一株高效四環(huán)素降解菌的分離鑒定及其降解性能研究

張欣陽 蔡婷靜 許旭萍

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州 350108）

一株高效四環(huán)素降解菌的分離鑒定及其降解性能研究

張欣陽 蔡婷靜 許旭萍

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州 350108）

四環(huán)素類抗生素在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中廣泛使用，但其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，難降解，容易在水環(huán)境中積蓄，進(jìn)而對(duì)生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響，許多國家已將抗生素污染列為重要的環(huán)境問題展開了相關(guān)的基礎(chǔ)研究。近年來利用微生物降解環(huán)境中的抗生素污染物成為研究熱點(diǎn)。采用選擇性培養(yǎng)基，從某制藥廠排污口的水樣中分離篩選到1株具有較高降解四環(huán)素能力的菌株4002，經(jīng)形態(tài)觀察、生理生化測定和16S rDNA序列分析，將該菌初步鑒定為Advenella sp.。從pH、溶氧量、無機(jī)鹽等方面對(duì)菌株降解四環(huán)素的性能進(jìn)行研究。結(jié)果表明，該菌株降解四環(huán)素的適宜pH為7.0，在有氧條件下，30℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)6 d，可使初始濃度為50 μg/mL四環(huán)素降解率達(dá)57.8%。無機(jī)鹽對(duì)降解率有顯著影響，添加FeSO4和MnSO4對(duì)四環(huán)素降解有促進(jìn)作用，MgSO4影響不大，CaSO4則有抑制作用。在培養(yǎng)至第8天時(shí)，培養(yǎng)液經(jīng)HPLC檢測顯示6.022 min處出現(xiàn)新的吸收峰，推測為降解產(chǎn)物。

四環(huán)素降解菌；篩選；鑒定；降解性能

20世紀(jì)40年代以來，抗生素作為藥物治療動(dòng)物疾病的同時(shí)，也被用于飼料的添加劑以促進(jìn)動(dòng)物的生長［1］。研究表明四環(huán)素類抗生素進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后不能被完全吸收，大約有75%以原型或母體化合物的形式排出體外，這些抗生素作為環(huán)境外源性化學(xué)物對(duì)生態(tài)和環(huán)境生物將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。例如，導(dǎo)致人類產(chǎn)生抗藥性等，并最終對(duì)人類的生存和健康造成危害［2，3］。四環(huán)素類抗生素由于其成本低廉、使用方便等原因在世界各國得到大量的使用。我國是世界上四環(huán)素類抗生素的生產(chǎn)、使用和銷售大國，2008年四環(huán)素類藥物僅出口量就達(dá)1.34×l07kg［4］。近年來，隨著對(duì)生態(tài)環(huán)境的日益關(guān)注，有關(guān)四環(huán)素類抗生素的生態(tài)毒性、殘留污染的問題越來越引起人們的重視。抗生素進(jìn)入環(huán)境中會(huì)發(fā)生一系列降解反應(yīng)，主要包括生物降解和非生物降解［5］。其中，非生物降解過程包括光降解、氧化降解、水解等；生物降解過程包括植物降解和微生物降解兩種方式［6］。與其他處理方法相比，利用微生物處理抗生素殘留物，條件簡單、容易控制、成本較低、專一性較強(qiáng)、不會(huì)引起二次污染，是目前最為經(jīng)濟(jì)有效的方法，主要包括好氧處理、厭氧處理、復(fù)合菌系處理和固定化微生物處理等［7］。目前國外多為物理化學(xué)方法［8-11］、復(fù)合生物技術(shù)［12，13］及堆肥工藝［14，15］等，鮮有報(bào)道能夠降解四環(huán)素的單一微生物菌株；國內(nèi)已報(bào)道少許四環(huán)素降解菌，如許曉玲［16］篩選得到的缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta）和人蒼白桿菌（Ochrobactrum anthropi）等，但總體而言并不多見。

