某地區(qū)乙型肝炎病毒基因BCP區(qū)A1762T/G1764A雙變異和前C區(qū)G1896A突變分析及臨床意義

黃遠虹　陳鴻恩

（贛州市市立醫(yī)院，江西 贛州 341000）

某地區(qū)乙型肝炎病毒基因BCP區(qū)A1762T/G1764A雙變異和前C區(qū)G1896A突變分析及臨床意義

黃遠虹陳鴻恩

（贛州市市立醫(yī)院，江西 贛州 341000）

目的 探討江西省贛州地區(qū)乙型肝炎病毒感染者血清中HBV基因BCP區(qū)雙變異（A1762T/G1764A）和前C區(qū)G1896A突變的情況及其臨床意義。方法 收集116例本土感染者一般資料及血清，運用速率法檢測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量；ELISA檢測HBeAg；熒光定量PCR檢測HBV DNA拷貝數(shù)；采用巢式PCR擴增及測序方法檢測HBV C啟動子A1762T/G1764A雙變異和前C區(qū)G1896A突變情況并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 ①肝細胞癌患者在年齡、HBeAg陰性率、ALT和AST水平方面均高于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01），而HBV DNA拷貝數(shù)則低于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01）；②肝細胞癌患者的A1762T/G1764A、G1896A變異率及聯(lián)合變異率均高于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01）。③HBeAg陰性患者A1762T/G1764A、G1896A變異率及聯(lián)合變異率均高于HBeAg陽性患者（P＜0.05）。結(jié)論 乙型肝炎患者常規(guī)的相關(guān)指標檢測對病情的評估是不全面的，在條件許可情況下，對HBV基因區(qū)的BCP雙變異（A1762T/ G1764A）和前C區(qū)G1896A的常見突變位點進行檢測，再結(jié)合其他的臨床資料進行綜合分析，可做出更為正確的診斷。

乙型肝炎病毒；BCP雙變異；G1896A；測序

乙型肝炎病毒感染是一個全球性的公共衛(wèi)生問題，全世界約有20億人曾感染過HBV，其中4億為慢性感染，有可能發(fā)展成為活動性肝炎、肝硬化、肝細胞癌［1-4］。HBV變異的研究在近年已有較大的突破，目前研究的焦點多集中在X基因BCP區(qū)和前C基因區(qū)。本試驗對116例HBV感染者血清X基因、前C基因擴增后進行測序，對其中的BCP雙變異（A1762T/G1764A）和G1896A點突變進行統(tǒng)計分析，并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料：收集2012年1月至2014年12月本院門診及住院HBV DNA陽性患者116例，其中慢性乙型肝炎65例、乙型肝炎相關(guān)性肝細胞癌51例；其中男性85例，女性31例，年齡17～74歲，平均年齡48.6歲，均土生土長于贛州市。慢性乙型肝炎（CHC）的臨床診斷均按照2010年我國《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標準，HCC診斷標準參照2010年美國肝病年會推薦的HCC指南中的診斷標準。

1.2方法

1.2.1清晨抽取受試者靜脈血3 mL，2000 rpm離心10 min，取上清于-70 ℃凍存至檢測。

1.2.2HBeAg采用ELISA法，PCR產(chǎn)物送至上海申友生物有限公司進行測序，測序用引物為5’端引物。

1.3統(tǒng)計學處理：采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料應用方差分析或χ2檢驗，均數(shù)比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1基本情況：根據(jù)診斷，將116例患者分為CHB組和HCC組。見表1所示，HCC組患者在年齡、HBeAg陰性率、ALT水平和AST水平方面均高于CHB組（P＜0.01）；而HBV DNA水平低于CHB組（P＜0.01）；兩組患者性別比例無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1　研究對象一般資料分析

2.2HBV BCP雙變異（A1762T/G1764A）和前C區(qū)G1896A突變情況。統(tǒng)計分析測序結(jié)果：HCC組患者A1762T/G1764A變異檢出率為58.82%，G1896A突變?yōu)?5.49%，聯(lián)合突變率11.76%，均遠高于CHC組（P＜0.01）；而HCC組無突變率則遠低于CHC組（P＜0.01），見表2。

