奶牛環形泰勒蟲病的診斷

張文燕

（河北農業大學動物醫學院，河北保定070001）

奶牛環形泰勒蟲病的診斷

張文燕

（河北農業大學動物醫學院，河北保定070001）

1 前言

奶牛環形泰勒焦蟲病是由泰勒科泰勒屬的環形泰勒焦蟲引起的一種對牛危害嚴重的血液原蟲病。環形泰勒蟲病是一種地方性流行病，該病現在在南非和南歐非常流行，并通過中東、印度和俄羅斯南部傳到中國。在我國，該病主要流行于西北、華北和東北地區。在流行區，該病經殘緣璃眼蜱傳播。該病有明顯的季節性，從5月份開始，6～7月份達到高峰，8月份逐漸減少；在年齡方面，以6月齡至2歲的牛最為易感，若從非疫區引進的牛，不論年齡、體質，均可發病，且病情較為嚴重，死亡率亦極高。患病的幼牛帶蟲免疫可達2.5～6年。該病病原體經蜱傳給牛只后，在巨噬細胞、淋巴細胞、紅細胞內寄生，常引起以高熱、貧血、消瘦和體表淋巴結腫脹為主要特征的臨床癥狀。

近年來，奶牛環形泰勒蟲病的發病率呈上升趨勢，尤其是對改良的新品種以及外地引進的牛的危害更為嚴重，這嚴重影響了奶牛養殖業的發展。所以，對這種病進行診治研究是非常具有現實意義的。為此，對該病的防治進行了多方面研究，并研制出了牛環形泰勒焦蟲裂殖體膠凍細胞苗，對牛環形泰勒蟲病起到了控制作用，降低了經濟損失，但牛焦蟲細胞苗的保存期較短，難以推廣。

近年來，環形泰勒焦蟲病發病區未見縮小，反而隨著養牛場之間的引種呈擴大趨勢，該病對養牛業危害仍然很嚴重。若從根本上控制本病的發生和發展，應該一方面研究更為有效的疫苗來預防該病，另一方面應做好消滅傳播媒介（蜱）的工作。

本病診療工作，主要通過流行病學調查，結合臨床癥狀和病理變化特征，初步疑似為本病，最后實驗室檢查確診為牛環形泰勒焦蟲病。合理、科學診斷該病，將有助于該病及時治療和控制，同時也為養牛業預防和控制該病提供有益經驗。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 試劑

姬姆薩染液，配制方法如下：

取市售姬氏染色粉0.5克，中性甘油25.0毫升、無水中性甲醇25.0毫升先將姬氏染色粉置研缽中，加少量甘油充分研磨，再加再研磨，直到甘油全部加完為止。將其倒入60～100毫升容量的小口試劑瓶中，在研缽中加少量甲醇以沖洗甘油染液，沖洗液仍倒入上述瓶中，再加，再洗，再倒入，直至25.0毫升甲醇全部用完為止。塞緊瓶塞，充分搖勻，放置65℃溫箱24小時或室溫3～5天。并不斷搖動，此即為原液。染色時取原液2.0毫升至100毫升蒸餾水中，混勻即可用于染色。

2.1.2 培養基

鮮血瓊脂培養基，參照姚火春等方法，具體步驟如下：

稱取10克瓊脂，加到500毫升普通肉湯內，加熱煮沸，待瓊脂完全融化后，將PH調至7.4，再加熱煮沸20分鐘。用蒸餾水濕潤夾有薄層脫脂棉的紗布過濾，高壓蒸汽滅菌。

將滅菌的普通瓊脂培養基加熱融化，待冷卻至50℃左右，加入采自健康綿羊或家兔的脫纖無菌血液（每100毫升普通瓊脂加入鮮血5～6毫升），混勻后倒入滅菌平皿。待凝固后，置37℃培養24小時，無菌檢驗合格方可保存備用。