本試驗(yàn)從抗生素制藥廠排污口水樣中分離篩選出1株對(duì)四環(huán)素具有一定降解能力的細(xì)菌，對(duì)其進(jìn)行分類鑒定，研究影響該菌株降解四環(huán)素的理化因素，并對(duì)其降解四環(huán)素的產(chǎn)物進(jìn)行初步分析，為該菌應(yīng)用于處理四環(huán)素環(huán)境污染奠定基礎(chǔ)和提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品：本實(shí)驗(yàn)樣品采自福州某制藥廠排污口河道內(nèi)的污水和污泥。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基（g/L）： 牛肉膏3，蛋白胨10，NaCl 5，pH7.0-7.4。該培養(yǎng)基用于菌種活化。選擇培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中按照試驗(yàn)要求添加不同濃度的四環(huán)素。固體培養(yǎng)基加入15-20 g/L瓊脂。

藥品：四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品（C22H24N2O8·HCl），購于北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 四環(huán)素降解菌的富集、分離純化及篩選 稱取1 g污泥或吸取1 mL污水樣品，加到裝有99 mL無菌水的250 mL三角瓶中，充分振蕩后靜置片刻，取1 mL上清液加到含50 μg/mL四環(huán)素的選擇培養(yǎng)基中，置于30℃，150 r/min恒溫?fù)u床中培養(yǎng)至培養(yǎng)液出現(xiàn)明顯的渾濁（約3 d），吸取此培養(yǎng)液1 mL，再接種到四環(huán)素濃度為100 μg/mL的選擇培養(yǎng)基中，于相同條件下培養(yǎng)3 d。以此類推，進(jìn)行富集，每次移接時(shí)，逐步提高選擇培養(yǎng)基中的四環(huán)素濃度，直至350 μg/mL。富集結(jié)束時(shí)，取1 mL培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，取2-3個(gè)適宜稀釋度的菌液，采用平板涂布法進(jìn)行分離，挑選菌落形態(tài)外觀不同的單菌落劃線進(jìn)一步分離純化后，挑取單菌落接種至斜面，編號(hào)保存。

將分離獲得的各菌株分別接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)后制成種子液。各取1 mL種子液接種至四環(huán)素濃度為50 μg/mL的99 mL選擇培養(yǎng)基內(nèi)，30℃，150 r/min培養(yǎng)3 d后，采用藥敏試驗(yàn)法測定培養(yǎng)液中四環(huán)素殘留量。以金黃色葡萄球菌為指示菌，測定抑菌圈直徑。抑菌圈越小的菌株，即表示其對(duì)四環(huán)素的降解能力越強(qiáng)。選擇降解力較高的菌株進(jìn)行復(fù)篩。

1.2.2 四環(huán)素降解菌的分類鑒定

1.2.2.1 降解菌株培養(yǎng)特征及生理生化鑒定 將降解菌接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基平板上，30℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察菌落形態(tài)，并進(jìn)行革蘭氏染色后用普通光學(xué)顯微鏡觀察菌體形態(tài)。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》［17］和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》［18｝進(jìn)行生理生化鑒定。

1.2.2.2 降解菌株16S rDNA序列分析 提取細(xì)菌基因組DNA，正向引物為27f：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，反向引物為1492r：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR擴(kuò)增在DL9700擴(kuò)增儀上進(jìn)行，擴(kuò)增體系為典型擴(kuò)增體系。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5 min后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸100 s，循環(huán)結(jié)束后72℃延伸10 min。對(duì)PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行純化，16S rDNA的測序工作由北京鼎國生物技術(shù)有限公司完成。將測得菌株的16S rDNA序列在NCBI中進(jìn)行BLAST研究其同源性，選取同源性相近的細(xì)菌，構(gòu)建進(jìn)化樹。

