熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效觀察△

包秀芳

內蒙古民族大學附屬醫院婦產科，內蒙古通遼028000

熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效觀察△

包秀芳

內蒙古民族大學附屬醫院婦產科，內蒙古通遼028000

目的探討熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效。方法將79例卵巢癌伴惡性腹腔積液患者按照隨機數字表法隨機分為對照組（n=39）與觀察組（n=40），對照組僅采用順鉑進行常規治療，觀察組在此基礎上聯合熱療進行治療。比較兩組療效、治療48 h后SKOV3細胞凋亡情況、治療前后免疫功能相關指標水平、生活質量及不良反應發生情況。結果①對照組臨床總緩解率為58.97%，低于觀察組的77.50%，差異有統計學意義（P＜0.05）；②觀察組治療48 h后SKOV3細胞凋亡率為72.5%，高于對照組的46.15%，差異有統計學意義（P＜0.05）；③觀察組治療后CD4及CD4/CD8水平均高于治療前及對照組治療后，差異有統計學意義（P＜0.05），對照組治療前后各免疫功能指標水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；④根據SF-12生活量表評分，觀察組患者生活量表相關維度（總體健康、情感職能、軀體疼痛及精神健康）評分均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；⑤對照組不良反應發生率為38.46%，觀察組為35.00%，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效顯著。

卵巢癌；熱療；順鉑；惡性腹腔積液；SF-12生活量表

Oncol Prog,2015,13(6)

惡性腹腔積液（malignant peritoneal ascites，MPE）指的是由卵巢癌、肝癌及其他惡性腫瘤累及腹膜而造成的腹腔內液體的異常并發癥之一[1]，特別是以卵巢癌以及肝癌患者居多。腫瘤造成毛細血管通透性增大以及淋巴回流減少是MPE產生的重要原因。由于MPE生長速度較快，可造成食欲降低、腹部疼痛、惡心、嘔吐、呼吸窘迫等不良癥狀，進而導致惡液質、心肺功能障礙等并發癥，對患者生活質量造成嚴重的影響[2]。臨床上，25%～50%的卵巢癌患者晚期會出現不同程度的MPE。所以，對MPE進行有效的控制，對改善卵巢癌患者生存質量及延長患者生存周期具有十分重要的臨床價值與意義。本研究采用熱療聯合順鉑方案對卵巢癌患者進行治療，探討了該方案對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的效果，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

入組2009年9月至2014年12月內蒙古民族大學附屬醫院的79例卵巢MPE住院患者。納入標準[3]：①患者均經病理學診斷確診，且經B超、CT或X線檢查證實為中等至大量腹腔積液；②患者均于1個月之內未接受化療或放療治療，KPS評分在50分以上，均無化療禁忌癥者；③心電圖、肝腎功能以及血常規檢查等正常者；④所有患者均知情同意。排除標準[4]：①合并嚴重的心臟疾病；②體溫≥38℃；③肌酐清除率＜60m l/m in；④WBC＜4×109/L，且PLT＜75.0×109/L；⑤腹腔灌注藥物史；⑥患者不知情。按照隨機數字表法隨機將79例患者分為對照組（n=39）與觀察組（n=40），兩組患者基本特征見表1。由表1可知，兩組患者的基本特征差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 治療方法及療效評價

1.2.1治療方法經B超定位之后常規腹腔置管，注藥前應該盡量減少腹腔積液，將25mg/m2順鉑溶解于42℃的0.9%NaCl 2000 m l中，劑量為12.5mg，1次/周，連續三周為一個療程，將混合液灌入腹腔之中，然后腹腔內注入5.0mg地塞米松、濃度為2%利多卡因2m l緩解腹膜粘連，灌注之后封管，囑患者多次進行變換體位。觀察組應用濃度為42%條件下微波熱療1 h，灌注1次/周，連續三周為一個療程，休息1周，連續使用兩個療程后對療效進行評價。對照組僅采用順鉑進行治療。

1.2.2臨床療效評價[5]①完全緩解（complete Rem ission,CR）：腹腔積液消失且持續時間≥4周；②部分緩解（partial rem ission,PR）：腹水減少50%以上且持續在4周以上；③穩定（numerical control, NC）：腹水減少50%以下或者增加小于25%以上，且持續時間為4周；④無效（progressive disease, PD）：腹水增加20%，癥狀加劇。臨床總緩解率為完全緩解率與部分緩解率之和。

