài)環(huán)等證實(shí)FGFs在細(xì)胞的生理與生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的功能及在腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程中也起著特別重要的調(diào)節(jié)作用[7]，因此此推測(cè)FGFBP1的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著緊密的關(guān)系，且相關(guān)研究結(jié)果闡明了[8]在某些癌組織中呈高表達(dá)，具有中致癌基因，是腫瘤增殖的正性調(diào)節(jié)因子。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用IHC-P的原理，組織標(biāo)本采用石蠟切片，以利于染色及對(duì)照觀察，結(jié)果顯示：在NSCLC中WISP-2陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率 ，而FGFBP1則相反，說(shuō)明WISP-2呈低表達(dá)而FGFBP1則相反。國(guó)外學(xué)者JiHyangKim[9]等利用DNA芯片研究膽囊癌的差異基因結(jié)果證實(shí)了差異基因的分類(lèi)涉及細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞增殖(FGFBP1)、細(xì)胞黏附(WISP-2)等，其中FGFBP1屬于上調(diào)基因，WISP-2屬于下調(diào)基因，同時(shí)楊智[10]利用PT-PCR及Westernblot對(duì)膽囊癌研究證實(shí)了兩因子表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，符合本實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果。WISP-2與FGFBP1臨床參數(shù)的表達(dá)中顯示W(wǎng)ISP-2在高分化的腺癌，臨床Ⅰ-Ⅱ期伴有淋巴轉(zhuǎn)移的病例中明顯增高，而FGFBP1在低分化的鱗癌，臨床Ⅲa期伴有淋巴轉(zhuǎn)移的病例中明顯增高，且兩者吸煙的陽(yáng)性表達(dá)率明顯相反，有相關(guān)研究結(jié)果顯示FGFBP1的表達(dá)具有組織特異性，在大多數(shù)不同來(lái)源的鱗癌細(xì)胞株及頭頸部的鱗癌患者的組織中均有表達(dá)，而在正常成熟的組織中幾乎未見(jiàn)表達(dá)[11]。而本實(shí)驗(yàn)所有結(jié)果同時(shí)證實(shí)了以上相關(guān)的研究結(jié)果。總而言之，本次實(shí)驗(yàn)研究證明了NSCLC中WISP-2呈低表達(dá)而FGFBP1則相反，兩者呈負(fù)相關(guān)，且WISP-2與FGFBP1在年齡及性別的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)相關(guān)性而在其他臨床參數(shù)之間關(guān)系密切，提示我們WISP-2與FGFBP1可能能夠作為非小細(xì)胞肺癌臨床診斷及治療中的新靶點(diǎn)。

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Expressions of WISP-2 and FGFBP1 in non-small cell lung cancer

YANHong-e,QINYue,BAOWen-hua,SUNYun-hui

(Respiratory Department of Internal Medicine, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

Objective: To investigate the expression of WISP-2 1 and FGFBP1 in NSCLC (non-small cell lung cancer); and to analyze the relationship between them and their relationship with NSCLC patients in relevant clinical parameters. Methods: 40 NSCLC patients with heart surgery resection of thoracic operation of the First Affiliated Hospital of Jiamusi University from 2013 December -2014 year in May were selected. The cancer tissue specimens and 5cm away from the tumor tissue specimens of 40 cases were chosen as control group. All patients didn’t apply chemotherapy, hormone and other anti-cancer treatment before operation. Results: ①The positive expression of WISP-2 in non small cell lung cancer rates in 25 cases (62.5%) was significantly lower than that of normal tissues in 33 cases (82.5%). The positive expression of FGFBP1 in non small cell lung cancer rates in 30 cases (75%) was significantly higher than that of the positive expression rate of normal tissues in 12 cases (30%). The Difference between these two groups in positive rate were statistically significant(P<0.05). ②Therewere13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (+), 12casesWISP-2 (-)FGFBP1 (+)，13casesWISP-2 (+)FGFBP1 (-), 2casesWISP-2 (-)FGFBP1 (-).Theexpressionsofthetwofactorwerenegativelycorrelated,withsignificantdifference(χ2=4.95,P<0.05). ③WISP-2andFGFBP1hadnostatisticalsignificanceinageandsex(P>0.05).Otherclinicalparameterswerestatisticallysignificant(P<0.05). Conclusion: In NSCLC, the expression of WISP-2 is low, but FGFBP1 is on the contrary. They were negatively correlated. The positive expressions of WISP-2 and FGFBP1 in age and sex were irrelevant, but are closely related among other clinical parameters, which can be used as reference index for clinical diagnosis, also can provide new ideas for clinical treatment.

WISP-2；FGFBP1; non small cell lung cancer

閻紅餓(1956～)女，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：肺癌的分子發(fā)病機(jī)制。

秦越(1986～)女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。E-mail：qinyue0416@163.com。

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A

1008-0104(2015)02-0099-03

2014-11-18)