1.2.3 四環(huán)素降解菌的降解性能測定

1.2.3.1 降解菌降解四環(huán)素的曲線 將降解菌接種至基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3 d制成種子液。種子液以1%接種量接種到含四環(huán)素為50 μg/mL的選擇培養(yǎng)基中，30℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)，每隔24 h取樣測定培養(yǎng)液中四環(huán)素殘留量，計(jì)算降解率，繪制降解曲線。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，結(jié)果取其平均值。并以相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)的不接菌培養(yǎng)基作為對(duì)照。

1.2.3.2 pH對(duì)降解菌降解四環(huán)素的影響 分別配制pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0含四環(huán)素50 μg/mL的選擇培養(yǎng)基，接種1%的降解菌種子液，30℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)6 d，測定培養(yǎng)液中四環(huán)素的殘留量，計(jì)算四環(huán)素降解率。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，結(jié)果取其平均值。

1.2.3.3 溶氧量對(duì)降解菌降解四環(huán)素的影響 將降解菌種子液以1%的接種量接種到含四環(huán)素50 μg/mL的選擇培養(yǎng)基中，分別放置于30℃有氧培養(yǎng)（150 r/min 振蕩培養(yǎng)）、缺氧培養(yǎng)（靜置培養(yǎng)，瓶口包有無菌濾膜）、厭氧培養(yǎng)（靜置培養(yǎng)，瓶口塞有厭氧橡膠塞），培養(yǎng)6 d后，取樣測定培養(yǎng)液中四環(huán)素的殘留量，計(jì)算四環(huán)素降解率。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，結(jié)果取其平均值。

1.2.3.4 無機(jī)鹽對(duì)降解菌降解四環(huán)素的影響 在選擇培養(yǎng)基中分別添加0.03%的CaSO4，MgSO4，F(xiàn)eSO4，MnSO4等4種無機(jī)鹽。接種1%的降解菌種子液，30℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)6 d。測定培養(yǎng)液中四環(huán)素的殘留量，計(jì)算四環(huán)素降解率。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，結(jié)果取其平均值。

1.2.4 四環(huán)素測定方法

1.2.4.1 藥敏法 試驗(yàn)步驟見參考文獻(xiàn)［19］，以金黃色葡萄球菌為指示菌，測定培養(yǎng)液的抑菌圈大小，并根據(jù)四環(huán)素含量標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成四環(huán)素濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：用無菌水配制濃度分別為10、20、30、40、50、60、70及80 μg/mL等一系列濃度梯度的四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定不同濃度四環(huán)素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈大小，以四環(huán)素濃度為橫坐標(biāo)，抑菌圈直徑為縱坐標(biāo)，制作四環(huán)素含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于換算培養(yǎng)液中四環(huán)素的濃度。

四環(huán)素降解率（%）=（初始濃度-剩余濃度）/初始濃度×100%

1.2.4.2 高效液相色譜法（HPLC） 用HPLC分析不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)液中四環(huán)素含量及其產(chǎn)物。HPLC測定方法參照文獻(xiàn)［20］并稍作改進(jìn)。色譜條件為Waters Acquity HPLC色譜儀；Acquity HPLCTM，C18，1.7 μm，2.1 mm×50 mm色譜柱；流動(dòng)相：草酸（0.01 mol/L）∶乙腈∶甲醇=70∶25∶5（體積比）；流速：0.2 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：289 nm。進(jìn)樣量2 μL。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

采用藥敏試驗(yàn)法測定不同四環(huán)素濃度對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈大小，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。

圖1 四環(huán)素濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 四環(huán)素降解菌的篩選

經(jīng)過初篩和復(fù)篩得到4株降解四環(huán)素能力較強(qiáng)的菌株，分別編號(hào)為6、12、4001、4002。對(duì)這4株菌再次復(fù)篩，最終確定4002具有高效的四環(huán)素降解能力。

2.3 四環(huán)素降解菌4002的分類鑒定

2.3.1 形態(tài)特征及生理生化鑒定 菌株4002在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）平板上的菌落形態(tài)見圖2。其菌落呈乳白色，表面及邊緣光滑濕潤，圓形，直徑在1- 2 mm之間。菌體呈短桿狀，大小為（0.41-1.02）μm×（0.41-1.53）μm，無芽孢，無鞭毛，為革蘭氏陰性菌，見圖3。其生理生化鑒定結(jié)果，見表1。