1.3 細胞學檢測

1.3.1細胞培養 人卵巢癌SKOV3細胞生長于含有10m l/L小牛血清的RPM I-1640培養液中，置于37℃、濃度為5%的CO2的恒溫箱中進行傳代培養。

表1 兩組患者基本特征比較

1.3.2噻唑藍檢測方法細胞增殖觀察內容主要包括兩種設計：①固定熱療時間：溫度設置為42℃，加熱溫度為60 m in，觀察順鉑不同濃度時SKOV3細胞的生長抑制率，順鉑濃度分別為0、1、10、20、40、80 ng/m l；②將固定熱療溫度設置為42℃，熱療時間依次設置為0、30、60、90、120m in，并注意對不同時間SKOV3細胞生長抑制率進行觀察。取對數生長期SKOV3細胞，經胰蛋白酶消化，計數儀7.0×104/m l的細胞濃度接種到96孔板中，每孔在100μl、37℃及濃度為5%的CO2恒溫條件下培養24h。順鉑給藥之后，共培養48 h，收集細胞，用噻唑藍法對兩組患者治療后SKOV3細胞進行檢測。

1.3.3流式細胞儀檢測 收集兩組經過處理的細胞，離心之后棄去上清液，PBS沖洗2次。按照雙色細胞凋亡檢測試劑盒上的說明書進行操作。

1.4 免疫功能相關指標檢測方法

采集患者治療前后清晨外周靜脈血3m l，取一定量的新鮮肝素鈉作為抗凝劑備用，主要采用S-P法對T細胞亞群相關指標進行檢測分析，具體檢測方法完全按照試劑盒上的說明書進行操作。使用高倍鏡對經染色的視野進行仔細觀察，并在此視野下共計數200個單核細胞；若計數的200個單核細胞中，表面具有紅色標記物則屬于陽性細胞。

1.5 生活質量評價

采用SF-12生活質量評價量表，Cronbach’sα系數為0.88，重測信度為0.83，主要包括8個領域：軀體功能、軀體角色、軀體疼痛、總的健康狀況、活力、社會功能、情緒角色、心理衛生，每項分值為1～5分，分值越高，則表明患者生存質量越佳[6]。

1.6 統計學方法

采用SPSS19.0軟件對數據進行統計分析，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組的臨床療效比較

對照組臨床總緩解率為58.97%，低于觀察組的77.50%，差異有統計學意義（P=0.032），見表2。

表2 兩組臨床療效比較（n，%）

2.2 兩組患者治療48 h后SKOV3細胞凋亡情況比較

觀察組治療48 h后SKOV3細胞凋亡率為72.5%，高于對照組的46.15%，差異有統計學意義（P=0.021），見表3。

表3 兩組患者治療48 h后SKOV3細胞凋亡情況比較（n，%）

2.3 兩組患者治療前后免疫功能相關指標水平比較

觀察組治療后CD4（%）及CD4/CD8水平均高于治療前及對照組治療后，差異有統計學意義（P＜0.05），見表4。

表4 兩組患者治療前后免疫功能相關指標水平比較（±s）

表4 兩組患者治療前后免疫功能相關指標水平比較（±s）

CD3（%）CD4（%）CD8（%）CD4/CD8組別對照組（n=39）治療前治療后觀察組（n=40）治療前治療后57.19±4.34 56.02±3.89 31.82±2.99 30.03±2.56 25.52±2.08 24.49±1.96 1.27±0.34 1.28±0.38 57.38±4.90 60.29±5.77 31.67±2.72 42.20±3.83 25.45±2.11 22.78±1.78 1.25±0.32 1.87±0.54

2.4 兩組患者治療后生活質量對比

根據SF-12生活量表評分，觀察組患者治療后生活量表相關維度（總體健康、情感職能、軀體疼痛及精神健康）評分均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖1。

2.5 兩組患者不良反應發生率比較

觀察組患者治療過程中不良反應發生率為35%，對照組為38.46%，觀察組較低于對照組，但差異無統計學意義（P＞0.05），見表5。

3 討論

卵巢癌是老年女性患者最為常見的一種惡性腫瘤，其腹腔轉移后很容易形成腹腔積液。順鉑腹腔熱灌注是卵巢癌較為常見且有效的臨床治療手段，可有效對腹腔積液的形成加以控制。順鉑為劑量依賴性藥物，但是大劑量的順鉑往往會造成嚴重的不良反應，對順鉑殺傷惡性腫瘤的效果產生了極大的影響[7]。所以，增強卵巢癌細胞對順鉑化療的敏感性成為當前臨床治療卵巢癌的一個重要課題。