2.1.3 發病情況

本次病例來自一家養牛場，經場內工作人員介紹，先前發病及病死牛均經進行了血相檢測，發現無白細胞或白細胞明顯降低，紅細胞沉降系數正常。同時，該場按抗菌、解熱原則進行了治療，發病牛均用丁胺卡鈉和頭孢噻圬鈉等輸液治療，除一頭發病牛癥狀減輕外，其他牛病情無明顯改善，仍然精神沉郁，食欲廢絕，氣喘，最終以死亡為轉歸。

2.2 方法

2.2.1 流行病學調查

調查該場飼養規模，引種情況，發病及死亡情況，發病史等。

2.2.2 臨床癥狀觀察

觀察病牛精神，體溫，食欲，毛發，糞便，尿液狀況。

2.2.3 剖檢病變觀察

剖檢其中3頭病牛或病死牛，觀察其體表病變及內部臟器病變情況。

2.2.4 病原學檢查

細菌分離：用一次性真空采血管對病牛進行無菌采血，另取病死牛的肺、肝、腎、淋巴結等器官，無菌保存，對無菌采集的血液以及剖檢的實質性器官進行細菌分離，分別在血平板劃線和觸片，培養分離細菌。

血液原蟲檢查：取所采集的病牛血液及穿刺的淋巴液滴于載玻片上，用蓋玻片小心推片，制成涂片，干燥后滴加2～3滴甲醇到涂片上，使其固定后用姬姆薩氏液染色30分鐘左右，蒸餾水水洗，干燥后鏡檢。

淋巴內容物檢查：穿刺牛體表淋巴將淋巴內容物涂片，姬姆薩氏液染色后鏡檢。

3 結果

3.1 發病情況調查

該養殖場共飼養奶牛4000頭，其中有2000頭是由本場自繁自養的，其余2000頭是從外地牛場引進的，其中部分引進牛只來自東北地區。本次疫情中，發病牛均為本地牛，引進牛未見發病。發病10日左右共計死亡10頭。之前本場無該病的發病史。

3.2 臨床癥狀

病牛主要表現精神沉郁、食欲廢絕、被毛蓬亂、軀體消瘦，部分病牛神經癥狀明顯，呼吸急促，全身無力，行走搖擺，結膜貧血、黃染，尿液發黃，糞便呈黑色，鼻孔流清白黏液，有些牛鼻孔可見泥土，部分牛胸前或覆下水腫。早期體溫升高，到后期體溫不升高。

3.3 病理變化

剖檢可見，病牛全身皮下、肌間、黏膜和漿膜上均有大量的出血點和出血斑。全身淋巴結腫大，切面多汁，有暗紅色和灰白色大小不一的結節。胸腔內有大量的紅色滲出液，心肌有彌漫性出血點，心房有出血斑，心脂肪有出血點和出血斑，肺水腫和氣腫明顯且被膜有瘀血斑和出血斑肺門淋巴結腫大。瓣胃堅實難以剖開，皺胃黏膜腫脹，有許多針頭至黃豆大、暗紅色或黃白色的結節，結節部上皮細胞壞死后形成中央凹陷、邊緣不整有稍隆起的潰瘍病灶，胃黏膜脫落。脾臟明顯腫大，被膜上有出血點，脾髓質軟呈黑色糊狀。腎臟腫大、質軟，有粟粒大暗紅色病灶，外膜易剝離。肝臟腫大，質脆，色澤灰紅，被膜有多量出血點和出血斑，肝門淋巴結腫大，膽囊腫大黃染。血液稀薄呈淡紅色，不易凝固。

