野菠菜葉總黃酮提取工藝

許福泉，朱強，郭雷，趙雨

（淮海工學院江蘇省海洋生物重點建設實驗室，江蘇連云港222005）

野菠菜葉總黃酮提取工藝

許福泉，朱強，郭雷，趙雨

（淮海工學院江蘇省海洋生物重點建設實驗室，江蘇連云港222005）

為探索野菠菜黃酮提取工藝，提高總黃酮提取率。利用正交試驗考查不同粒度、料液比、乙醇濃度、提取時間、提取溫度下總黃酮濃度，得到最佳提取工藝為：粒度40目、料液比1∶30（g/mL）、提取時間1 h、乙醇溶液體積分數75%，在該工藝下，野菠菜總黃酮得率為3.216 mg/mL。

野菠菜；總黃酮；提取工藝

野菠菜（Rumex maritimus L.）為蓼科（Polygonaceae）酸模屬（Rumex）植物，廣泛分布于江蘇省連云港市灘涂地區，具有悠久的藥用和食用歷史。酸模屬全球約有150種，我國有26種，兩個變種［1］。16種被記載于《神農本草經》、《本草綱目》等典籍中，其中羊蹄、巴天酸模等具有清熱解毒、通便殺蟲等功效，民間常用作“土大黃”［2-3］。酸模植物中黃酮含量較高、結構變化小，目前已分離得到34個單體化合物［4-5］，具有抗菌［6］、抗腫瘤［7］等多種藥理活性。雖然酸模屬植物研究報道較多，但野菠菜目前報道較少，僅有關于其提取物止瀉作用報道［8］，尚少見關于其黃酮成分、提取工藝、活性的研究報道，更未見灘涂高鹽環境下野菠菜黃酮研究報道。基于活性黃酮成分進行提取工藝研究不僅有助于野菠菜藥用開發，也能為相關保健食品研究提供參考［9-10］。本文擬利用正交試驗優化野菠菜葉總黃酮提取工藝，為灘涂植物野菠菜高效利用提供實驗參考。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

野菠菜2013年4月采自江蘇連云港灘涂，由淮海工學院海洋學院朱強實驗師鑒定為蓼科酸模屬植物野菠菜（Rumex maritimus L.），取干燥葉片作為實驗材料；去離子水由Millipore（美國）自制；蘆丁標準品購自國藥集團；無水乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁等均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

Lambda35紫外—可見分光光度計：美國Perkin Elmer公司；R3旋轉蒸發儀：瑞士Buchi公司；EL104電子分析天平：法國Mettler Toledo公司；DZF-6020真空干燥箱：上海飛越實驗儀器有限公司。

1.3 蘆丁標準曲線

按文獻［11］方法建立蘆丁標準曲線。

1.4 樣品提取

1.4.1 脫葉綠素

樣品按料液比1∶10（g/mL）加乙醚冷浸30 min后，取出，通風條件下放置10 min，乙醚揮發完全后待用。

1.4.2 總黃酮提取

野菠菜葉40℃下烘干、粉碎后經不同型號篩處理，收集相應粒度組分并存放于干燥器中。準確稱取不同粒度原料5.0 g按料液比不同加入溶劑，稱重后熱回流提取，提取結束加溶劑補足失重后按料液比不同分別量取20、25或30 mL提取液，45℃減壓回收溶劑（試驗因素水平見表1）。浸膏超聲溶解后定容于25 mL容量瓶中，作為待分析樣品。

表1 正交試驗L9（34）因素水平表Table 1Factors and their levels in L9（34）orthogonal array design

1.5 單因素試驗

固定其他因素水平情況下，分別研究粒度、料液比、提取時間、乙醇溶液體積分數對野菠菜總黃酮提取的影響。

2結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線

蘆丁濃度C與吸光度A的線性回歸方程為：A= 7.984 1X+0.000 4，r=0.999 2。

2.2 單因素試驗結果

粒度40目最適合進行野菠菜黃酮提取；料液比越高越有利于黃酮提取，因此選擇1∶30（g/mL）；而提取時間增加，總黃酮濃度反而小幅下降，提取1 h效果較好；另外，乙醇溶液體積分數75%時，最有利于總黃酮提取。單因素試驗結果見圖1。

圖1 單因素對總黃酮濃度的影響Fig.1Effect of extraction process on total flavonoids

2.3 正交試驗結果

正交試驗結果見表2。

表2 L9（34）正交試驗設計及結果Table 2L9（34）orthogonal array design arrangement and experimental results

由表2可知，影響總濃度因素的大小順序為D＞A＞C＞B，即乙醇溶液體積分數＞粒度＞料液比＞＞提取時間，K值分析可知，最佳組合水平為A2B1C3D2。

2.4 驗證性實驗

根據正交試驗結果確定最佳組合水平為A2B1C3D2，即粒度40目，料液比1∶30（g/mL），提取時間1 h，乙醇濃度75%，按上述水平提取三次后得到總黃酮濃度的平均值為3.216 mg/mL，其總濃度高于正交試驗結果。

3結論

野菠菜在連云港灘涂分布廣泛，為建立野菠菜總黃酮提取工藝，本實驗以總黃酮濃度為指標，通過正交試驗得到野菠菜總黃酮提取工藝：粒度40目，提取時間1h，料液比1∶30（g/mL），乙醇溶液體積分數75%。這是首次關于野菠菜總黃酮提取工藝的研究報道，這能為野菠菜應用研究提供參考。

［1］中國植物志編委會.中國植物志第25卷［M］.北京：科學出版社，1998：344-392

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［5］蘇躍增，高黎明，鄭旭東，等.巴天酸模中的黃酮化合物［J］.西北師范大學學報，2000，36（3）：50-52

［6］NISHINA A，KUBOTA K，OSAWA T.Antimicrobial components，trachrysone and 2-methoxystypandrone，in Rumex japonicus Houtt［J］.J Agric Food Chem，1993，41（10）：1772-1775

［7］KIM D K，CH0I S U，RYU S Y.et al.Cytotoxic con.stituents of Rumex japonicus［J］.Yakhak Hoechi，1998，42（3）：233-237

［8］Rouf ASS，Islam MS，Rahman MT.Evaluation of antidiarrhoeal activity Rumex maritimus root［J］.J Ethnopharm，2003，84（2/3）：307-310

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［11］扶慶權，侯佩，陳能.響應面法優化蘆蒿葉總黃酮的提取工藝［J］.食品科學，2013，34（4）：94-98

Process Optimization for Extraction of Flavonoids from Leaves of Rumex maritimus

XU Fu-quan，ZHU Qiang，GUO Lei，ZHAO Yu
（Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology，Huaihai Institute of Technology，Lianyungang 222005，Jiangsu，China）

To develop a optimal process for improving the total flavonoids concentration from Rumex maritimus，the effects of granularity，ethanol concentration，soaking time and material-liquid ratio on extraction rate of total flavonoids were investigated by orthogonal array design methods.The optimal extraction processing parameters were granularity of 40 mush，material-liquid ratio of 1∶30（g/mL），extraction time of 2 h and ethanol concentration of 75%，and the yield rate was 3.216 mg/mL under this extraction condition.

Rumex maritimus；total flavonoid；extraction process

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.016

2014-10-25

江蘇省灘涂資源與環境保護重點實驗室課題（JLCBE13001）；淮海工學院校課題（Z2012023）

許福泉（1979—），男（漢），講師，博士，研究方向：天然活性成分。