川崎病外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性分析

胡珊 王永清

川崎病外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性分析

胡珊 王永清

目的 探討川崎?。↘D）患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性，為川崎病免疫學機制研究提供參考。方法 47例KD患兒及對照組51例支氣管肺炎患兒，入院后同時采集外周血檢測淋巴細胞計數、比例，以及T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比。分別對各項結果進行相關性分析。結果 川崎病組外周血淋巴細胞計數及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05）；川崎病組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+及CD 4+呈正相關（r=0.38，P＜0.01，r=0.28，P＜0.05；r=0.51，P＜0.01，r=0.33，P＜0.05）。2組淋巴細胞計數及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。結論 外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性結果提示T淋巴細胞參與川崎病急性期的免疫反應機制，對川崎病發病機制研究可能有輔助意義。

川崎??；淋巴細胞；T細胞亞群

川崎?。╧awasaki disease，KD）是一種病因未明的好發于5歲以下兒童以全身血管炎為主要病變的急性發熱出疹性疾病，以免疫系統激活和血管內皮系統廣泛損害為特征，已成為兒童后天性心臟病的重要因素之一[1]。由T細胞介導的免疫應答機制，尤其表現在T淋巴細胞引起的特異性免疫紊亂現象，在KD發病機制研究中引起一定的關注。本研究對KD住院患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的檢測結果進行相關性分析總結，以觀察KD患兒急性期免疫功能狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取常州市第一人民醫院兒科于2004年1月～2012年12月確診KD的47例住院患兒臨床資料作為KD組，所有病例均符合美國心臟病協會2004年川崎病臨床診斷指南修訂的KD診斷標準[2]。其中男27例，女20例，男女比例為1.35∶1；年齡6個月～12歲，平均年齡（33.3±28.1）個月；住院時間9～21 d，平均（14.3±3.7）d。入院時冠狀動脈病變（coronary artery lesion，CALs）發生率為15%（7/47）。選取同期51例支氣管肺炎住院患兒（排除支原體肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎等）作為對照組，其中男27例，女24例，男女比例為1.17∶1；年齡2個月～7歲，平均年齡（30.4±21.3）個月；住院時間5～15 d，平均（7.4±2.3）d。2組患兒一般資料比較差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 檢測方法 2組患兒入院后同時抽取外周血檢測淋巴細胞及T細胞亞群。采用流式與激光技術檢測外周血淋巴細胞計數及百分比，儀器來源于日本Sysmex XE-2100型號檢測儀。采用流式細胞儀檢測T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比，儀器來源于美國BD FACSCalibur型號檢測儀。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17.0軟件處理數據。計量資料用“x±s”表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。數據采用雙變量線性相關分析，分析結果以Pearson相關系數r表示，-1＜r＜0表示負相關，0＜r＜1表示正相關。線性趨勢采用散點圖表示。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較，差異無統計學意義。見表1。KD組外周血淋巴細胞計數及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢散點圖呈近似負相關。KD組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關，線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。見表2、表3。線性趨勢見散點圖（圖1～6）。

3 討論

近年來KD發病率呈逐年增長趨勢，但其發病機制尚未完全明確[3]，大多數學者認為T淋巴細胞和B淋巴細胞介導的免疫應答及炎性細胞因子的級聯放大效應引起全身血管炎性損傷，導致急性期、恢復期甚至更久血管內皮細胞損傷及功能障礙，是引起KD免疫機制的重要因素；常常由一種或多種廣泛分布的感染源侵犯易感人群而引起[4]。

本研究對47例KD患兒及51例肺炎患兒數據統計結果顯示，2組淋巴細胞計數、比例以及T細胞亞群數據比較差異均無統計學意義。且肺炎組已排除相關免疫因素參與的病原菌病例，提示在KD急性期，相較于紅細胞沉降率、CRP等炎性指標的異常，T細胞亞群在發病早期的變化尚不明顯；說明在KD急性期或發病早期，其免疫紊亂狀態體現的并不顯著。也有學者通過分析KD早期T細胞亞群等在ROC曲線下特征，發現其各指標的診斷特異度及敏感度均偏低，故認為T細胞亞群尚不能作為KD的早期診斷指標[5]。

表1 2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較（x±s）

表2 川崎病組淋巴細胞計數及比例與T細胞亞群相關性分析結果

表3 對照組淋巴細胞計數及比例與T細胞亞群相關性分析結果

圖1 川崎病組

圖4 川崎病組

圖2 川崎病組

圖5 對照組

圖3 川崎病組

圖6 對照組

3.1 淋巴細胞與CD 56+CD 16+本研究結果顯示，KD組外周血淋巴細胞計數及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r= -0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢散點圖呈近似負相關；肺炎組統計結果顯示均無相關性。CD 56+CD 16+主要表達于NK細胞表面，這種負相關性提示KD急性期外周血淋巴細胞越高，NK細胞表達水平反而降低，與部分文獻報道結果相一

