母牛亞臨床型乳房炎的診斷

李湘雯

乳房炎迄今仍是影響乳業(yè)健康發(fā)展的首要問題。亞臨床型由于乳房內(nèi)沒有明顯的發(fā)炎性病變，而只能靠實(shí)驗(yàn)室檢查確診。可采用許多方法檢測亞臨床型乳房炎，這些方法主要包括檢測體細(xì)胞數(shù)或乳汁中的感染菌。乳汁的變化包括細(xì)胞數(shù)量的變化和生化特性的變化。大多數(shù)方法是基于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測的，也可采用加利福尼亞乳房炎檢測法（CMT）和電傳導(dǎo)檢測法。檢測方法分為以下三類，既能單獨(dú)應(yīng)用，又能聯(lián)合應(yīng)用。

1細(xì)胞檢查

健康、非感染的乳腺分泌的乳汁中含有一些體細(xì)胞，即巨噬細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，通常這些體細(xì)胞的數(shù)量小于5×104個/mL。發(fā)生乳房炎時，體細(xì)胞數(shù)量增加，主要是嗜中性白細(xì)胞浸潤的結(jié)果。亞臨床感染時，體細(xì)胞數(shù)超過2×105個/mL。因發(fā)病的動力學(xué)特性不同，體細(xì)胞的數(shù)量也不相同，有時會低于2×105個/mL。

臨床型乳房炎發(fā)生時體細(xì)胞數(shù)上升，通常超過5×106個/mL。用顯微鏡或電子計(jì)數(shù)法對體細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。也可采用其他方法，如加利福尼亞檢測法（CMT）或氫氧化鈉法對體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行簡單估測，即基于細(xì)胞核苷酸與反應(yīng)劑（加利福尼亞檢測或氫氧化鈉法）之間的凝膠反應(yīng)進(jìn)行檢測。該反應(yīng)結(jié)果分為0～4，共5個等級，為3級和4級時乳房感染的可能性高。這種計(jì)數(shù)方法的優(yōu)點(diǎn)是簡便、價廉、可重復(fù)和可對單個乳區(qū)進(jìn)行檢測。大部分國家采用奶桶中的奶來檢測乳中體細(xì)胞數(shù)，并以此檢測牛群乳房炎的發(fā)生情況。另外，在大多數(shù)國家對個體牛的體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測，即進(jìn)行間歇性或有規(guī)律性地檢測。乳中體細(xì)胞數(shù)持續(xù)升高時，牛群中亞臨床型感染的發(fā)病率高。牛群的體細(xì)胞數(shù)小于2×105個/mL時，與亞臨床型乳房炎相關(guān)的經(jīng)濟(jì)損失就小，但是這種牛群仍會出現(xiàn)臨床型乳房炎的高發(fā)率，從而使牛場遭受明顯的經(jīng)濟(jì)損失。

2細(xì)菌檢查

擠奶工在收集奶樣時，乳頭管有少量細(xì)菌生長，但健康乳腺中分泌的乳汁是無菌的。所以無菌采集乳樣進(jìn)行細(xì)菌檢測是鑒定乳房感染的關(guān)鍵。乳腺感染時每毫升乳中的細(xì)菌數(shù)變動很大。非常仔細(xì)地采集乳樣，沒有受到污染時，即使檢到少量的細(xì)菌，也認(rèn)為有診斷意義。細(xì)菌學(xué)檢查的優(yōu)點(diǎn)是只需判斷奶樣是陽性還是陰性，但其他檢測方法需要設(shè)定界限值。不同奶牛之間和牛群之間，該界限值不同。

無菌技術(shù)采集適當(dāng)?shù)娜闃訖z查細(xì)菌。檢查前可對乳樣進(jìn)行冷凍（-20℃），但冷凍會減少致病菌的數(shù)量（特別是革蘭氏陰性菌），也不能進(jìn)行細(xì)胞檢查和某些生化檢測。引發(fā)牛乳房炎的大部分致病菌通常能夠在血液瓊脂培養(yǎng)基上的有氧條件下生長。一些比較少見的致病菌，如厭氧菌（支原體屬和鉤端螺旋體屬）需要更加專業(yè)的培養(yǎng)技術(shù)，不適合于一般實(shí)驗(yàn)室的操作。在血液瓊脂中加入0.1%的七葉苷有助于從其他鏈球菌中分離乳房鏈球菌。即在血液瓊脂平板的表面添加一定量的乳汁，37℃條件下培養(yǎng)24～48小時，奶樣分散成乳滴樣。細(xì)胞學(xué)檢查的優(yōu)點(diǎn)是能對致病菌進(jìn)行鑒定，并可進(jìn)行抗菌藥的藥敏試驗(yàn)。有些致病菌，如金黃色葡萄球菌呈間歇性地從乳汁中排出，且其數(shù)量少。在這種情況下，因稀釋放應(yīng)，不能分離到病原菌，產(chǎn)生陰性結(jié)果，所以需要重復(fù)采樣，以確定所得結(jié)果為陰性。細(xì)菌學(xué)檢查的不足之處是費(fèi)用高，操作復(fù)雜且耗時長。

3生化和其他檢查

乳汁中離子組成的明顯變化是Na+和Cl-含量升高，K+含量下降。可直接對各種離子進(jìn)行檢測，但通常用導(dǎo)電性的增加來檢測離子組分的凈度化。現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)性和農(nóng)場性的檢測儀表。有些國家設(shè)有市售的電極擠奶器，以便在擠奶時檢測乳汁的導(dǎo)電率。其他各種因素，如發(fā)情期也會影響乳汁的導(dǎo)電性。大部分導(dǎo)電儀只能測定所有乳區(qū)的混合乳，因而具有稀釋效應(yīng)，使檢測值不夠準(zhǔn)確。然而，就大部分泌乳參數(shù)來說，不同牛群間，健康乳區(qū)和感染乳區(qū)的乳導(dǎo)電率檢測值有重疊性，且各有不同，從而使診斷的界限值不夠準(zhǔn)確。乳糖濃度的降低比較常見，可用于乳房炎的診斷，但乳樣間的差別很小。

乳汁中酶的含量也發(fā)生變化。有些酶含量的變化與體細(xì)胞數(shù)的增加有關(guān)（如過氧化氫酶），其他酶的變化與分泌型細(xì)胞的損傷相關(guān)（如部分N-乙酰葡糖胺糖苷酶增加），或與通透性增加相關(guān)（纖溶酶）。現(xiàn)已廣泛地對N-乙酰葡糖胺糖苷酶進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)此含量與體細(xì)胞數(shù)和感染率之間有高度的相關(guān)性，可作為乳房炎檢測的簡便手段。

血清成分漏入乳腺時可將其作為炎癥檢測的指標(biāo)。最常研究的是抗胰蛋白酶和牛血清白蛋白。現(xiàn)已建立了抗胰蛋白酶的自動檢測方法，這種方法比牛血清白蛋白的檢測更加敏感。