痰瘀同治方對多囊卵巢綜合征模型大鼠胰島素抵抗的實驗研究*

孫亞京，黃益麒，潘旭鳴，黃 平△

（1.浙江中醫藥大學第三臨床醫學院，浙江 杭州530053；2.浙江中醫藥大學第一臨床醫學院，浙江 杭州530053）

多囊卵巢綜合征（PoIycystic ovary syndrome，PCOS）是一種育齡期和青春期婦女常見的排卵障礙性疾病，患者以高雄激素血癥，胰島素抵抗為主要特征，臨床表現為月經稀發、閉經、肥胖、多毛和不孕等。而胰島素抵抗既是影響其發病的重要因素，還是PCOS 患者主要病理生理改變[1-3]。目前，中醫學者普遍認為“痰瘀互結”是PCOS 伴胰島素抵抗的主要病機。根據丹溪的“痰瘀理論”，本研究擬觀察其對PCOS 大鼠胰島素抵抗等代謝紊亂的作用。

1 材料

1.1 動物

選用21 日齡清潔級雌性SD 大鼠60 只，購買自浙江中醫藥大學動物實驗研究中心。動物許可證號為：SCXK（浙）2008-0037。

1.2 藥物

吡格列酮購買自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司；痰瘀同治方由二陳湯和失笑散組成，均由杭州市胡慶余堂提供，經由浙江中醫藥大學鑒定為正品。二陳湯和失笑散根據全國統編五版教材《方劑學》的組成和用量（二陳湯：橘紅30g，半夏30g，白茯苓18g，甘草9g；失笑散：蒲黃12g，五靈脂12g），研磨成粉，均勻混合。

1.3 試劑

注射用硫酸普拉睪酮鈉購于江蘇聯環藥業股份有限公司（批號：20070701）；血清胰島素（insulin）、睪酮（T）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH）放免試劑盒均由北方生物技術研究所提供（批號：E080721、E081124、E080507、E080708、E080721、E080624）；血糖試劑盒購于北京北化康泰試劑有限公司（批號：20080516）.

1.4 儀器

AU400 型OLYMPUS 全自動生化分析儀（日本）；AG204 電子分析天平（瑞士METTLER）；貝克曼庫爾特UniCel DxI 800 全自動化學發光免疫分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司）；全自動放射免疫γ 計數器（上海上立檢測儀器廠）。

2 方法

2.1 SD 大鼠伴IR 的POS 模型建立[4]

將60 只清潔級SD 大鼠動物先普食適應性喂養1d 后，按照隨機分組原則分成2 組，造模組45 只和正常組15 只。從第25 日起至第55 日，造模組大鼠每日頸背部皮下注射硫酸普拉睪酮鈉0.9mg/kg[5-7]，正常組大鼠則同樣位置處注射等量生理鹽水。正常組給予普通飼料，造模組則喂以高脂飼料，均喂養100 d。從喂養第90 天起，每日早晨大鼠稱量體重，測量空腹血糖，行陰道涂片10 d，觀察細胞涂片的周期變化情況。喂養90 d 后，尾靜脈采血測干預前的空腹血糖（FBG）和空腹胰島素（Fins），并根據相關文獻[8]中提及的方法計算胰島素敏感指數：ISI=ln [1/（FBG×Fins）]。造模組中選擇ISI 小于正常組ISI 均值減1.96 倍標準差，且陰道涂片無周期變化者作為造模成功的大鼠。這批PCOS 大鼠模型的臨床表現上具有無排卵，體重增加，空腹血糖水平明顯增加，胰島素敏感異常等，與PCOS 患者臨床表現相似。

2.2 給藥途徑和方法

將造模成功的大鼠隨機將其分為對照組、治療組和模型組。從第91 天起，用相應藥物干預3 周，治療組每天灌服痰瘀同治方30g/kg，對照組每天灌服吡格列酮（溶解于等量生理鹽水）15mg，模型組和正常組灌服等容量生理鹽水。對照組、治療組和模型組在治療期間均喂以高脂飼料，正常組喂以普通飼料。末次給藥后禁食12h，斷尾采血測干預后FBG 和Fins，并計算ISI。斷尾采血結束后，大鼠以相應飼料喂養7 d，并于第七天禁食12h 后，用6%水合氯醛腹腔注射麻醉，摘取雙側卵巢用4%多聚甲醛固定，并斷頭取血并分離血清，用于檢測各項性激素。

