蜱RNA干擾的不同方法與應用*

崔 杰 周金林

(中國農業科學院上海獸醫研究所，上海 200241)

蜱屬于節肢動物門(Arthropoda)、蛛形綱(Arachnida)、蜱螨目(Acarina)、蜱總科(Ixodoidea)，是常見的動物體表寄生蟲之一，具有復雜的生活史和高繁殖率，是一種重要的疾病傳播媒介，侵襲包括人在內多種宿主，廣泛分布于世界各地(周金林, 2004)。現代蜱研究已從蜱生物學性狀觀察發展到分子生物學領域，其中，RNA干擾技術得到廣泛應用。RNA干擾技術首先從秀麗線蟲研究中發現，Fire等(1998)用純化的雙鏈RNA特異性降解目的基因轉錄序列，在對目的基因沉默表達分析過程中提出RNA干擾概念。自此，RNA干擾技術成為最有效基因功能研究工具之一，迅速拓展到蟲媒研究領域。Aljamali等(2002)最早將RNA干擾技術應用于蜱研究，通過體外浸泡和體內注射雙鏈RNA的方法，干擾美洲花蜱Amblyommaamericanum的組胺結合蛋白基因。蜱研究中實現RNA干擾的關鍵在于雙鏈RNA的導入，已有多種RNA干擾方法得到成功應用，如顯微注射法、浸泡法、飼喂法、病毒轉染法和電轉染法等。通過生物信息學技術結合蜱生理學指標變化對目的基因沉默效果進行評價與分析，人們發現了蜱體多種新型生物活性分子，這些物質在蜱抗凝血和免疫抑制等生理過程中發揮重要作用，在新醫藥生物制劑開發研制，蜱及蜱傳疾病的防治等方面具有重要應用價值。本文就蜱RNA干擾方法及其適用性作一綜述，為進一步研究提供參考。

1 蜱體RNA干擾機制

RNA干擾是在基因序列轉錄時產生特異性沉默表達的現象。在蜱體內，一段雙鏈RNA進入蜱細胞后，經過一系列生化反應降解同源mRNA，調節相關編碼基因不能表達(Kurscheidetal., 2009)。……