圖2 菌株4002菌落特征

圖3 菌株4002菌體形態(tài)（1000×）

表1 菌株4002的生理生化特征

2.3.2 四環(huán)素降解菌4002的16S rDNA序列分析

PCR擴(kuò)增后的16S rDNA大小為1 432 kb，其在GenBank中申請(qǐng)獲得的序列號(hào)為KM191133。在NCBI中進(jìn)行BLAST比對(duì)，研究其同源性，選取同源性相近的細(xì)菌，構(gòu)建進(jìn)化樹。

用MEGA4軟件繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖4）可知，菌株4002與Advenella kashmirensis，strain 445C（AJ-864472）的進(jìn)化關(guān)系最近。經(jīng)過BLAST比對(duì)，4002與 Advenella kashmirensis，strain 445C的 16S rDNA序列相似度為99%。將該菌株初步鑒定為Advenella sp.。該菌株應(yīng)用于四環(huán)素降解目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，說明這是一種新的四環(huán)素降解菌菌種資源。

圖4 降解菌4002系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.4 四環(huán)素降解菌4002的降解性能

2.4.1 降解菌4002降解四環(huán)素的曲線 由圖5可知，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，培養(yǎng)液中四環(huán)素的殘留量逐漸減少。接有菌株4002的試驗(yàn)組顯示，前5 d四環(huán)素的殘留量下降較慢，5 d后迅速下降，在第6天達(dá)到較低值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和抑菌圈直徑計(jì)算可知降解率為53.0%，高于不接菌空白對(duì)照組（34.7%）。其后繼續(xù)培養(yǎng)降解率提高較小，所以后續(xù)試驗(yàn)確定降解周期為6 d。

圖5 降解菌4002降解四環(huán)素的曲線（抑菌圈法）

2.4.2 pH值對(duì)降解菌4002降解四環(huán)素的影響 將培養(yǎng)基分別調(diào)整為不同的pH，接種后進(jìn)行培養(yǎng)，研究pH對(duì)菌株4002降解四環(huán)素的影響，結(jié)果見圖6。當(dāng)pH為7.0時(shí)，抑菌圈最小，四環(huán)素的降解率為57.8%。

圖6 pH值對(duì)降解菌4002降解四環(huán)素的影響

2.4.3 溶氧量對(duì)降解菌降解四環(huán)素的影響 由圖7可知，在有氧條件下，四環(huán)素的殘留量最少，抑菌圈最小，降解率為57.8%；而缺氧培養(yǎng)與厭氧培養(yǎng)，抑菌圈基本一致，但明顯比有氧條件下的抑菌圈大。說明好氧條件更有利于菌株4002對(duì)四環(huán)素的降解。

2.4.4 無機(jī)鹽對(duì)降解菌4002降解四環(huán)素的影響 在選擇培養(yǎng)基中添加 CaSO4、FeSO4、MgSO4、MnSO44種不同的無機(jī)鹽進(jìn)行四環(huán)素降解試驗(yàn)，并以不添加無機(jī)鹽的選擇培養(yǎng)基作為對(duì)照，結(jié)果見圖8。在選擇培養(yǎng)基中添加FeSO4對(duì)菌株4002降解四環(huán)素有顯著地促進(jìn)作用，培養(yǎng)6 d時(shí)四環(huán)素的降解率達(dá)到100%，比沒有添加的對(duì)照組提高了44.3%，其次是MnSO4，降解率為65.4%，比對(duì)照提高了9.7%。添加MgSO4的降解率為57.6%與對(duì)照組差別不大，而CaSO4的加入對(duì)四環(huán)素降解一定的抑制作用，降解率僅為34.3%。