2.3 卵巢排卵情況比較

4%多聚甲醛固定雙側卵巢，切片后用HE 染色，以黃體的形成判定為排卵，光鏡下觀察排卵，計算各組大鼠排卵率（排卵率=排卵大鼠數目/大鼠總數×100%）、平均排卵數（平均排卵數=黃體總數/大鼠總數）和囊性擴張卵泡率（囊性擴張卵泡率=囊性擴張卵泡數/卵泡總數×100%）。

2.4 血脂、空腹血糖及空腹胰島素的檢測

生化分析儀檢測大鼠的TG、TC、LDL、HDL。血糖用葡萄糖氧化酶法測定，胰島素用放射免疫法測定，均嚴格按照試劑盒說明書進行。

2.5 性激素檢測

血清T、E2、P、FSH 和LH 均采用放射免疫法測定，均嚴格按照試劑盒說明書進行。

2.6 統計學處理

采用統計軟件SPSS17.0 進行統計分析，所有數據以（x±s）表示，組間差異采取單因素方差分析，多個組間比較采用LSD 分析，均以P＜0.05 為差異具有統計學意義，P＜0.01 為差異具有顯著統計學意義。

3 結果

3.1 各組排卵情況的比較

與對照組比較，低中高劑量治療組平均排卵數及排卵率顯著增加（P＜0.01），但仍明顯低于正常組（P＜0.05），囊性擴張卵泡率無明顯改變（P>0.05）。與正常組比較，模型組平均排卵數及排卵率均顯著降低（P＜0.01），囊性擴張卵泡率顯著增加（P＜0.01）。結果見表1。

表1 各組大鼠排卵情況比較

3.2 各組FBG，Fins 及ISI 的比較

與對照組比較，低中高劑量治療組FBG 無明顯變化（P>0.05），但Fins 顯著降低（P＜0.01），ISI 顯著升高（P＜0.01）；與正常組比較，模型組FBG 和Fins均升高（P＜0.05），ISI 則顯著降低（P＜0.01）。結果見表2。

表2 各組大鼠FBG，Fins 及ISI 比較

3.3 各組血脂的比較

與對照組比較，低中高劑量治療組TG、TC 和LDL 水平均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01），HDL 水平顯著增高（P＜0.05）；與正常組比較，模型組血清TG、TC 和LDL 濃度均顯著升高（P＜0.01），HDL 顯著降低（P＜0.01）。結果見表3。

3.4 各組血清性激素的比較

與對照組比較，低中高劑量治療組血清T 和E2濃度均降低，FSH 濃度升高（P＜0.05），LH 水平無明顯改變（P>0.05）；與正常組比較，模型組血清T，E2和LH 濃度均顯著升高（P＜0.01），FSH 濃度顯著降低（P＜0.01）。結果見表4。

表3 各組大鼠血清脂質比較

表4 各組大鼠血清性激素比較

4 討論

PCOS 的病因尚不清楚，涉及的病理機制非常復雜。一般認為與下丘腦-垂體-卵巢軸功能失常、腎上腺功能紊亂、遺傳、代謝等因素有關。但目前發病機制尚不明確，其內分泌特征包括：雄激素過多、雌酮過多、黃體生成激素、卵泡刺激素（LH/FSH）比值增大、胰島素過多等，與以下因素有關：①下丘腦-垂體-卵巢軸功能紊亂；②胰島素抵抗；③胰島素樣生長因子-1 的激活；④腎上腺來源雄激素過多等[9-11]。