表2　CHB組和HCC組HBV A1762T/G1764A雙突變和G1896A突變情況

2.3HBV BCP區(qū)雙變異和前C區(qū)G1896A突變與HBeAg的關(guān)系：根據(jù)HBeAg的攜帶情況，將116例研究對象分為HBeAg陰性組和HBeAg陽性組。HBeAg陰性組的A1762T/G1764A雙變異、G1896A突變和二者聯(lián)合變異均高于HBeAg陽性組（P＜0.05）。

3　討　論

HCC是常見的腫瘤之一，病死率居惡性腫瘤第3位，全球每年新發(fā)病例62萬，每年死亡人數(shù)接近100萬。本研究對116例本地區(qū)HBV感染者的血清標本進行實驗并統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)HCC組在年齡、HBeAg陰性率、ALT水平和AST水平均高于CHB組，而HBV DNA復制程度低于CHB組。在慢性HBV感染中，HBeAg是臨床表達病毒復制較實用的血清標志物，傳統(tǒng)認為HBeAg陰轉(zhuǎn)常標志病變活動性的緩解，但上述研究結(jié)果表明，HBeAg陰性未必表示病毒復制終止，病情也可能正在向惡化方向發(fā)展，尤其要引起臨床的注意。

本研究中，贛州地區(qū)HBV感染者A1762T/G1764A 雙變異率為48.3%，且HCC組突變率明顯高于CHB組，提示 A1762T/A1764G雙變異與肝癌的形成相關(guān)。BCP位于基因組nt1742～1849位核苷酸，它可啟動前C區(qū)mRNA的轉(zhuǎn)錄。前C基因組mRNA編碼HBeAg，C基因組mRNA編碼核心蛋白和DNA聚合酶，因此BCP是HBV復制的關(guān)鍵性調(diào)控原件，對HBV的復制和轉(zhuǎn)錄起著重要的調(diào)節(jié)作用。發(fā)生在前C基因區(qū)的變異可能會終止或減低HBeAg表達，進而增強HBV DNA的復制或逃避宿主免疫應答。前C區(qū)變異可使病毒蛋白的產(chǎn)生減少，使病毒能夠逃避免疫監(jiān)視，使機體的免疫功能紊亂，最終導致癌變。

本研究無論前C區(qū)G1896A突變還是BCP區(qū)A1762TIG1764A雙變異的檢出率，HBeAg陰性患者均高于HBeAg陽性患者。此兩種變異都能影響HBeAg的產(chǎn)生，但其發(fā)生機制不同。BCP區(qū)是富含AT區(qū)域，是肝臟富含因子的獨立結(jié)合點，變異的BCP可改變這種結(jié)合，降低前C區(qū)的RNA轉(zhuǎn)錄，最終使HBeAg表達減少，再者G1896A突變使病毒不能編碼HBeAg，肝細胞表面靶抗原HBeAg消失，使病毒可能發(fā)生免疫逃逸，使得HBV感染得以長期持續(xù)。

綜上所述，乙型病毒性肝炎患者病情輕重是由宿主和病毒兩方面所決定，取決于本身的遺傳素質(zhì)，也與病毒的因素密切相關(guān)，僅憑傳統(tǒng)的血清學實驗判斷病情的進展明顯不足，條件允許的情況下，對HBV感染者的HBV BCP區(qū)A1762TIG1764A雙變異位點及前C區(qū)G1896A突變的常見位點進行檢測，有利于對患者病情的可能發(fā)展進行預測并采取有效的防治措施，對患者長期觀察，定期復查，盡量延緩病變的發(fā)展。由于HBV基因型存在地域性差異，不同地區(qū)統(tǒng)計各自地區(qū)的基因類型，可更好地指導HBV病毒感染的地區(qū)性防治。

［1］譚炳芹，王昌源，杜磊，等.乙型肝炎病毒X基因突變與疾病進展的相關(guān)性［J］.中華傳染病雜志，2011，29（6）:366-368.

［2］中華醫(yī)學會肝病學分會肝癌學組，中華醫(yī)學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）［J］.中國醫(yī)學前沿雜志，2011，3（1）:66-78.

［3］駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:1-244.

［4］劉悅暉，丁靜娟，張權(quán).慢性乙型肝炎病毒感染者病毒前C區(qū)和基本核心啟動子區(qū)變異檢測及意義［J］.中華消化雜志，2005，25（9）:526-529.

R512.6+2

B

1671-8194（2015）17-0166-02