圖7 溶氧量對(duì)降解菌降解四環(huán)素的影響

圖8 無機(jī)鹽對(duì)四環(huán)素降解的影響

2.5 HPLC 檢測四環(huán)素

用超純水配置四環(huán)素水溶液標(biāo)準(zhǔn)品，HPLC檢測出峰時(shí)間約為4.69 min。用HPLC測定不同培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)液中剩余的四環(huán)素濃度及吸收峰變化，四環(huán)素所對(duì)應(yīng)的峰面積減小說明殘留量下降。結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，四環(huán)素的特征峰的峰面積逐漸減少（圖9-圖13）。在接種后培養(yǎng)的前5 d，培養(yǎng)液中四環(huán)素的峰面積減少較慢（圖9，圖10）；且在培養(yǎng)7 d內(nèi)未檢測到產(chǎn)物峰（圖9-圖12）。但培養(yǎng)8 d時(shí)，四環(huán)素的峰面積明顯下降，且在6.022 min時(shí)出現(xiàn)新的未知物質(zhì)吸收峰（圖13雙箭頭所示），可以看出在4002菌株的作用下四環(huán)素發(fā)生了降解，產(chǎn)生新的降解產(chǎn)物（其余吸收峰為培養(yǎng)基中物質(zhì)的吸收峰）。

圖9 第3天培養(yǎng)液中四環(huán)素的HPLC峰面積

圖10 第5天培養(yǎng)液中四環(huán)素的HPLC峰面積

圖11 第6天培養(yǎng)液中四環(huán)素的HPLC峰面積

圖12 第7天培養(yǎng)液中四環(huán)素的HPLC峰面積

圖13 第8天培養(yǎng)液中四環(huán)素的HPLC峰面積

3 討論

已有研究表明四環(huán)素在過酸或過堿的環(huán)境下都不穩(wěn)定，在過酸環(huán)境下容易發(fā)生脫水反應(yīng)和差向異構(gòu)化，過堿環(huán)境下易形成無效的內(nèi)酯型異構(gòu)體，而在中性環(huán)境下較為穩(wěn)定［22］。大多數(shù)自然水體pH接近中性，不利于四環(huán)素的自然降解，本試驗(yàn)菌株降解四環(huán)素適宜的pH為7.0，在四環(huán)素污染水體中則可起到有效的降解作用，有利于水體凈化。

不同的微生物具有不同的代謝類型，如好氧、厭氧、兼性厭氧等。要提高菌株的降解能力，合適的培養(yǎng)條件至關(guān)重要。環(huán)境中好氧微生物在充足的氧氣條件下能夠迅速生長，進(jìn)而提高降解效率。據(jù)已有的實(shí)際應(yīng)用可知，工業(yè)處理抗生素廢水時(shí)好氧微生物的使用更為廣泛。在試驗(yàn)中，三角瓶的裝液量與溶氧量成負(fù)相關(guān)，因此可從裝液量的多少間接反應(yīng)溶氧量的多少。從許曉玲［16］報(bào)道的兩株四環(huán)素降解菌的研究可見，隨著裝液量的增加，菌體的OD值下降，四環(huán)素的殘留量上升。無丙二酸檸檬酸桿菌是馬志強(qiáng)等人報(bào)道的一株四環(huán)素高效降解菌［23］，當(dāng)裝液量從50 mL上升到200 mL時(shí)，菌株對(duì)四環(huán)的降解率降低約50%。說明微生物在好氧條件下更容易發(fā)揮對(duì)四環(huán)素的降解作用。這與本試驗(yàn)菌株4002在好氧條件下的降解率好于厭氧和缺氧是相似的。無丙二酸檸檬酸桿菌在優(yōu)化條件下培養(yǎng)3 d，四環(huán)素的去除率可以達(dá)到86.1%。但該菌適宜的降解條件為：pH 5.5，溫度35℃。