從圖1可知，明顯地可看出病死牛心臟脂肪有大小不等的出血；圖2可知，心肌出血點或出血斑；圖3可知，腸黏膜上有明顯的出血斑；圖4可知，胃壁上大小不等出血點。

圖1 心脂肪出血

3.4 病原學檢查結果

3.4.1 細菌分離

用血液和臟器作血平板劃線和觸片培養后，均未見有細菌生長，排除該病為細菌性疾病的可能性。

3.4.2 血液蟲體檢查結果

在對無菌采集的病牛作血液涂片后，采用姬姆薩染色，鏡檢發現其紅細胞內有多量小于紅細胞半徑的環形泰勒蟲病原體，細胞內蟲體呈梨形、環形或橢圓形。染色結果見圖5。

圖2 心肌出血

圖3 腸黏膜出血

圖4 胃壁出血

圖5 吉姆薩染色結果

3.4.3 淋巴結穿刺淋巴內容物涂片檢查結果

可見到淋巴細胞內有圓形、橢圓形的石榴體。

4 討論

4.1 診斷關鍵

該病與牛巴貝斯焦蟲、牛雙芽巴貝斯焦蟲在臨床癥狀和剖檢變化上較為相似，同時染色時應與附紅細胞體病原體作區別，以防出現誤診，延誤治療時機，造成大的經濟損失。在本次疾病診斷過程中，先根據流行病學調查、發病牛的臨床癥狀及剖檢病變作出初步推斷，確診本病需要進行病原學檢查，在對無菌采集的血液涂片進行姬姆薩染色后，鏡檢發現紅細胞內有多量小于紅細胞半徑的環形泰勒蟲病原體，從而確診為本病。雖然在本次疫情中，有部分癥狀及病變與某些細菌性疾病及牛巴貝斯焦蟲、牛雙芽巴貝斯焦蟲病相似，本人在實驗室病原學檢查過程中，細菌分離培養未見有細菌生長，可排除細菌性疾病的可能性。

診斷牛環形泰勒蟲病還應注意與牛雙芽巴貝斯蟲病相區別。有些獸醫工作者常把可視黏膜黃染、出血、有血紅蛋白尿作為診斷牛環形泰勒蟲病的臨床依據。牛感染泰勒蟲發病時，可視黏膜常表現貧血和出血，這是由于蟲體在網狀內皮系統內進行大量無性繁殖抑制了造血功能，導致紅細胞發育不良、增生緩慢而引起的，再加上毒素對組織器官的破壞作用，致使血管壁通透性增強，發生出血斑塊。當蟲體進入紅細胞后，一般不再進行裂體繁殖，所以對紅細胞的溶血和破壞作用都遠比雙芽巴貝斯蟲小，故臨床上很少能見到可視黏膜黃染和血紅蛋白尿。當牛患雙芽巴貝斯蟲病時，由于蟲體在紅細胞內以成對出牙的生殖方式進行無性繁殖，蟲體對紅細胞的大量破壞引起溶血性貧血，此時血紅蛋白轉變成膽紅素滯留于血液中引起黃疸，可視黏膜被黃染，當一部分血紅蛋白隨尿液排出時，則出現血紅蛋白尿。因此，臨床可視黏膜黃染程度、血紅蛋白尿的有無是區別泰勒蟲病和雙芽巴貝斯蟲病的重要依據。對附紅細胞體鏡檢時，可見紅細胞邊緣不整齊，呈菜花狀或星狀，紅細胞表面有許多圓形、橢圓形紫紅色蟲體，折光性較強，寄生在紅細胞表面還可寄生在血漿中，且姬姆薩染色中變形體較為常見。另外，80％以上附紅細胞體寄生于紅細胞邊緣，圓形，邊緣整齊。一個紅細胞可以附著1～16個蟲體，甚至更多，個體較小，0.3～0.8微米。當它在繁殖階段時，蟲體呈多樣性，有圓形、三角形等，但在帶蟲階段一般呈圓形。

4.2 帶蟲免疫

牛只建立焦蟲病帶蟲免疫后，即意味著這些牛發生焦蟲病的可能性已顯著降低，但建立帶蟲免疫功能時，必須嚴格控制焦蟲病的感染率。因為牛感染焦蟲過多即使不發病也會影響牛的生長發育及引起皮炎，同時也會引發其他疾病的發生，所以在建立帶蟲免疫功能的過程中，應密切注意牛只的感染狀態。

4.3 流行要素

焦蟲病在我國主要流行于西北、華北和東北地區。構成該病流行的基本要素有三種，即病原體（焦蟲）、硬蜱和易感動物，三者形成一個流行的鏈環，缺少其中任何一個因素就不可能有焦蟲病的發生和流行。鑒于該病危害性大治愈率低且無特效藥，因此，主要應采取綜合措施防制該病的發生。