表5 兩組患者不良反應發生率比較（n，%）

MPE是晚期惡性腫瘤較為常見的一種并發癥，患者中位生存周期一般為幾周到幾個月不均，一年生存率在10%以下。患者往往會由于腹脹、雙下肢重度水腫以及呼吸急促而對患者的生活質量產生嚴重的影響[8]。傳統單一性治療MPE的方法包括腹腔穿刺放液、腹腔內局部應用化療藥物以及生物反應調節劑等，具有不良反應重、耐受性差以及有效率低等方面的缺陷。由于腹腔提供了局部化療的條件，所以極易獲得水平較高的化療藥物，比全身給藥高數倍，且能夠在門靜脈以及肝臟內形成持續、高水平的抗癌藥物環境[9]。同時，由于化療藥物主要經門靜脈吸收，對門靜脈轉移入肝的癌栓以及癌細胞具有更強的殺滅功能，而且還延長了化療藥物與腫瘤的直接接觸時間，最大限度地發揮了抗癌效應，而且可通過機械沖刷性功能，對腹腔中游離的癌細胞進行清除作用。順鉑作為第一代鉑類抗腫瘤藥物，屬于細胞周期非特異性藥物，主要與DNA鏈上的堿基作用，從而對正常復制模板功能產生影響，導致DNA復制障礙，從而對腫瘤細胞分裂產生抑制性作用。順鉑進入腹腔之后不易通過腹膜屏障，使其在腹腔中的水平比血漿水平高，能夠維持較長時間的有效水平，具有廣譜、高滲等方面的特點，屬于一種較為理想的腹腔內灌注抗癌類藥物。熱療能夠提供腫瘤內化療藥物的濃度，增強藥物的抗癌效應，同時在很大程度上降低了化療藥物對未加熱正常組織的毒性效果，且利于預防或者推遲耐藥性的產生，從而起到增效以及減毒等方面的效果。

熱療近年來逐漸成為繼放化療、生物治療之后的又一腫瘤治療手段，腹腔熱灌注治療成為腹腔腫瘤控制的有效方法，不良反應相對較少，安全性好。有研究證實，溫熱對腫瘤細胞有直接的殺傷作用。熱療聯合化療可以提高抗腫瘤作用，順鉑是最早被發現與熱療有協同作用的化療藥物，腹腔熱灌注順鉑可有效控制腹腔積液生成。熱療可以增加腫瘤細胞膜的通透性，提供細胞內的藥物濃度，促進DNA與鉑類藥物結合，抑制DNA的修復，從而提高化療藥物的殺傷作用，還有助于逆轉順鉑耐藥的發生。本研究通過體外研究證實，熱療能顯著增強順鉑對卵巢癌SKOV3細胞的毒性作用，誘導細胞發生凋亡，這為卵巢癌熱化療的臨床應用提供了理論參考依據。在臨床實踐的過程中，60m in也是患者能夠耐受且不良反應小的常用時間期限。過度延長熱療時間可能帶來其他不良反應且使患者不易耐受。

熱療聯合順鉑治療卵巢癌的機制為[3]：①高溫改變了毛細血管血流，從而改變了化療藥物在組織中的分布情況，通過對腫瘤內部血管產生的擴張性作用，加速了血液循環，增加了腫瘤組織內部化療藥物水平；②高溫狀態能夠改變化療藥物在機體中的代謝，熱療可影響藥物在肝臟與腫瘤線粒體中代謝為活性基團，從而提高臨床治療效果；③高溫可使得惡性腫瘤細胞的通透性改變，使得藥物極易進入腫瘤細胞之中，使得藥物在細胞中保持較高水平；④高溫改變了藥物的細胞毒性作用，使得原來在37℃時無細胞毒性的藥物，在高溫條件下會對細胞產生毒性作用；⑤加熱時瘤體內的溫度是不均勻的，腫瘤中心溫度比周邊要高，腫瘤中心增生弱的部分比周圍部分對熱的敏感度更大。基于上述基礎理論，本研究結果顯示：觀察組療效優于對照組，且觀察組治療48 h后SKOV3細胞凋亡率高于對照組，觀察組患者免疫功能改善優于對照組。此結果與相關文獻報道相符[10]。但是本研究也存在一定的局限性，如選擇的樣本量較少，不能很好地反映療效問題。在今后的研究中，筆者認為，應該加大研究的樣本量，以增強臨床數據的有效性。

