解析刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質譜聯用技術

王鑫（江蘇大學，江蘇鎮江 212013）

解析刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質譜聯用技術

王鑫（江蘇大學，江蘇鎮江 212013）

本文主要分析刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質譜聯用技術，利用乙腈-水和安捷倫Zorbax SB柱作為基本流動相，以此來合理分離刺槐花中存在成分。

刺槐花具有一定藥用價值和食用價值，經過多年來的分析和研究，發現刺槐花的藥理和化學成分，其中存在一定量的黃酮類化合。在分析刺槐花中存在的實際黃酮類成分的時候合理利用高效液相色譜-質譜聯用技術，分析和研究11中刺槐花黃酮類成分，這種方式可靠、方便、簡單、具有一定應用價值。

1 儀器和試藥

安捷倫1100型液相色譜儀，主要構成就是高性能自動進樣器、二元泵、G1315B二極管檢測器、在線脫氣機，并且還需要配備一定的Qualitativenalysis質譜分析軟件、MassHunter色譜工作站、電噴霧離子源等設備，采集某區域內部的刺槐花，使用的試藥是通過某醫院提供的刺槐苷，水是純凈水、乙腈是色譜純，其他試劑都屬于分析純［1］。

2 方法

2.1 供試品溶液制備

精密稱定20g刺槐花鮮品，放置在帶塞子的錐形瓶中，精密加入250ml70%的乙醇，進行一定密塞，并且三十分鐘超聲提取三次，過濾以后合理合并濾液，利用石油醚進行脫脂，適量水熱容，提出正丁醇，回收提取液直到干，利用50mL甲醇來溶解提取物。

2.2 色譜及質譜條件

2.2.1 液相色譜條件

流動相是0.1%的醋酸和乙腈，（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱Agilent Zorbax SBAq C18，B相是0.1醋酸，A相是乙腈，通過梯度洗脫?；具^程是：5%-20%A、0-30min，20%-45%A、30-6min，45%-60%A、60-80min，10μL進樣量。25℃柱溫、1.0 mL/min流速。

2.2.2 ESI質譜條件

ESI質譜條件是利用ESI離子源，在具備正離子的基礎上，3：1的柱后分流比，基本參數是：40psi霧化氣壓力、350℃干燥氣溫度、10mL/min干燥氣流速、4000V毛細管電壓，選擇200V和120V的碎片電壓，掃描質量的范圍m/z是100-1000，參比離子m/z是922.0097和121.0508.

3 結果和討論

3.1 實驗條件優化

刺槐花中最基本的成分是黃酮類，為確保具備比較良好的峰形，流動相中適當加入冰醋酸，為具有較好重現性的總離子流圖，在配置流動相時，需控制冰醋酸質量分為0.1%，同時，利用正離子來掃描質譜檢測進行實驗。

3.2 刺槐花中化學成分的鑒別

刺槐花中提取的黃酮類成分典型液相圖如圖所示：發現當檢測具有多于23個峰的時候，合理鑒別11個峰，對比分析物質的質譜圖和保留時間，發現4峰是屬于刺槐苷，峰3-7、1出現類似的紫外光譜，有機結合相同的（m/z=287，［苷元+H］+）苷元離子峰和質譜二級裂解，其中都具備山奈酚的糖苷。1峰適當脫去相應的質量分數為146的鼠李糖結構碎片，經鑒定，這種化合物中具備山奈酚-3-0-α-L-鼠李糖苷，經分析峰4以及6的分子離子峰發現都屬于三糖苷，其中4峰是屬于刺槐苷，也就是說刺槐花中具備黃酮苷含量最高，主要就是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷；峰5具有類似于峰4的解列碎片和相對分子質量，反向可能存在不一樣的糖基，峰6包含的是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。在反相柱上，相比較于葡糖糖基糖苷，半乳糖基的糖苷會先出峰，通過分析，峰7、5、3，都屬于二糖苷，但是峰3和峰7具有不相同的裂解形式，峰3以及峰5會先脫掉質量分數為162的六碳糖結構碎片。但是峰7會先脫掉146質量分數的鼠李糖結構碎片。在山奈酚的3，7-二氧糖苷的前提下，峰5和峰3屬于奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷以及山奈酚-3-O-β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷，峰7就不相同，屬于山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖。此外，峰8-峰11也會形成一定的紫外光譜，經過質譜二級解列，可以得到具備相同m/z=285的苷元離子峰，因此，都屬于刺槐素的糖苷，合理分析山奈酚糖苷，可以發現實際包括刺槐素-7-O-β-D-木糖基（1→2）-［α-L-鼠李糖基（1→6）］-β-D-葡萄糖苷和刺槐素-7-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-β-D-葡萄糖基（1→2）-［α-L-鼠李糖基（1→6）］-β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-半乳糖苷；另外峰2具有m/z=303的苷元離子峰，有機結合質譜數據以及紫外數據，經鑒定，屬于槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。

圖1 提取刺槐花液相圖

4 結語

綜上，依據HPLC-DAD-ESI-MS/MS技術，有機集合碎片離子技術和紫外線數據分析，鑒別和分析黃酮苷類化學成分，可確定出11種成分，此檢測方式，十分靈敏、快速、準確、高精度，是一種有效控制刺槐花成分的方式。

［1］王嵐，王雪芹，仲浩等.刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質譜聯用技術分析［J］.食品與藥品，2013（4）：240-241，242.