HPLC 法測定蒙藥材沙棘果實(shí)中熊果酸的含量

李雅芬 白音夫

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017; 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

沙棘(Hippophae rhamnoides)為胡頹子科沙棘屬植物，耐旱，抗風(fēng)沙，是西北高原具有多種用途的經(jīng)濟(jì)植物。沙棘果實(shí)也是藥食同源植物，根、莖、葉、花、果，特別是沙棘果實(shí)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，其沙棘果實(shí)入藥具有止咳化痰、健胃消食、活血散瘀之功效。沙棘果實(shí)含異鼠李素、蕓香甙、槲皮素、山柰酚、維生素、葉酸、胡蘿卜素、花色素，種子含棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、β-谷甾醇，葉含抗壞血酸、異鼠李素、胡蘿卜素。中國藥典規(guī)定沙棘果實(shí)槲皮素含量不得低于0.1%［1］。本文對沙棘果實(shí)熊果酸含量進(jìn)行了測定，以期建立以熊果酸為含量的沙棘質(zhì)量評價(jià)方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：1100 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，TJ-912 型色譜分析平臺(太極計(jì)算機(jī)公司)，IN-180 型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D 超生波清洗器(上海昆山)，電子天平(梅特勒)。

1.2 試藥：熊果酸對照品(742 -8701)由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇為色譜純;其他均為分析純試劑;水為純化水;沙棘自采(內(nèi)蒙古呼和浩特和林縣南天門林場不同山溝)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：Kromasi - C18 柱(200mm × 4.6mm，5μm)，流動相甲醇-水-磷酸(89 ︰11 ︰0.1)，流速1mL·min-1，溫度30℃，檢測波長215nm，進(jìn)樣量10μL。在此條件下待測組分可達(dá)到基線分離。樣品中熊果酸與其它組分有較好的分離，見圖1。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取熊果酸對照品適量，加甲醇制成0.194mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品根、莖、花葉與地上部位，粉碎，過100 目篩，精密稱定0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定質(zhì)量，超聲處理50min ，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2(mL)，加到10mL 量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，注入高效液相色譜儀10μL 測定。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸，回歸方程為Y= 12073891X -55733，r =0.999。結(jié)果表明，熊果酸在0.0194 ～0.194μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0，1，2，4h進(jìn)樣測定，以熊果酸峰面積值計(jì)算RSD 為0.60%。結(jié)果表明，供試品溶液在4h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)：吸取同一批供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6 次，測得熊果酸峰面積RSD 為0.53%。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同批藥材地上部位按2.3 項(xiàng)下平行制備6 份樣品溶液，并按2.1 項(xiàng)下測定，熊果酸的平均含量為0.331%，RSD 為2.43%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取同批藥材地上部位已知含量的樣品6 份，每份取約0.1g，精密稱定，分別精密加入熊果酸對照品溶液1.0 mL(0.0194 mg)，按2.3 項(xiàng)下制備樣品溶液，同法操作，測定含量，計(jì)算回收率。熊果酸平均回收率為107.35%，RSD 為3.66%(n=4)。

2.9 樣品測定：取沙棘藥材，按2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬定的色譜條件測定熊果酸含量，結(jié)果，5 個(gè)不同采集點(diǎn)熊果酸含量分別為0.331%、0.371%、0.266、0.411、0.241 %，平均含量0.323% 。

3 討論

熊果酸是存在于天然植物中的一種三萜類化合物，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)儭⒔档脱恰⒃鰪?qiáng)機(jī)體免疫功能、抗氧化作用、降血脂、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)效應(yīng)，因而被廣泛地用作醫(yī)藥和化妝品原料。本文研究表明，沙棘果實(shí)中含有較多的熊果酸。由于熊果酸有較強(qiáng)生理活性，以熊果酸含量可作為藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)，中國藥典中規(guī)定沙棘中槲皮素含量不得低于0.1%，與熊果酸比較后者作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為適宜，也可以作為新標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充到新版藥典中。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，171 -172.