濁點萃取-間接光度法測定飲料中VC

朱圣平，丁宗慶

（鄖陽師范高等專科學校生物化學與環境工程系，湖北十堰442000）

濁點萃取-間接光度法測定飲料中VC

朱圣平，丁宗慶

（鄖陽師范高等專科學校生物化學與環境工程系，湖北十堰442000）

建立了濁點萃取-間接分光光度法測定飲料中VC的方法。優化了pH、試劑用量、平衡溫度和時間等條件。該方法的線性范圍4.0 mg/L～140 mg/L（r=0.999 5），檢出限為2.24 mg/L，加標回收率在97.6%～102.2%之間，相對標準偏差在1.7%～2.4%之間。成功的應用于飲料樣品中VC的測定。

濁點萃取；分光光度法；VC；分離富集；飲料

VC的測定方法主要有碘量法［2］、分光光度法［3-4］、電分析法［5-6］和高效液相色譜法［7］等，碘量法無需特殊儀器，準確度高，但它只適用于較高含量的測定；電分析法和高效液相色譜法需要大型昂貴儀器，不利于普及；分光光度法所用儀器簡單，發展比較迅速。VC難以用直接光度法測定，通常是將其與過量的Fe（Ⅲ）反應，反應后生成的Fe（Ⅱ）再和鄰菲啰啉（Phen）反應生成有色絡合物，利用分光光度法測定。由于飲料中常添加有食用色素，會對光度測定帶來較大的背景干擾，且部分樣品中VC含量較低，使用該方法靈敏度較低。

濁點萃取是一種簡便、環保的液-液萃取分離技術，通過精確控制并改變表面活性劑溶液的溫度，引發溶液的“濁點”現象，通過離心后就可將溶液分離為表面活性劑相（疏水性物質）和水相（親水性物質）［8］。該方法可有效分離飲料樣品中的干擾物質，并對目標分析物有富集作用，能顯著提高分光光度法的準確度和靈敏度。實驗建立了濁點萃取-間接光度法測定VC的新方法，并用于飲料樣品分析。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

VC標準溶液：100 mg/L；Fe（Ⅲ）-Phen溶液：準確稱取十二水合硫酸鐵銨1.446 g，溶于20 mL 1 mol/L H2SO4中，準確稱取鄰菲啰啉1.982 g，溶于20 mL 95%乙醇中，將上述2種溶液混合，用水稀釋至250 mL；TritonX-100溶液：5%（m/m）；HAc-NaAc緩沖溶液pH=5.5，試劑均為分析純，上海國藥；市售飲料。

1.2 儀器

TU-1901紫外可見分光光度計：普析通用；SYC-15恒溫水浴：南京桑力電子設備廠；800型離心機：江蘇金壇富華電器有限公司。

1.3 實驗方法

于10 mL具塞離心管中加入0.5 mL VC標準溶液，2.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，1.8 mL TritonX-100溶液，0.3 mL Fe（Ⅲ）-Phen溶液，加水至10 mL刻度，搖勻后靜置3 min使VC和Fe（Ⅲ）-Phen溶液充分反應。

建筑結構優化設計是一項非常復雜的環節，需要建筑設計過程的每個環節都互相協調。對于房屋結構設計，房屋的外觀和質量需要得到有效保證。而建筑結構設計主要是指對房屋結構進行優化設計，建筑結構設計和房屋內部結構要互相結合和協調，盡量減少施工損耗和施工成本，從而保證房屋結構的設計質量和外觀，實現其實用價值，并使房屋的建筑結構設計得到科學合理的優化。

將離心管置于85℃恒溫水浴中，加熱6 min趁熱取出。立即以3 000 r/min轉速離心3 min，溶液分層為紅色的表面活性劑富集相（下層）和水相（上層）。小心傾去上層水相，加水至5 mL刻度線，搖勻。以試劑空白為參比，使用1 cm比色皿，在508 nm處測定顯色液吸光度。

2結果與分析

2.1 測定波長的選擇

按照1.3實驗方法，測定濁點萃取顯色富集液在440 nm～620 nm范圍內的吸收曲線，如圖1所示。選擇最大吸收波長508 nm為測定波長。

圖1 吸收曲線Fig．1Absorption spectra

2.2 緩沖溶液的用量

按照1.3實驗方法，考查了pH=5.5的緩沖溶液用量對測定的影響。結果表明，緩沖溶液用量在2.0 mL～2.5 mL之間，吸光度值高且穩定。實驗選擇加入HAc-NaAc緩沖溶液2.0 mL。

2.3 試劑用量的優化

固定VC的濃度，分別加入不同量的TritonX-100溶液和Fe（Ⅲ）-Phen溶液，按實驗方法考察其測定結果。結果表明：TritonX-100溶液用量在1.8 mL時，吸光度最大，繼續增加用量則吸光度降低；Fe（Ⅲ）-Phen溶液用量在0.3 mL時吸光度最大，繼續增加用量則吸光度值出現平臺。實驗選擇加入TritonX-100溶液1.8 mL；Fe（Ⅲ）-Phen溶液0.3 mL。