《內經》對“痰瘀”相關的理論早有記載，“痰”和“瘀”皆為陰邪，痰自津來，瘀本乎血，津血同源，陰精陽氣失其常度，則津灼為痰，血滯為瘀，說明痰瘀實為同源。基于痰瘀同治方的理論，伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征及其導致的糖、脂代謝紊亂屬于中醫“痰濁”和“瘀邪”范疇[12-15]。而痰瘀同治方由二陳湯和失笑散構成，二陳湯中半夏辛溫性燥，善能燥濕化痰，且又和胃降逆，為君藥。橘紅為臣，既可理氣行滯，佐以茯苓健脾滲濕，滲濕以助化痰之力，健脾以杜生痰之源，又以甘草調和諸藥；失笑散中五靈脂苦咸甘溫，入肝經血分，功擅通利血脈，散瘀止痛；蒲黃甘平，行血消瘀，炒用并能止血，二者相須為用，為化瘀散結止痛的常用組合。兩方結合，化痰去瘀，健胃運脾，使脾胃運化正常，痰瘀去，脈道通，血行流利，胞宮得養，則疾病可愈。

實驗顯示：模型組大鼠出現卵巢排卵率下降，糖、脂質代謝紊亂和胰島素抵抗，表明伴胰島素抵抗的PCOS 建模成功。成模大鼠經痰瘀同治方干預后，平均排卵數及排卵率顯著增加；血脂中TG、TC和LDL 顯著降低，LDL 明顯升高，血清T 和Fins 濃度顯著降低，FSH 濃度及ISI 明顯升高，且與正常組之間無明顯差異。這一結果證實了痰瘀同治方對IR的PCOS 大鼠具有改善排卵障礙、增加胰島素敏感性和降低性激素水平的作用。該結果為痰瘀同治方在臨床上治療伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征提供了實驗依據。

[1] Bhathena R K. Therapeutic options in the poIycystic ovary syndrome[J]. J Obstet GynaecoI 2007，27（2）：123-129.

[2] 周芳. 中西醫結合治療多囊卵巢綜合癥40 例臨床觀察[J]. 醫學信息，2015（13）：219-220.

[3] 吳泰蓉. 辨證施治多囊卵巢綜合癥的臨床體會（附60 例病例報道）[J]. 貴陽中醫學院學報，2010，32（5）：39-40.

[4] 李瓊. 補腎通脈方改善PCOS 大鼠胰島素抵抗和排卵障礙的分子機制研究[D]. 武漢：華中科技大學，2009.

[5] 張娟，朱桂金，王昕榮，等. 硫酸普拉睪酮鈉誘導大鼠多囊卵巢綜合征動物模型的實驗研究[J]. 中國優生與遺傳雜志，2007，15（2）：83-84，96.

[6] 馮光榮，尤昭玲，賀冰. 多囊卵巢綜合征動物模型建立的研究現狀與展望[J]. 湖南中醫藥導報，2004，10（1）：45-46.

[7] Lee MT，Anderson E，Lee GY. Changes in ovarian morphology and serum hormones in the rat after treatment with dehydroepiandrosterone[J]. Anatomical Record，1991，231（2）：185-192.

[8] 李光偉，潘孝仁，Lillioja S，等. 檢測人群胰島素敏感性的一項新指數[J]. 中華內科雜志，1993，32（10）：656-659.

[9] 高金玲. 多囊卵巢綜合癥研究進展[J]. 中國中醫藥咨訊，2010，2（16）：151-152.

[10] 樂杰. 婦產科學[M]. 北京：人民衛生出版社，2008：315-316.

[11] 安豐艷，隋文美，于秀紅，等. 多囊卵巢綜合癥的中醫臨床施治[J]. 按摩與康復醫學（中旬刊），2012，3（12）：379.

[12] 史志剛，渠會瑩. 從痰瘀脾虛論治胰島素抵抗[J]. 疑難病雜志，2002，1（4）：249-250.

[13] 陳英群，董福輪，王宇鋒，等. 從脾論治胰島素抵抗糖脂代謝紊亂的思路[J]. 中醫雜志，2008，49（3）：273-275.

[14] 熊曼琪，鄭兆智. 內分泌科專病與風濕病中醫臨床診治[M]. 北京：人民衛生出版社，2000：35.

[15] 賈偉平，項坤三，陳俊茜. 中國人糖耐量異常與胰島素抵抗和胰島素分泌[J]. 中國糖尿病雜志，2000，8（2）：67-71.