高效液相色譜法測定鹽酸普萘洛爾乳膏的含量

謝新民，劉志剛，黃雪峰，袁 進

(中國人民解放軍廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東 廣州 510010)

鹽酸普萘洛爾是β－受體阻斷劑，臨床主要用于心血管系統疾病及甲狀腺功能亢進癥等[1]，外用鹽酸普萘洛爾對淺表血管瘤有效[2]。在外用制劑中，乳膏劑使用方便，可避免溶液劑在使用時藥物流失導致的劑量不準，對淺表血管瘤更為合適。鹽酸普萘洛爾乳膏為我院自制制劑，主要用于淺表血管瘤的治療，臨床效果好。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定鹽酸普萘洛爾乳膏的含量，方法簡單、快速，結果可靠。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;Sartorius BP211D型電子分析天平。鹽酸普萘洛爾對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100783－200401);鹽酸普萘洛爾乳膏(本院普制室，批號為120607，120816，120923);甲醇(色譜純，Dikma 公司);純化水(自制);其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:磷酸二氫鉀(含 0.1%庚烷磺酸鈉的 0.05 mol/L)－甲醇(50 ∶50);流速:1.0 mL/min;檢測波長:290 nm，柱溫:30℃。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸普萘洛爾對照品適量，置容量瓶中，用水溶解稀釋并制成每1 mL中含200 μg鹽酸普萘洛爾的溶液，搖勻，作為鹽酸普萘洛爾對照品溶液。取供試品適量(約相當于鹽酸普萘洛爾20 mg)，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入75%甲醇適量，于70℃水浴中加熱至溶解，冰箱中放置10 min，放至室溫，加75%甲醇至刻度搖勻，作為供試品溶液。按處方稱取除去鹽酸普萘洛爾的輔料，按工藝制成陰性樣品，作為陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察[3]

專屬性考察:取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液分別進樣10 μL，記錄色譜圖(見圖1)。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應保留時間處有相應色譜峰，陰性對照品溶液在此保留時間處無相應色譜峰，表明其對檢測無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:取鹽酸普萘洛爾對照品制成質量濃度為100，200，300，400，500 μg/mL 的系列溶液，精密量取 10 μL 分別注入高效液相色譜儀測定，記錄色譜圖，以鹽酸普萘洛爾質量濃度(X，μg)對峰面積(Y)進行回歸，得回歸方程 Y=1 130.5 X－48.29，r=0.999 7(n=5)。結果表明，鹽酸普萘洛爾質量濃度在97.08 ～485.4 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取2.2項下供試品溶液10 μL，在擬訂色譜條件下重復進樣6次，以鹽酸普萘洛爾峰面積計算。結果的RSD為0.33%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性考察:精密吸取2.2項下同一供試品溶液10 μL，分別于 0，1，2，3，4，5，12 h 時進樣，按擬訂色譜條件測定峰面積。結果鹽酸普萘洛爾平均含量為105.21%，RSD為0.54%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內穩定，可滿足測定需要。

重復性試驗:取同一批號樣品(批號為120607)，按2.2項下制備方法制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件測定峰面積。結果鹽酸普萘洛爾平均含量為103.01%，RSD為1.36%(n=6)，表明方法具有較好的重現性。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為120607)約1 g，加入對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入75%甲醇適量，于70℃水浴中加熱至溶解，冰箱中放置10 min，放至室溫，0.2 μm微孔濾膜濾過，按擬訂色譜條件測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸普萘洛爾加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

精密量取供試品溶液與對照品溶液各10 μL分別注入高效液相色譜儀，照2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅤD[4]中HPLC法測定。依照上述含量測定方法，測定3批樣品。結果3批樣品(批號為120607，120816，120923)中鹽酸普萘洛爾含量分別為標示量的 102.89%，100.52%，99.88%。

3 討論

鹽酸普萘洛爾在水或乙醇中溶解，但當溶劑為純水、純乙醇、純甲醇或醇水混合比例不當時，HPLC色譜峰會出現雙峰，而鹽酸普萘洛爾乳膏在純水中或含水比例較高的醇水混合物中溶解效果不佳。通過試驗確證，供試品的制備用75%甲醇在70℃水浴中加熱溶解，在冰箱中放置10 min，HPLC色譜圖峰形好，含量測定結果準確。參考文獻[5－6]，對鹽酸普萘洛爾乳膏含量測定的流動相的選擇進行試驗，結果以磷酸二氫鉀(含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05 mol/L)－甲醇(50∶50)為流動相時，供試品分離效果最好。HPLC法是目前鹽酸普萘洛爾定量分析應用較多的方法，而對鹽酸普萘洛爾乳膏中鹽酸普萘洛爾的含量測定未見報道。本研究中采用HPLC法測定鹽酸普萘洛爾乳膏的含量，結果表明該方法簡便、準確、重現性好。

[1]王 超，陳 飛，洪麗娟，等.鹽酸普萘洛爾滲透泵片的制備及Beagle犬體內藥動學研究[J].中國新藥雜志，2008，17(2):146－149.

[2]Wang Lie，Xia Yin，Zhai Yanan，et al.Topical propranolol hydrochloride gel for superficial infantile hemangiomas[J].J Huazhong Univ Sci Technol，2012，32(6):923 － 926.

[3]冷柏榕，嚴相平.高效液相色譜法測定非布司他片的含量[J].中國藥業，2013，22(6):69 －70.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄ⅤD.

[5]趙純玉，王 玲，易燕群.HPLC法測定鹽酸普萘洛爾片的含量[J].首都醫藥，2011，18:59 －60.

[6]馬春燕.高效液相色譜法測定鹽酸普萘洛爾片含量[J].中國藥師，2005，8(8):637 －638.