2.4 平衡溫度和時間的優化

實驗了不同溫度和時間對濁點萃取的影響。在60℃～95℃的溫度范圍內，溫度低于71℃，無濁點分相現象，當溫度達到85℃時，溶液吸光度達到最大；高于85℃后，吸光度開始下降。在85℃水浴中分別平衡3 min～12 min，當平衡時間為6 min時，吸光度值最大，增加時間，吸光度無明顯變化。實驗選擇在85℃平衡6 min。

2.5 干擾物質的影響

考察了飲料中常見干擾物質對100 mg/L VC測定的干擾，相對誤差在±5%以內時，以下物質（倍數）不干擾測定：Na+（100）、K+（100）、Ca2+（100）、Mg2+（100）、Ac-（100），Cl-（100），SO42-（100）、PO43-（100）、淀粉（100）、蔗糖（100）、Fe2+（50）、檸檬酸（50）、咖啡因（20）、賴氨酸（20）、（20）、羧甲基纖維素鈉（20）、牛磺酸（10）（10）。有色飲料中添加的食用色素不干擾測定。可見本法對VC的測定有較好的選擇性。

2.6 標準工作曲線

按照1.3實驗方法，在離心管中準確加入不同體積的VC標準溶液進行濁點萃取測定，考察方法的線性。結果表明，在4.0 mg/L～140 mg/L范圍內，VC濃度與A值呈良好的線性關系，線性回歸方程為A=0.0075+ 0.012 7 C（mg/L），r=0.999 5。連續平行測定空白溶液11次，以測定結果標準偏差的3倍除以斜率計算方法檢出限為2.24 mg/L。

2.7 樣品分析

取市售不同品牌的飲料樣品按實驗方法進行測定，同時做加標回收實驗，并與碘量滴定法測定結果比較，結果見表1。

表1 樣品分析結果（n=5）Table 1Analytical results of sample（n=5）

3結論

濁點萃取是一種簡便、環保的分離富集方法，非離子表面活性劑TritonX-100具有良好的濁點萃取性能。利用濁點萃取-間接光度法測定飲料中VC，可排除飲料樣品中食用色素對光度法測定的干擾，并能對樣品中的VC進行間接的富集，本法用于測定市售飲料樣品中的VC獲得了滿意結果，在食品分析領域有一定應用價值。

［1］Moreno P，Salvado V.Determination of eight water-and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmaceutical formulations by high-performance liquid chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2000，870（1）：207-215

［2］中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.2部，北京：化學工業出版社，2005：669-670

［3］楚紅英.紫外分光光度法測定食用菌中維生素C［J］.理化檢驗：化學分冊，2014，50（2）：255-257

［4］李占清，魏海英.分光光度法測定新鮮蔬菜中維生素C的含量［J］.中國無機分析化學，2014，4（3）：79-81

［5］王朝霞，陳美鳳，馬心英.銀-氨基磺酸膜電極對食品中維生素C的測定［J］.食品科技，2012，37（4）：277-280

［6］鄧培紅，張軍，黎拒難.多壁碳納米管修飾碳黑微電極同時測定多巴胺和抗壞血酸［J］.分析試驗室，2009，28（1）：92-95

［7］吳海燕.微波提取高效液相色譜法測定花菜中的VC［J］.食品研究與開發，2014，35（23）：87-89

［8］宋吉英，李軍德.濁點萃取技術的應用［J］.化學世界，2008，49（5）：311-314

Determination of Vitamin C in Drink by Indirec Spectrophotometric with Cloud Point Extraction

ZHU Sheng-ping，DING Zong-qing
（Department of Biology，Chemistry and Environmental Engineering，Yunyang Teachers College，Shiyan 442000，Hubei，China）

A new method for the determination of vitamin C by indirec spectrophotometric after cloud point extraction was proposed.The effects of experimental conditions such as pH value，reagent dosage，equilibration temperature and time on cloud point extraction were discussed.a good linear relationship was obtained in the range of 4.0 mg/L-140 mg/L of the vitamin C（r=0.999 5），the detection limits of 2.24 mg/L.The recoveries fell in the range from 97.6%to 102.2%and the relative standard deviations were between 1.7%and 2.4%.This method has been applied for the determination of VCin drink samples.

cloud point extraction；spectrophotometry；VC；separation and enrichment；drink

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.029

2015-03-05

湖北省教育廳科學技術研究項目（Q20126002）；鄖陽師范高等專科學校科研項目（2012A01）

朱圣平（1969—），男（漢），副教授，本科，主要從事食品分析研究。