長角血蜱性信息素成分的研究

胡玉紅，張 巖，靳 尚，劉敬澤

（河北師范大學生命科學學院，石家莊050024）

Berger[1]首次發現 2，6-二氯酚（2，6-DCP）為后溝類硬蜱中的吸引性信息素（attractant sex pheromone，ASP）成分，目前確定該成分至少在7屬18種硬蜱中存在[2-5].劉敬澤等[6]在長角血蜱（Haemaphysalis longicornis）雌蜱提取物中檢測到2，6-DCP，并研究了該成分在不同發育期的含量變化和生物學作用[6].2，6-DCP作為蜱類防治的藥物已有成功先例[7].

多年來，人們一直在尋找蜱類性信息素中是否還存在2，6-DCP以外的其他物質.Hanson等[8]在變異革蜱（Dermacentor variabilis）雌蜱提取物中鑒定出 2，4-DCP，同時確定2，4-DCP與2，6-DCP的含量比例為1∶9，該物質對雄蜱也具有吸引作用，且2，4-DCP可以作為 2，6-DCP 的替代物[9]，2，4-DCP 和 2，6-DCP 對變異革蜱吸血雄蜱、吸血若蜱具有相同的作用[10-11].迄今，僅在革蜱屬（Dermacentor）中有2，4-DCP的報道.

為闡明其他蜱種中是否存在2，4-DCP，分析該種性信息素成分在蜱類不同發育期的含量變化，本研究以長角血蜱為對象，對其雌蜱揮發性ASP的主要成分、生物學作用等進行了分析.

1 材料與方法

1.1 蜱的采集和喂養

長角血蜱采自河北省小五臺山國家自然保護區.饑餓的幼蜱、若蜱和成蜱均在兔耳上飽血，非寄生期在人工氣候箱中培養，培養溫度（26±1）℃，相對濕度75%，6 L（光照）∶18 D（黑暗）.不同發育期的雌蜱：饑餓期（未吸血）、剛吸血（吸血1 d）、吸血期（吸血 2～3 d）、交配期（吸血 3～5 d）、交配后（吸血 5～7 d）、飽血當天（吸血5～7 d），分別取材用于研究.

1.2 樣品制備

將不同發育期的成蜱20頭分別放入磨口玻璃管中，加入5.0 mL正己烷后，封緊玻璃管，置4℃下充分抽提2h，正己烷重提2次，每次30 min.濃縮定容至20μL，用于生物測定、色譜和質譜分析.

1.3 色譜條件

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱為OV-101毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.15μm），氣化室溫度和Fid檢測器溫度為280℃，柱溫為60℃（5 min），以10℃/min升溫至280℃，信號采集時間25 min，載氣為高純度氮氣.

1.3.2 質譜條件

色譜柱為DBS-MS毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.15μm），氣化室溫度和Fid檢測器溫度為280℃，柱溫為80℃（5 min），然后以10℃/min升溫至280℃，信號采集時間25 min，載氣為氦氣.掃描質量范圍為30～800 m/z，電子能量為 70 eV.

1.4 生物測定

①用蘸有正己烷的脫脂棉在剛開始吸血雌蜱的體表進行擦拭，上、下午各1次；②不做任何處理（作為空白對照）；③在①處理后連續3 d在雌蜱體表點滴正己烷，每天1μL（作為正己烷對照）；④在①處理后連續3 d點滴不同發育期雌蜱體表抽提物，每天1μL；⑤在（1）處理后連續3 d點滴標準樣品，分別為2，4-DCP（100 ng）、2，6-DCP（30 ng）和 2 種成分的混合物（100 ng的 2，4-DCP 和 30 ng的 2，6-DCP）.各處理組重復5次.

2 結果與討論

2.1 雌蜱不同發育期體表抽提物的生物學測定

長角血蜱的生殖行為在吸血3～5 d后進行.剛開始吸血的雌蜱經正己烷擦拭后生殖行為基本中止，施加不同發育期雌蜱的體表抽提物后，長角血蜱生殖行為的恢復程度如表1所示.

