市售不同加工方法當歸的GC-MS分析△

魏文龍，黃林芳

(中國醫學科學院 北京協和醫學院 藥用植物研究所，北京 100193)

·中藥農業·

市售不同加工方法當歸的GC-MS分析△

魏文龍，黃林芳*

(中國醫學科學院 北京協和醫學院 藥用植物研究所，北京 100193)

目的：開展不同加工方法對市售當歸藥材中揮發油含量影響的研究，為建立當歸藥材合理的加工工藝提供科學依據。方法：收集不同加工處理的當歸藥材，運用氣相色譜質譜聯用儀(GC-MS)測定揮發油含量，應用含量數據進行主成分分析(PCA)。結果：煙熏和曬干處理的當歸品質較優，硫熏和酒炙品質較差；硫熏、酒炙和曬干三種加工處理的當歸藥材能夠明顯區分開，煙熏與曬干較接近；揮發油中鑒定出22個化合物，其主要成分藁本內酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內酯A的相對含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%。結論：該研究探究不同加工方法對當歸藥材揮發油含量影響，為硫熏工藝規范化奠定基礎。

當歸；加工方法；成分含量；GC-MS

當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，性溫，味甘、辛，具有補血活血調經止痛潤腸通便之功效[1]。苯酞類化合物為當歸揮發油中主要活性成分，現代藥理實驗研究表明此類化合物具有抗血栓、平喘、鎮痛、抑制平滑肌痙攣等廣泛藥理作用[2-4]。藥材生產加工工藝會對藥材質量產生很大影響，從而影響臨床療效。不同的種植戶采用不同的方法干燥，除傳統煙熏外，還有曬干、陰干等方法，其產地加工無規范的指南，存在一定的盲目性和隨意性。近年來發現，在當歸的主要產區甘肅，當地藥農在加工過程中為了使藥材色澤潔白和防腐，采用硫磺熏制的現象較為普遍[5-6]，而硫磺熏蒸會使藥材中的化學成分發生改變，并伴有SO2殘留，會嚴重影響到用藥安全性[7-8]。本實驗收集甘肅岷縣當歸藥材市場上硫熏、煙熏、曬干、酒炙的藥材，應用氣象色譜-質譜聯用技術(GC-MS)對其中的揮發性成分進行分析，測定藥材中4種苯酞類成分含量，考察不同加工方法對藥材化學成分的影響，從而為當歸質量控制提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器及試藥

安捷倫6890氣相色譜儀；氫火焰離子化檢測器；HP-5石英毛細管氣相色譜柱(HP公司，30 m×0.25 mm)；乙酸乙酯(分析純，北京化工廠)，對照品，藁本內酯Ligustilide(批號：MUST-11072416)、正丁基苯酞n-Butylphthalide(批號：MUST-12020706)、丁烯基苯酞Butylidenephthalide(批號：MUST-12071103)、洋川芎內酯A senkyunolide A(批號：MUST-10102309)均購于成都曼思特生物科技有限公司，純度經高效液相色譜分析大于98%。

當歸藥材統一購自甘肅省岷縣當歸城藥材市場(見表1)，藥材上部主根圓柱形，下部分出多條支根，表面棕黃色或黃褐色，斷面黃白色或淡黃色，具油性，氣芳香，味甘微苦，無須根、雜質、蟲蛀、霉變。硫熏當歸外表色澤金黃，聞起來有明顯的硫磺味；曬干當歸呈土褐色，無異味；煙熏當歸表面黃褐色，香氣濃；酒炙當歸切面深黃色，味甘、微苦，香氣濃厚，有酒香氣(見表2)。

表1 不同加工方法當歸藥材列表

表2 不同加工處理當歸外觀及氣味比較

1.2 對照品溶液制備

稱取洋川芎內酯A，正丁基苯酞、藁本內酯、丁烯基苯酞6 mg于10 mL棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，混勻。

1.3 供試品溶液的制備

有機溶劑超聲提取法：取干燥當歸藥材粉碎，過四號篩，精密稱取粉末1 g于100 mL具塞錐形瓶中，加50 mL乙酸乙酯溶劑超聲提取30 min，過濾，重復提取一次，合并提取液，離心上清液用定容于100 mL量瓶中，用0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

1.4 色譜條件

安捷倫6890氣相色譜儀：50 ℃開始保留2 min，以10 ℃/min升至250 ℃，保留10 min，進樣量1.0 μL，分流比1∶10；載氣高純N2，尾吹氣高純N2，氣化室溫度250 ℃，檢測室溫度250 ℃。

2 結果與討論

2.1 線性關系考察

取標準品溶液至進樣瓶中，分別進樣1、2、3、4、5 μL進行測定，以峰面積為縱坐標，以進樣量為橫坐標繪制標準曲線。結果表明，范圍內呈良好線性關系(見圖1)。

2.2 精密度試驗

取0.1 mg·mL-1標準品溶液，進樣量1 μL，連續進樣6次，4種苯酞類化合物峰面積RSD值為0.21%，表明儀器精密度良好。

2.3 重現性實驗

取同一批次的甘肅岷縣當歸樣品，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測定，各對照品色譜峰的峰面積在0.52%～1.84%范圍內，表明此方法的重現性良好。

2.4 穩定性實驗

取上述供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24、36 h，按前述測定方法進行測定，記錄峰面積，各對照品色譜峰的峰面積對應的濃度的RSD值在0.76%～2.25%范圍內，表明樣品至少在36 h內穩定。