有研究指出Fe2+具有很強(qiáng)的光敏化作用，可以加強(qiáng)抗生素在環(huán)境中的降解［24］。這可以解釋本試驗(yàn)在培養(yǎng)基中加入FeSO4后大大提高了四環(huán)素降解率的原因。與已報(bào)道的四環(huán)素降解菌Trichosporon mycotoxinivorans［25］相比，MnSO4的添加可以在一定程度上促進(jìn)四環(huán)素的降解，而MgSO4則對(duì)降解率影響較小的結(jié)果是一致的；但添加CaSO4的試驗(yàn)結(jié)果與本試驗(yàn)略有不同。這可能與不同菌株的生長對(duì)無機(jī)鹽的要求不同有關(guān)。郝文靜等［26］報(bào)道Advenella kashmirensis具有降解海洋石油的能力，但尚未見該種細(xì)菌能夠降解四環(huán)素的相關(guān)報(bào)道。菌株4002是一種新發(fā)現(xiàn)的能夠降解四環(huán)素的微生物資源，其溫和的pH及培養(yǎng)溫度顯示出該菌在自然環(huán)境下對(duì)抗生素廢水的處理具有實(shí)際的應(yīng)用前景和潛力。

4 結(jié)論

分離篩選到1株四環(huán)素降解菌株4002，經(jīng)鑒定為Advenella sp.。

pH、溶氧量及無機(jī)鹽對(duì)菌株4002降解四環(huán)素的能力有影響，其中無機(jī)鹽的種類對(duì)四環(huán)素降解影響顯著。該菌株在pH7.0、有氧培養(yǎng)的條件下對(duì)四環(huán)素的降解能力均好于同因素的其它條件，F(xiàn)eSO4和MnSO4的加入均促進(jìn)降解，MgSO4對(duì)降解影響不大，CaSO4對(duì)降解有一定的抑制作用。

培養(yǎng)8 d時(shí)，用HPLC分析可見在6.02 2min處出現(xiàn)了新的吸收峰，推測可能為菌株4002對(duì)四環(huán)素的降解產(chǎn)物。

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（責(zé)任編輯 李楠）

Isolation and Identification of A Tetracycline-degrading Bacterium and Optimizing Condition for Tetracycline Degradation

Zhang Xinyang Cai Tingjing Xu Xuping
（College of Life Sciences，F(xiàn)ujian Normal University，F(xiàn)uzhou 350108）

Tetracycline antibiotics have been widely used in the livestock industry， but its complex structure， difficult to degrade， easy to accumulate in the water environment and produce a far-reaching impact on the ecological environment， antibiotic pollution as an important environmental issues has expanded the related basic research. Microbial degradation of the environment antibiotic pollution in recent years become a hotspot method. The selective media was used to isolate and screen the tetracycline-degrading bacteria. A high efficiency tetracyclinedegrading bacterium（4002）was selected from sewage of a pharmaceutical factory. According to the morphological features， physiological and biochemical characteristics and the sequence analysis of 16S rDNA， the strain was identified as Advenella kashmirensi. Besides， the pH，dissolved oxygen， inorganic salts and other aspects of the strains were analyzied to study the degradation performance of tetracycline. The results showed that， the strain suitable conditions for the degradation of tetracycline are pH7.0， under aerobic condition， 150 r/min and cultured with shaking 6 d， the initial concentration of 50 μg/mL tetracycline degradation rate of 57.8%. FeSO4and MnSO4can promote degradation of tetracycline and little impact on MgSO4， but CaSO4can inhibit degradation. After cultured for 8 d， the culture solution by HPLC detection showed at 6.022 min emergence of a new absorption peak， which was speculated as the degradation product.

tetracycline-degrading strain；screening；identification；degradation performance

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.026

2014-06-18

福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2011J01150，2013J01123）

張欣陽，女，碩士研究生，研究方向：環(huán)境微生物；E-mail：xinyang.jun@gmail.com

許旭萍，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：微生物資源與環(huán)境微生物技術(shù)；E-mail：xuping@fjnu.edu.cn