澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量測定

蔡洪玲 陳福

·調查研究·

澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量測定

蔡洪玲 陳福

目的 調查國內6個廠家的澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量。方法 采用高效液相色譜法測定，選用SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)色譜柱，流動相以乙腈-水等梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，檢測波長為208 nm，柱溫：30 ℃。結果 6個廠家的23-乙酰澤瀉醇B分別為：0.175 6、2.074 9、0.220 1、0.438 6、0.112 5、0.190 7 mg/g。結論 6個廠家的澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量差異顯著。

澤瀉；配方顆粒；高效液相色譜法；23-乙酰澤瀉醇B；含量

中藥配方顆粒是以中醫藥理論為指導，運用現代生產技術手段，取傳統中藥飲片為原料，依據多方研究形成的生產工藝制成供臨床調劑使用的粉狀或顆粒狀產品。配方顆粒是中藥飲片改革的一種新形式，具有服用、攜帶、貯藏、組方方便等特點[1]，在臨床上得到越來越多人的認可。澤瀉為澤瀉科穿心蓮屬植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖，為《中國藥典》所收載品種[2]，福建省地道中藥材，具有利水滲濕，泄熱通淋之功效。現代醫學研究，澤瀉還具有降低血清總膽固醇及三酰甘油含量，減緩動脈粥樣硬化形成等現代運用。23-乙酰澤瀉醇B(C32H50O5)是從中藥澤瀉中分離出的主要有效成分，也是澤瀉的專屬性物質之一[3]。在道地藥材中含量較高，可作為其提取工藝及相關制劑的主要質控指標。目前，國內已有6家企業生產澤瀉配方顆粒，但對6個廠家生產的澤瀉配方顆粒質量評價的研究尚未見諸公開文獻，為促進澤瀉配方顆粒的評價質量體系建立，收集了6個廠家澤瀉配方顆粒，并對配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B含量進行了測定。

1 儀器、材料與試劑

1.1 儀器 e2695型高效液相色譜分析儀，美國Waters公司；2998型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 材料與試劑 23-乙酰澤瀉醇B對照品(中國食品藥品研究院，批號111846-201203)；乙腈(色譜純Merck)，甲醇(色譜純國藥集團化學試劑有限公司)；水為純凈水。澤瀉配方顆粒分別購自北京康仁堂藥業有限公司，批號13000881；江陰天江藥業有限公司，批號1304054；華潤三九醫藥股份有限公司，批號1310001S；廣東一方制藥有限公司，批號1306044；培力香港集團附屬培力(南寧)藥業有限公司，批號A1300596-02；四川新綠色藥業科技發展股份有限公司，批號12012297。

2 方法與結果

2.1 高效液相色譜條件 色譜柱：SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：208 nm。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取置五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的對照品適量，用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，得到濃度為238 μg/mL的對照品溶液，冷藏，避光備用。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取各廠家澤瀉配方顆粒0.20 g，用少許甲醇研磨并超聲20 min完全轉移至10 mL容量瓶內，甲醇定容后，－20℃冷凍20 min，4 000 r/min離心15 min，除去不溶物，上清液用0.22 μm微孔濾膜過濾后進樣。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液0.1、0.5、1、4、8、10、12、20 μL進樣。以色譜峰面積(Y)對進樣量μg(X)進行線性回歸，繪制標準曲線(圖1)。回歸方程為y＝943 278.9x－21 644.3，R2＝0.999 7。結果表明進樣量在0.023 8～4.76 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.4.2 系統適用性試驗 在上述色譜條件下分別進樣23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液以及供試品溶液。色譜圖(圖2～3)。結果顯示23-乙酰澤瀉醇B分離度、峰型較好，專屬性強。

2.4.3 精密度考察 精密吸取同一對照品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣5次，記錄峰面積，并計算峰面積RSD。結果23-乙酰澤瀉醇B的峰面積RSD為0.96%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 重現性考察 取同一批藥材制備的提取物，按照“供試品溶液制備方法”平行制備5份供試品液，在上述色譜條件下分析測定，計算23-乙酰澤瀉醇B含量，含量RSD為1.09%，表明本法重復性良好。