致[6-7]。

KD急性期NK細胞水平的變化與其參與急性期免疫機制有關。Charles等[8]發現KD急性期，在損傷動脈壁可見大量NK細胞和單核/吞噬細胞的聚集和浸潤，可進一步推斷外周血NK細胞表達水平的降低與其參與KD急性期免疫反應的消耗增加有關。另一方面，有研究顯示[9]，KD急性期外周血CD 16+NK細胞絕對計數明顯降低，但NK細胞在外周血中的變化是否為KD發病機制中的主要因素尚未明確。

3.2 淋巴細胞與CD 3+及CD 4+本研究結果顯示，KD組及肺炎組淋巴細胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關，線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。

一方面，提示可從KD患兒外周血淋巴細胞比例粗略推斷T細胞亞群CD 3+及CD 4+的變化趨勢。這種正相關性現象說明，外周血淋巴細胞比例越高，KD急性期由CD 4+T細胞分化而來的Th 1/Th 2細胞及相關細胞因子的表達水平亦相應升高[10]。故從T淋巴細胞比例的失調及表達功能的異常，可間接反映出KD急性期存在細胞免疫功能的紊亂。本組病例未進行T淋巴細胞活化的相關檢測，但在KD急性期T淋巴細胞所體現的正相關性，以及細胞因子的級聯放大效應，提示KD患兒在免疫紊亂過程中，可能同時伴有部分炎性介質的參與。

另一方面，淋巴細胞比例的高低與其他細胞系統變化有關，本研究結果顯示僅有淋巴細胞比例存在一定正相關性，其他細胞系統的失調可能同時參與KD免疫系統紊亂過程，尤其是單核/巨噬細胞系統[11-12]及中性粒細胞[13]的改變。

研究結果顯示，KD急性期中性粒細胞的的變化與IVIG對KD的療效以及并發CALs密切相關[14-15]。并且，作為預測IVIG無反應性及并發CALs高危因素的重要評分系統之一——小林評分[16]，其中即包含一項：中性粒細胞比例≥0.80（2分），說明中性粒細胞比例越高，可能更易發生IVIG無反應性及CALs。結合本文相關性分析結果，若淋巴細胞比例越高，中性粒細胞比例越低，則NK細胞表達水平越低，且CD 3+及CD 4+表達越高。故可以推斷，從KD急性期外周血淋巴細胞比例可粗略估計患兒免疫功能紊亂程度，為KD急性期治療提供部分參考（如IVIG使用劑量或是否加用激素等），但尚不能憑單一指標來制定合適方案。

3.3 T細胞亞群與KD免疫機制分析 T細胞亞群作為反映機體細胞免疫功能的一項重要指標，在KD患兒免疫機制的研究較為廣泛，本研究結果顯示，外周淋巴細胞與T細胞亞群CD 56+CD 16+以及CD 3+、CD 4+存在一定的相關性分析，從而可粗略估計KD患兒免疫功能紊亂狀態，為臨床實踐提供部分參考。有學者[17]認為KD患兒急性期外周血CD 3+及CD 8+百分比明顯下降，CD 4+百分比、CD 4+/CD 8+、血清IL-2及sIL-2 R水平明顯升高，提示川崎病患兒急性期存在細胞免疫功能及免疫調節功能紊亂。Hirabayashi等[18]發現，且缺乏CD 4+CD 25+FOXP 3+調節性T細胞的KD患兒更易發展為IVIG-無反應型，提示調節性T細胞在KD免疫機制及預后轉歸中仍有重要作用。故作為KD免疫機制的重要環節，由T淋巴細胞引起的免疫調節功能損傷仍需更為廣泛的研究成果以完善補充。

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Objective To investigate the correlations between lymphocytes and T-cell subsets in blood for Kawasaki disease (KD) in children, providing some references for immunological mechanisms of KD. Methods A total of 47 children with KD and 51 children of bronchopneumonia as the control group were observed with lymphocytes and T-cell subsets of blood at the same time, which including CD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 4+/ CD 8+and CD 56+CD 16+. All the results were tested by correlation analysis respectively. Results We found the negative correlation between the count and the ration of lymphocyte and CD 56+CD 16+(r=-0.369, P＜0.05；r=-0.316, P＜0.05) in KD group. There was positive correlation between the ration of lymphocyte in both the two groups and CD 3+(r=0.384, P＜0.01；r=0.283, P＜0.05) and CD 4+(r=0.511, P＜0.01；r=0.326, P＜0.05). There was no significant difference in other test dates in correlation analysis between two groups. Conclusion The results of correlation analysis between lymphocytes and T-cell subsets in blood, indicated that T lymphocytes participant in the immunological mechanisms in acute KD, which maybe helpful for the pathogenesis research of Kawasaki disease in children.

Kawasaki disease；Lymphocytes；T-cell subsets

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.29.001

江蘇 213000 蘇州大學附屬第三醫院常州市第一人民醫院兒科（胡珊 王永清）

胡珊 E-mail:hushan 2011@163.com