焦蟲病原是該病流行的重要因素之一，在對該奶牛場進行問診時發現，該場4000頭奶牛中除2000頭是自繁自養外，還有部分是從東北某牛場引進的，我國東北是焦蟲病主要發病區，上述外來牛可能成為本病重要傳染源之一。但該場在引進時又未做嚴格的隔離觀察及相關檢查，引入病牛或傳播媒介（蜱），引發了本次疾病的發生。由于外地牛生存于該病原體的環境中，對其有一定的耐受性或帶蟲免疫能力，而本地牛卻未曾接觸過該病原，對病原體較為敏感，因此，本次疫情發病牛主要為本地牛。由此可見，應加強檢疫，嚴格控制牛只調動，以防本病。若確需引進牛只，應選擇蜱不在牛體活動的時期進行，應從非疫區引進，且對引進的牛只進行隔離觀察及作相應檢查后再合群。

本病的發生還與畜主對蜱等吸血昆蟲的危害性認識不清，對消滅奶牛場的各種寄生蟲重視不夠。任蜱等吸血昆蟲在該奶牛場生長、傳播有關。要消滅牛環形泰勒焦蟲病，預防的關鍵是在滅蜱。應根據當地蜱的活動規律和生活習性，制定滅蜱措施，嚴格執行，并要始終堅持防重于治。在發病季節，每隔15～20天，用辛硫磷澆潑劑，經自來水500倍稀釋后，噴霧牛體、牛舍、牛床及周圍環境等處滅蜱。同時，配合使用伊維菌素散劑按0.2毫克/千克體重拌料口服，每月1次，進行滅蜱，尤其在蜱蟲活動季節，需嚴防蜱和吸血昆蟲對牛體叮咬而傳播疾病。

4.4 綜合防治

藥物預防可用血蟲凈（主要成分：三氮脒）按5毫克/千克體重，配制成5％的溶液，每隔20天給牛注射1次，還可用咪唑苯脲進行肌肉注射預防，用量為2毫克/千克，這種方法可有效杜絕該病發生和傳播。

近些年來，經過科研工作人員的努力，已經研制出了牛環形泰勒焦蟲裂殖體膠凍細胞苗，在疫區對新購進的尚未感染焦蟲的牛只用抗焦蟲病疫苗進行預防，可起到一定的保護作用。盡管孫世榮等（2000）報道，牛環形泰勒蟲裂殖體膠凍苗有較好的預防效果，但疫苗保存期較短，其使用仍難以推廣，各科研單位及個人還需繼續研究延長細胞苗保存期的方法，進一步擴大成果的推廣應用。此外，在威脅地區的牛群可因不斷受到蜱的侵襲（可人工接種），部分牛只可能成為長期帶蟲者，故產生長期帶蟲免疫。因此，在老疫區若不能完根除焦蟲病，可使牛群經常帶蟲或感染牛蜱，并使之有一定的免疫能力，但需用抗焦蟲藥物來控制感染的數量和程度。

加強飼養管理，要注意放牧環境，認真搞好畜舍內外衛生，在蜱活動季節及時滅蜱。在發病季節到來之前，牧區放牧避免牛群到蜱大量孳生的牧場上放牧，清除牛舍周圍雜草，噴灑滅蜱藥物。

總之，在奶牛環形泰勒焦蟲病的防治過程中，應貫徹“防治結合、防重于治”的方針，做好預防工作。根據牛場疾病的發病季節及當地傳播者生活習性等地域特征制定一整套防治措施。這樣，不僅可以降低奶牛環形泰勒焦蟲病的發病率，同時也是降低飼養成本、減少飼養風險的最經濟，最有效的方法。另外，近幾年焦蟲和附紅細胞體及細菌類等混合感染的病例比較多，所產生的臨床癥狀及病變自然也會有交叉，因此，我們在診斷病情時要綜合考慮，不能只看到其中一種，而忽視另外病因，耽誤治療。