2.4.5 回收率考察 采用加樣回收率方法，取已知含量的澤瀉配方顆粒0.20 g，精密稱定9份，平均分成3組，分別加入低、中、高3個濃度的對照品溶液，相當于含量的80%、100%、120%，按“供試品溶液制備方法”制備，在上述色譜條件下測定，各成分回收率在99.92%～102.69%，RSD為1.42%。結果(表1)。

2.4.6 樣品含量測定 按“供試品溶液制備方法”各制備供試品3批，在上述色譜條件下測定，記錄色譜峰面積，按照外標法計算23-乙酰澤瀉醇B的含量。結果(表2)。

圖1 23-乙酰澤瀉醇B標準曲線圖

圖2 對照品溶液23-乙酰澤瀉醇B色譜圖

圖3 供試品溶液中23-乙酰澤瀉醇B色譜圖

表1 加樣回收率試驗結果(n＝3)

表2 樣品測定結果(n＝3)

3 討論

由于6個廠家的每克配方顆粒相當于原藥材飲片的當量不盡相同，因此在對6個廠家的澤瀉配方顆粒中的23-乙酰澤瀉醇B的含量進行比較時，對每克原藥材飲片所提取的23-乙酰澤瀉醇B的含量進行了換算，結果表明：6個廠家樣品的23-乙酰澤瀉醇含量差異顯著，含量最低與含量最高的差異可達10多倍(表2)，這可能與6個廠家的澤瀉原藥材飲片選取有關，23-乙酰澤瀉醇B的含量可能也受到了澤瀉種子、產地、采收季節、儲存時間等方面的影響[4]，建議相關廠家對原材料應進行嚴格的質量把關，選取優質藥材原料從而保證配方顆粒的優質。

《中國藥典》2010版規定澤瀉飲片含23-乙酰澤瀉醇B(C32H50O5)不得少于0.040%。從本研究的結果看，6個廠家澤瀉配方顆粒中的23-乙酰澤瀉醇B轉移率均不高；觀察6個廠家的澤瀉配方顆粒的性狀，也有差異，提示不同廠家的生產工藝可能有所不同，這是導致23-乙酰澤瀉醇B含量差異的重要原因。傳統中藥以水煎為主，配方顆粒是一種新型劑型，不同的生產工藝對成分的溶出率也不同，澤瀉除了含有以23-乙酰澤瀉醇B為主的三萜類化合物，還含有澤瀉醇和環氧澤瀉烯等倍半萜、二萜類化合物及其他有效成分[5]，中藥的功效是綜合功效，隨著澤瀉臨床應用的新發展，配方顆料的質量標準應該考慮哪些成分，如何規范生產工藝，保證臨床用藥的均一性，是廣大中藥工作者研究的一個方向。

[1]蔡樂，劉萍，郭桂明，等.不同廠家茜草配方顆粒中大葉茜草素含量的比較[J].北京中醫藥，2011，30(11)：856-858.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，2010：212-213.

[3]肖飛艷，馮育林，楊世林，等.澤瀉化學成分的研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(5)：491-495.

[4]郭改革，李長偉，黃振軍，等.種子與生態環境對澤瀉塊莖23-乙酰澤瀉醇B含量的影響[J].中國中醫藥現代遠程教育，2009，7(12)：63-64.

[5]邱美榕，馬少丹，阮時寶.澤瀉湯組成藥物化學成分的研究現狀[J].中國中醫藥現代遠程教育，2013，11(22)：119-120.

Objective To investigate the content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers.Methods High performance liquid chromatography(HPLC)was adopted to determine the content；Chromatographic column was SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)；The mobile phase was gradiently eluted by acetonitrile and water with a flow rate of 1.0 mL/min；The detection wavelength was 208 nm and the column temperature was 30℃.Results The content of Alisol B 23-acetate from six domestic manufacturers was respectively 0.175 6，2.074 9，0.220 1，0.438 6，0.112 5，and 0.190 7 mg/g.Conclusion The content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers was significantly different.

Rhizoma Alismatis；Formula Granule；HPLC；Alisol B 23-acetate；Content

2014-09-05)

1005-619X(2015)02-0183-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.02.035

350011福建省金雞山溫泉療養院(蔡洪玲)；350003 福建省中醫藥研究院門診部藥房(陳福)

蔡洪玲