2.5 加樣回收率實驗

取已測知含量的同一批次(甘肅岷縣-DG1)樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別精密加入一定量(相當于樣品中的量)4種對照品，按供試品溶液的制備方法操作，按上述色譜條件測定。4種成分的回收率在98.33%～102.22%，RSD值在1.16%～4.72%之間[9-10]。

圖1 苯酞類成分的標準曲線

2.6 樣品測定

取9種不同加工處理方法的市售當歸樣品，按1.3項下方法制備供試品溶液，精密吸取5 uL進樣，平行測定3次，計算當歸中洋川芎內酯A、正丁基苯酞、藁本內酯的含量[11-12]，色譜分離圖(見圖2)，結果見表3和圖3。

表3 苯酞類成分的含量測定結果 /mg·g-1

圖2 不同加工方法當歸藥材GC-MS指紋圖譜

2.7 結果分析與成分鑒定

9種市售當歸藥材GC-MS指紋圖譜(如圖2)所示。結合表3、圖3分析，不同加工方法當歸藥材及飲片中，正丁基苯酞質量分數排序為：傳統煙熏≈酒炙>曬干>硫熏。丁烯基苯酞質量分數排序為：曬干>傳統煙熏>酒炙>硫熏。洋川芎內酯A質量分數排序為：酒炙>曬干>傳統煙熏>硫熏。蒿本內酯質量分數排序為：傳統煙熏>曬干>硫熏>酒炙。煙熏、曬干、硫熏、以及酒炙當歸四者進行比較，硫熏與酒炙當歸含量較低，而曬干當歸與煙熏當歸較為相似且較高。將硫熏與曬干當歸比較分析，當歸經硫熏后四種苯酞類成分的含量均呈降低趨勢，其中藁苯內酯降低最為明顯，含量下降58%，正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內酯A分別下降49%、38%和27%。將含量測定結果導入Simca-P軟件，進行PCA分析，2個主成分累計解釋率達88.69%，發現硫熏、曬干、酒炙三種不同加工處理的當歸藥材能夠明顯區分開來(見圖3)，且煙熏與曬干較接近。

圖3 不同加工方法當歸藥材PCA分析

利用氣相色譜-質譜(GC/MS)聯機分析，經計算機譜庫(WILEY)檢索及與標準圖譜對照，采用面積歸一法共鑒定出22種化合物[13-14]。其中主要成分為藁本內酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內酯A，相對含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%(見表4)。

表4 當歸主要揮發油的化學成分及相對含量

3 結論

應用GC-MS法測定當歸藥材，共鑒定出22種化合物。定性分析表明，其主要成分為藁本內酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內酯A、二十三酸。不同加工方法的當歸品質呈現差異。其中曬干和煙熏當歸質量較優，硫熏當歸質量較差。曬干當歸雖然質量較好，但當歸藥材富含油脂類成分，在保存過程中容易引起蟲蛀，不宜長期保存。煙熏當歸是傳統產地加工方式，具有外觀品相欠佳，煙熏過程的溫度、時間及操作方式多依靠主觀經驗等缺陷，且煙熏產生的煙塵顆粒物會使當歸藥材有效成分和無機元素的含量及分布發生變化。硫熏當歸是一種較為廣泛應用的加工方法，雖具有殺菌、防蟲、容易操作、花費較低及色澤較好的優點，但硫化物及砷有害殘留嚴重影響當歸藥材品質[15]。已有學者報道通過控制硫熏過程中的含氧量、溫度和硫磺量等參數來保障藥材品質[16]。目前，因曬干方法簡便，成本較低且能保障當歸品質，大部分栽種者仍采用此種方法，但曬干當歸較易引起蟲蛀，未能進行長期保存，未來尋求一種防蛀方法是當歸長久貯藏和品質保障的重要先決條件，也將是當歸加工貯藏規范化、標準化的重點之一。

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StudiesonthedifferentprocessedcommercialRadixAngelicaSinensisbasedonGC-MSandChemometrics

WEIWenlong，HUANGLinfang*

(InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China)

Objective：the research for the difference of volatile oil content was carried out to establish a reasonable processing technology for RadixAngelicaSinensis.Method：nine different processed RadixAngelicaeSinensiswere collected，GC-MS was used to qualitatively and quantatively analyze the volatile oil content，and content data were applicated in the principal component analysis.Results：the quality of smoked and sun-dried samples was better than sulfur-fumigated and wine-processed samples；different processed samples were distinguished clearly；22 compounds were identified，and the relative contents of main compounds including ligustilide，dibutyl phthalate，n-Butylphathlide，butylidenephthalide，senkyunolide A and tricosanoic acid were 53.55%，23.66%，3.89%，4.20%，2.06%，2.88%.Conclusion：The study explored the difference of volatile oil content in processed RadixAngelicaeSinensis，and laid the foundation for standardization of sulfur-fumigation.

RadixAngelicaeSinensis；Processing method；Volatile oil；GC-MS

2014-12-18)

國家自然科學基金面上項目(81274013，81473315)；國家自然科學基金重點項目(81130069)

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黃林芳，副教授，碩士生導師，研究方向：中藥資源與質量評價研究；Tel：(010)57833197， E-mail：lfhuang@implad.ac.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.014