磷酸伯氨喹原料及片劑中主要雜質的結構鑒定

李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*（云南省食品藥品檢驗所，云南 昆明 650011）

磷酸伯氨喹原料及片劑中主要雜質的結構鑒定

李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*
（云南省食品藥品檢驗所，云南 昆明 650011）

采用LC-MS 聯用技術進行鑒定；利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質，進一步采用核磁技術進行結構確證。得到了磷酸伯氨喹原料的1個主要雜質的結構確證結果，對磷酸伯氨喹原料的雜質分析、質量控制和生產工藝的改進具有重要作用。

磷酸伯氨喹原料；磷酸伯氨喹片劑；雜質結構；液質聯用；半制備高效液相色譜；核磁鑒定

0 引言

伯氨喹由Elderfield于1946年化學合成，并于1955年改良工藝，其成鹽形式有磷酸鹽與草酸鹽兩種，主要應用形式為磷酸伯氨喹，其藥用價值很快被發現并應用于臨床，作為抗瘧藥載入英美藥典。磷酸伯氨喹于《中國藥典》1963年版首次收載，此后每版《中國藥典》均收載了該品種。磷酸伯氨喹包括美國藥典規定的對照品中都含有明顯的特殊雜質，但《中國藥典》2010年版二部酸伯氨喹原料項下僅用薄層色譜法來控制雜質總量，未控制特殊雜質的限量。國內外文獻有過對此雜質的一些結構推測，國內認為是光學異構體，國外文獻有的認為是叔氨喹，有的認為是異伯喹。但都未做結構鑒定，只有推測。本文采用液相色譜-質譜（HPLC-MS）聯用技術對該雜質的結構進行初步分析，并進一步利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質，采用核磁技術進行了結構確證，從而為磷酸伯氨喹的質量控制、生產工藝的改進提供依據，圖1 為磷酸伯氨喹的化學結構

圖1 磷酸伯氨喹的化學結構

1　儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，waters質譜儀，waters半制備液相色譜儀，avance核磁共振波譜儀，mettler電子天平。

甲醇（ 色譜純，Merck 公司） ，超純水，甲酸，磷酸伯氨喹對照品（usp），3批磷酸伯氨喹片樣品收集自1個廠家，4批磷酸伯氨喹原料收集自2個廠家。

2　磷酸伯氨喹的雜質考察

2.1常規液相色譜法

2.1.1色譜條件

圖2 磷酸伯氨喹對照品色譜圖

圖3 磷酸伯氨喹樣品色譜圖（12批次樣品的色譜圖）

2.1.2溶液的制備

原料藥：精密稱取磷酸伯氨喹原料20mg，置50mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理使其溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

磷酸伯氨喹片：取該品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于磷酸伯氨喹10mg）置50mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理使其溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

另取磷酸伯氨喹對照品適量，加流動相制成每1 mL 中約含0.2mg的溶液，搖勻即得。

2.1. 3 雜質的考察與結果

以“2.1. 2”項下方法對3 批次磷酸伯氨喹片、4批次磷酸伯氨喹原料進行雜質考察，發現在7 批次樣品的色譜圖中，有一主成分峰，主峰前有一共同明顯的雜質峰，稱其為雜質1。以購買到的磷酸伯氨喹對照品進樣，也有同樣的兩個峰，如圖2和圖3所示。

2.2液相色譜與質譜聯用法

液相條件：Waters e2695高效液相色譜儀，采用3.5μm，4.6×150mm Waters SunFire的C18色譜柱；以戊烷磺酸鈉溶液—甲醇（50∶50）為流動相；流速為0.5mL/min，檢測波長為264nm。

式(10)表示根據zn,p,h,kn,p,f,wn,p計算每一個分塊p與芯片f分區交集數值上限，式(11)規約分塊p在左右兩側與f分區部分相交時重疊區域的范圍.

質譜條件：離子源為ESI，質量分析器為四極桿飛行時間，正離子檢測模式，離子掃描范圍m/ z 50～ 1500，離子源前進樣分流比為3∶ 1。離子源參數：毛細管電壓3. 5 kV，噴霧電壓0. 31 MPa，脫溶劑氣（ N2） 流量為10 L·min - 1，干燥氣溫度350 ℃，碎裂電壓120 V，碰撞能量15 eV。

溶液制備同2.1.2項下。

結果：雜質1與主成分2個組分結構不同，見圖4，圖5。

圖4 雜質1的質譜圖

圖5 磷酸伯氨喹（主峰）的質譜圖

3　雜質1的分離與結構鑒定

3.1雜質1的分離

利用制備液相色譜法進行雜質1分離。Agilent 1200液相色譜儀，采用Agilent ZORBAX StableBond C18 規格： 250mm*9.4mm*5um色譜柱，以40%甲醇-0.5%甲酸水為流動相，流速1. 0 mL·min - 1，檢測波長264nm，進樣量50μl。

取磷酸伯氨喹原料制成100mg/mL的溶液按上述色譜條件進行雜質1的分離，并進行純化，得到純度大于98%的單體化合物20mg。

3.2雜質1的結構鑒定

雜質1通過MS、1H-NMR、13C-NMR及二維核磁進行結構分析與確認，得知雜質1為異伯喹（8-［（4-aninopentyl）anio］-6-methoxyquinoline），結構如圖6所示。

圖6雜質1 異伯喹（8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline）的化學結構圖

雜質1（異伯喹）1H-NMR（400MHz， C5D5N）：

8.67（1H， d， J=2.8Hz， H-2’）， 8.03（1H， dd，J=8.0，1.2Hz， H-4’）， 7.32（1H， dd， J=8.0， 2.8Hz，H-3’），6.74（1H， t，J=4.8Hz， 1-H）， 6.60（1H， d，J=2.4Hz，HHH H-7’）， 6.55（1H， d， J=2.4Hz， H-5’），3.81（3H， s， OCH3），3.25（2H， m， H-2），2.84（1H， m，H-5），1.73（2H， m， H- 3）， 1.39（2H，m，H-4）， 1.00（3H，d， J=5.6Hz， H-6）.

雜質1（異伯喹）13C-NMR（100MHz， D2O）： δ

160.0（C-6’），149.9（C-8’）， 146.4（C-9’），144.4（C-2’）， 134.8（C-4’）， 130.2（C-10’），122.1（C-3’）， 96.7（C-7’）， 92.0（C-5’），55.0（OCH3）， 47.0（C-5）， 43.4（C-2）， 37.8（C-4），26.0（C-3）， 24.3（C-6）.

4　雜質的來源分析

雜質異伯喹可能是由肼解反應的原料丁胺喹啉的結構異構體，在生成游離伯喹時同時產生反應生成的，見圖7。

5　討論

1）本文的研究確定了伯氨喹原料及制劑中的雜質1為8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline（異伯喹），而不是磷酸伯氨喹的光學異構體也不是叔氨喹。

圖7 雜質來源分析圖

2）對雜質1（異伯喹）的來源進行了推測，異伯喹可能是由肼解反應的原料丁胺喹啉的結構異構體，在生成游離伯喹的時候同時產生反應生成的。要想控制雜質1異伯喹的量，必須對肼解反應的原料丁胺喹啉的質量進行控制。

3）在美國藥典對照品中也檢出了此雜質，說明在現有條件下無法回避異伯喹雜質的產生。

R927

B

1004-1168（2015）03-0067-04

2015-04-03

李玉鳳（1980-），女，云南昆明人，主管藥師，主要從事化學藥品的質量檢驗、藥品標準起草和藥品的產品質量評價研究工作。