表1 不同發育期雌蜱體表抽提物對交配的影響Tab.1 Effects of extraction from the femaleh.longicornis at different physiological phases on mating behavior

由表1可以看出，從饑餓期開始，隨著雌蜱發育的成熟，體表抽提物作用于正己烷處理過的長角血蜱后，其完成生殖行為的百分率增大，交配期雌蜱的體表抽提物效果最好.

2.2 氣相色譜/質譜分析

根據不同發育期的雌蜱體表抽提物的生物測定結果，選取典型時期（交配期）樣品進行氣相色譜/質譜分析，結合2，4-DC與2，6-DCP標準樣品的保留時間和質譜特征.結果如圖1所示，可知保留時間9.90 min的成分為2，4-DCP，保留時間10.53 min的成分為2，6-DCP.

圖1 長角血蜱雌蜱交配期體表抽提物氣相色譜圖Fig.1 Gas chromatography of extraction from the body surfaceof mating femaleh.longicornis

2.3 標準樣品的生物測定

2，4-DCP與2，6-DCP標準品對交配成功率的效果如表2所示.由表2可以看出，未處理的雌蜱（空白對照）均可飽血，擦拭正己烷后的對照組的雌蜱交配成功率不足10%.雌蜱體表經正己烷擦拭后無法完成生殖行為，施加測試樣品后生殖行為得到不同程度的恢復.施加2，4-DCP的處理組飽血率接近70%；施加2，6-DCP的處理組飽血率略高于施加2，4-DCP的處理組，差異沒有統計學意義（p＞0.05）.2，4-DCP 與 2，6-DCP混合組分對飽血率的影響高于單獨施加其中的一種成分的影響，差異具有高度統計學意義（p＜0.01）.

表2 2，4-DCP和2，6-DCP對雌蜱交配的影響Tab.2 Effects of 2，4-DCP and 2，6-DCP on mating behavior of femaleh.longicornis

2.4 不同發育期雌蜱2，4-DCP與2，6-DCP分泌量的動態變化

通過外標法測定不同發育期時雌蜱的2，4-DCP與2，6-DCP分泌量，結果如表3所示.

表3 雌蜱不同發育期2，4-DCP和2，6-DCP分泌量的動態變化Tab.3 Dynam ic change of secretion level of 2，4-DCP and 2，6-DCPat different physidogical phases of femaleh.longicornis

由表3可以看出，饑餓期的雌蜱體表已經存在2，4-DCP 和 2，6-DCP；吸血開始后，2 種成分的分泌量都開始增加；交配期達到峰值，此后下降.在所有發育期，2種成分分泌量的比例關系基本保持一致.

3 結論

氣相色譜及氣質聯用分析結果表明，長角血蜱雌蜱所有發育期均可分泌2，4-DCP和2，6-DCP，并隨雌蜱發育期而變化，交配期達到高峰，高峰后分泌量又逐漸下降，這與劉敬澤等[12]用氣相色譜法在長角血蜱盾窩腺丙酮提取物中檢測的2，6-DCP含量動態變化基本吻合.不同發育期，雌蜱體表分泌2，4-DCP和2，6-DCP量的比例基本保持不變，約為3∶1，而Hanson等[8]報道的變異革蜱中該比例為1∶9，這說明不同蜱種間存在差異，可以實現種間識別的隔離.

根據硬蜱的交配行為，吸引性信息素由雌蜱在吸血后直至交配前不斷釋放，刺激并吸引性活動的雄蜱對雌蜱準確定位并完成交配行為.本研究證實長角血蜱中這2種成分的分泌量動態變化與交配行為相吻合，且均對交配行為的完成有顯著促進作用，因此可確定2，4-DCP和2，6-DCP均為性信息素成分，有關兩種成分的作用機制及其在蜱類防治中的應用尚需進一步研究.

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