禿葉黃檗果實的揮發性化學成分分析

蔣太白，危 莉，王道平，蔣小虎，危 英＊

（1.貴陽中醫學院 藥學系，貴州 貴陽550002；2.貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室，貴州 貴陽550002）

禿葉黃檗（Phellodendron chinese Schneid.var.glabriusculum Schneid.）為蕓香科黃檗屬（Phellodendron）植 物，是 川 黃 檗 （P.chinese Schneid）的變種，兩者的樹皮常作為黃柏藥材使用。該植物多生于海拔800～1 500m山地疏林或密林中，在四川、貴州、湖南等南方地區均有分布［1］。其味苦、性寒，具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效，主要用于治療濕熱瀉痢，熱淋澀痛，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，瘡瘍腫毒等病癥［2］。據《中華本草》記載，黃檗果實揮發油及其單體香葉烯具有一定的鎮咳作用［3］。蘇榮輝［4］等發現，黃皮樹干果的提取物有滅殺家蠅和白蟻拒食的活性。晏晨［5－6］等研究發現，禿葉黃檗果95%乙醇提取物的酸水解產物中含有大量三萜類和生物堿類化合物。目前，禿葉黃檗除了樹皮作為藥用來源外，其果實的利用未見報道。為綜合開發利用禿葉黃檗資源，筆者采用頂空固相微萃取－氣質聯用法，首次對禿葉黃檗新鮮果實揮發性化學成分進行定性、定量分析。

1 材料與方法

1.1 藥材與儀器

藥材：禿葉黃檗果實于2012年9月采集于貴州省貴陽市藥用植物園，經貴陽中醫學院陳德媛教授鑒定，試驗樣本（No.05／2012／PCS）保存于貴陽中醫學院植化教研室。

儀器：HP6890／5975CGC／MS聯用儀（美國安捷倫公司），手動固相微萃取（SPME）裝置（美國Supelco公司），StableFlex復合萃取纖維頭：2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS（美國Supelco公司）。

1.2 揮發性物質的提取

取樣品約5.0g，置于15mL固相微萃取儀采樣 瓶 中，插 入 裝 有 2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS StableFlex纖維頭的手動進樣器，在85℃左右頂空萃取30min取出，快速移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進樣口（溫度250℃）中，熱解析3min進樣。

1.3 氣相色譜－質譜條件

HP－5MS彈性石英毛細管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；載氣為高純 He（99.999%）；載氣流量1.0mL／min；汽化室溫度250℃；色譜柱初始溫度45℃（保留2min），以4℃／min升溫至220℃，保持2min；柱前壓7.62psi，不分流進樣；溶劑延遲時間：1.5min。質譜條件：電離方式為EI源，離子源溫度230℃，電子能量70eV，四極桿溫度150℃，接口溫度280℃，發射電流34.6μA；倍增器電壓1 125V，質量掃描范圍20～450amu。

1.4 統計分析

所得總離子流圖中的各峰經計算機用HP chemstation檢索及核對Nist 05標準質譜圖庫和Wiley275標準質譜圖，確認揮發性化學成分，用峰面積歸一化法測定各化學成分的相對質量分數。

2 結果與分析

通過檢測獲得禿葉黃檗新鮮果實揮發性成分的總離子流圖（圖示），結合定性分析軟件和定量分析軟件對圖進行分析，確認其中大部分化學成分和相對百分含量（表）。由表可知，從新鮮禿葉黃檗果實揮發性成分中分離并鑒定出45種化合物，占總揮發性成分的99.95%，主要揮發性成分為烯烴類，含量為97.5%，其中相對百分含量大于1.5%的成分有β－月桂烯、β－欖香烯、大根香葉烯D、β－欖香烯和β－水芹烯，其含量分別為66.9%、14.5%、6.8%、1.7%和1.6%。

圖示 禿葉黃檗果實揮發性成分的總離子流圖Fig. Total ion chromatogram of volatile oil from P.Chinese fruit

表 禿葉黃檗新鮮果實的揮發性成分Table Volatile constituents from fresh fruit of P.chinese

3 結論與討論

試驗采用頂空固相微萃取（HS－SPME）技術首次對禿葉黃檗新鮮果實揮發性成分進行萃取、富集，用氣相色譜－質譜（GC－MS）法分析和鑒定其化學成分，從中分離鑒定出45個化學成分，其相對含量占揮發油總量的99.95%，烯烴類的揮發性成分含量高達97.5%，其中單萜類成分β－月桂烯和β－欖香烯含量較高，分別為66.7%和14.5%。說明，在禿葉黃檗新鮮果實中的主要揮發性成分以烯烴類的β－月桂烯和β－欖香烯為主，其他成分如醇類、醛酮類、酯類、有機酸含量較少。

侯冬巖［7］等曾采用GC－MS法分析同屬植物黃柏果實的揮發油，發現有23種成分，其主要成分為月 桂 烯 （36.3%）、β－香 茅 醇 （25.3%）、α－蒎 烯（14.1%）。通過對比禿葉黃檗果實與黃柏果實揮發油測定結果發現，兩者所含主要揮發性成分有一定差異，但含量最多的成分均為月桂烯，且新鮮禿葉黃檗果實中β－月桂烯含量為黃柏果實的2倍。β－月桂烯常作為精油合成的中間體，廣泛應用于化妝品、肥皂、洗滌劑生產中。此外，β－月桂烯有多種藥理活性，我國學者李云龍早期研究發現，β－月桂烯具有鎮咳祛痰作用［8］。同時，其具有抗腫瘤譜廣、毒副作用低的優點，目前已開發為二類非細胞毒性的廣譜抗腫瘤新藥，在臨床上廣泛用于肺癌、消化道腫瘤及其他淺表性腫瘤的治療，具有良好的發展前景［9－10］。β－月桂烯藥理研究發現，該化合物具有抗氧化和抗潰瘍活性，能顯著減少胃和十二指腸病變以及增加胃黏液產生進而保護胃粘膜［11］。但是，β－月桂烯除了有鎮咳、抗氧化、抗腫瘤、抗潰瘍活性外，還具有致癌作用。國外研究者發現，口服大劑量β－月桂烯將誘發鼠的腎、鼻和肝臟非腫瘤性病變［12－13］。β－欖香烯在抗腫瘤活性方面有良好的表現，對肺癌A459細胞、乳腺癌MCF－7細胞和膀胱癌BIU－87細胞有顯著的抑制作用并且能誘導其凋亡［14－16］。因此，β－月桂烯和β－欖香烯無論是在醫藥和日化產品領域的開發都有一定的潛力。

試驗對禿葉黃檗新鮮果實中的揮發性成分進行詳細分析發現，果實中富含β－月桂烯和β－欖香烯2種揮發性成分，兩者都具有抗腫瘤活性，并且已經用于臨床的抗腫瘤治療。β－月桂烯還廣泛作為生產日化產品的工業原料。此外，禿葉黃檗果實的水解產物中富含三萜類化合物，其衍生物具有抗HIV－1蛋白酶作用。由此可知，對禿葉黃檗新鮮果實揮發性成分的研究，為其綜合利用以及拓寬黃檗的藥用提供了科學依據。

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