綜上所述，熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效顯著，應加以推廣。

［1］曲紅光,高磊,賀丹,等.靈芝多糖對順鉑誘導卵巢癌細胞耐藥株的逆轉[J].中國老年學雜志,2011,31 (5):831-833.

［2］馬焱,瞿全新,張秀艷,等.腹腔熱化療中卵巢癌細胞對順鉑敏感性影響的體外研究[J].中國腫瘤臨床,2010,37(20):1153-1156.

［3］任春振,曹軍麗,胡宗蘭,等.腹腔熱灌注聯合靜脈化療治療晚期卵巢癌的臨床觀察[J].中國腫瘤臨床,2010,37(24):1459-1461.

［4］巴明臣,崔書中,駱福添,等.腹腔熱灌注化療治療進展期結直腸癌臨床療效及安全性的Meta分析[J].中國普外基礎與臨床雜志,2010,17(7):725-730.

［5］Keen A,Fitzgerald D,Bryant A,et a1.Management of drainage for malignant ascites in gynaeeological cancer [J]. Cochrane Database Syst Rev, 2010, 20(1): CD007794.

［6］WHO.The development of the WHO quality of life assessment instrument[S].Geneva:WHO,1993.

［7］周林靜,張桂芳,慕竹青,等.香菇多糖聯合順鉑治療惡性胸腹腔積液的臨床觀察[J].腫瘤基礎與臨床,2010,23(1):56-57．

［8］詹敏娟.深靜脈導管在腹腔積液穿刺引流中的應用及護理[J].現代中西醫結合雜志,2008,17(15):2381-2382．

［9］李燦宇,張自森,薛長年,等.熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效[J].中國老年學雜志,2012,32(17):3656-3658.

［10］劉志敏,康琳,劉義冰,等.腹腔熱灌注順鉑治療惡性腹水的臨床觀察[J].腫瘤,2007,27(6):508,510．

Synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cellsand efficacy of the treatmentonmalignantascites in ovarian cancer

BAO Xiu-fang
Departmentof Obstetricsand Gynecology,Affiliated Hospitalof InnerMongolia University for the Nationalities, Tongliao 028000,InnerMongolia,China

ObjectiveTo investigate the synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cells and the efficacy of the treatment on malignant ascites in ovarian cancer patients.Method79 cases of ovarian cancer patients were randomized into either control group(n=39)or experimental group(n=40)according to random number table.The control group was given conventional cisplatin-based therapy,and cisplatin plus hypertherm ia was adm inistered in the experimental group.The efficacy,apoptosis of SKOV3 cells in 48h after treatment,the level of immune function related factors before and after treatment,quality of life(QoL)and adverse reactions of both groups were compared.Result1)The clinical overall response rate(ORR)was 58.97%in control group,which was significantly lower than that in the experimental group(77.50%)(P＜0.05);2)The SKOV3 apoptosis rate in 48 h after treatmentwas 72.5%in the experimental group,and was significantly higher than the 46.15%of the control group(P＜0.05);3)The CD4 and CD4/CD8 levels after treatment were significantly higher than those before treatment in the experimental group and those after treatment in the control group(P＜0.05),while those measures maintained stable after treatment in the control group(P＞0.05);4)According to SF-12 QoL scale results,the relevant dimensions of QoL(general health,emotional function,bodily pain and mental health)scores were significantly higher in the experimental group compared w ith the control group(P＜0.05);5)The incidence of adverse reactionswas 38.46%in the control group,and was 35.00%in the experimental group,w ith no significant differences observed(P＞0.05).ConclusionHypertherm ia combined w ith cisplatin is of significant synergistic toxicity on human ovarian cancer cells and is effective in the treatment ofmalignant ascites in ovarian cancer.

ovarian cancer;hyperthermia;malignant ascites;cisplatin;SF-12 life scale

R737.3

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.06.18

2015-05-25）