大黃素在結腸靶向護腸清毒微丸中的體外釋放研究

馬傳江，孫　萍，劉樂洋

（1.山東中醫藥大學附屬醫院，山東　濟南　250011；2.山東中醫藥大學，山東　濟南　250355）

大黃素在結腸靶向護腸清毒微丸中的體外釋放研究

馬傳江1，孫萍1，劉樂洋2

（1.山東中醫藥大學附屬醫院，山東濟南250011；2.山東中醫藥大學，山東濟南250355）

目的建立高效液相色譜法測定護腸清毒微丸中大黃素含量方法，探討微丸中大黃素的體外釋放特性。方法以甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20）為流動相，檢測波長為254 nm，Phenomenex C18（4.6mm×150 mm，10 μm）為分析柱，采用恒溫振蕩法考察微丸中大黃素的體外釋放規律。結果微丸在人工胃液的2 h中，幾乎無釋放；在人工腸液中5 min后可以檢出，40 min內釋藥達到80％，至220 min幾乎全部釋放。結論所制備的微丸具有結腸靶向的作用。

護腸清毒；微丸；大黃素；結腸靶向；體外釋放

1　試藥與儀器

1.1儀器 Waters600高效液相色譜儀；高壓微射流納米均質機（美國Microfludics公司）；D800C智能藥物溶出儀（天津大學無線電廠）；85B-2型磁力加熱攪拌器（南通科學儀器廠）；Biofuge Stratos全能臺式高速冷凍離心機（德國Heraeus公司）。

1.2試藥大黃素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110756-200110）；護腸清毒微丸（自制，批號：20100314、20100316、20100318）；果膠鈣（鄭州鄭亞化工產品有限公司）；聚丙烯酸樹脂（MCC）S100型（德國Rohm公司）。

2　方法與結果

2.1微丸的制備［5］采用水煎煮提取，將藥液經噴霧干燥得藥粉。以低脂果膠與氯化鈣制備果膠鈣，超微粉碎，備用。將果膠鈣、藥粉和MCC按一定比例混合，加入粘合劑制成軟材，經擠出-滾圓機擠出軟材，高速滾圓微丸丸芯，采用聚丙烯酸樹脂S100型［4］，pH 6.8～7.4，腸溶包衣材料進行包衣，既得結腸靶向控釋微丸。

2.2體外釋放規律考察

2.2.1試驗方法分別精密稱取3批微丸，以藥粉制得的膠囊劑作為對照，采用恒溫振蕩法，于pH= 6.8的人工腸液和pH=2的人工胃液（2 h）各1 000 mL中，水浴溫度（37±0.5）℃，轉速100 rpm，分別于不同時間吸取溶液1 mL，經0.22 μm微孔濾膜過濾后測定含量，同時補加同體積同溫度人工腸液或人工胃液，由于大黃素的水溶性較差，為增強其溶出度和檢測性，在人工胃液和人工腸液中添加0.5％的十二烷基硫酸鈉，以大黃素累計釋放百分率計算［5］。

2.2.2色譜條件流動相：甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20），色譜柱：Phenomenex C18柱（4.6mm× 250 mm，10 μm），流速：0.8mL·min-1，檢測波長：254 nm。

2.2.3溶液的制備對照品溶液的制備：精密稱取大黃素對照品適量，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成含大黃素77.20 μg·mL-1的溶液作為對照品儲備液。

供試品溶液的制備：精密吸取釋放溶液1 mL，經0.22 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

陰性對照溶液的制備：取不含大黃的處方藥材，同法制備缺大黃陰性對照液。

2.2.4檢測波長的選擇參照《中國藥典》2015年版大黃項下，選擇254 nm作為檢測波長。

2.2.5專屬性試驗取對照品、供試品和陰性對照溶液各10 μL，進行樣品測定，樣品與對照品在相同的保留時間內有相同的色譜峰，而陰性對照品無此色譜峰，表明測定無干擾。圖譜見圖1。

2.2.6標準曲線的制備分別精密量取對照品儲備液0.1、0.3、0.5、1 mL于10 mL容量瓶中，再精密量取對照品儲備液0.1mL至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，進樣，分別測定峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣濃度為橫坐標，線性回歸后得A=76 825C +3 567.8，r=0.999 4（n=5）。大黃素在0.308 8～7.72 μg·mL-1濃度范圍內線性關系良好。

2.2.7精密度試驗取濃度為1.00 μg·mL-1的對照品溶液，重復進樣5次，結果RSD為1.63％，表明儀器精密度良好。

2.2.8穩定性試驗取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12 h進樣，測定峰面積，計算RSD值為2.90％，表明樣品穩定性良好。

圖1　高效液相色譜法測定微丸中大黃素的含量

2.2.9重復性試驗精密量取樣品5份，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，然后測定峰面積，RSD 為1.4％，重復性良好。

2.2.10回收率試驗精密稱取樣品6份，依次加入對照品，按供試品溶液制備方法進行測定。每份進樣10 mL。回收率范圍：95.34％～104.20％，RSD 為3.28％，回收率良好，結果見表1。

表1　大黃素的加樣回收率試驗結果

2.3溶出度結果 檢測溶出液中大黃素的含量比例，確定藥品的溶出速率。以大黃素含量穩定不增加作為藥物全部溶出的標準，計為100％，其他時間點的藥物含量與最大含量的比值，即為藥物累積釋放率。結果見表2、圖2。

試驗結果顯示，普通膠囊劑在藥物釋放過程中，在人工胃液（含0.5％十二烷基硫酸鈉）中正常釋放，80 min后全部釋放。而微丸劑型，在人工胃液的2 h中，測不到大黃素含量。而將微丸轉移到人工腸液中后，5 min后可以檢出，40 min內釋藥達到80％，至220 min幾乎全部釋放完畢。

表2　溶出結果表

圖2　護腸清毒微丸樣品和膠囊樣品中大黃素的溶出曲線

3　討論

本文對自制的護腸清毒微丸中主要有效成分大黃素的體外溶出度進行了考察。試驗結果表明，將中藥經過提取干燥后加入果膠鈣，制備成結腸靶向控釋包衣微丸，因為聚丙烯酸樹脂包衣材料只溶于人工腸液，在人工胃液的2 h中，檢測不到藥物釋放。在2 h后，藥物從胃排到腸道中，包衣材料在人工腸液中可以較快溶解，使丸芯暴露在溶液中。果膠鈣遇水溶脹，從而形成骨架結構［6］，給藥物溶出提供溶出通道。微丸中所含大黃素在人工腸液中40 min內釋藥可達到80％，220 min幾乎全部釋放，且溶出速率穩定，釋藥曲線平滑，具有結腸定位釋放的效果。

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Study on release rate in vitro of emodion in colon targeting Huchangqingdu Pellets

MA Chuan-jiang1，SUN Ping1，LIU Le-yang2
（1.The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China；
2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of emodin in Huchangqingdu Pellets，and to study its release rate in vitro.Methods HPLC method was adopted on Phenomenex C18column with the mobile phase of methanol-0.1％acetic acid（80∶20）.The detection wavelength was 254 nm.The release rule in vitro was studied by temperature oscillation.Results The pellets almost had no release in artificial gastric juice in 2 h，and can be detected after 5 minutes in artificial intestinal juice，and reached 80％of drug release in 40 minutes，and almost all of the release in 220 minutes.Conclusion The pellets had colon targeting effect.

Huchangqingdu；Pellets；Emodin；Colon targeting；Release rate in vitro護腸清毒湯由大黃、赤芍、紫草、黃芩等10味中藥水煎提取而成，經臨床實踐證明，具有健脾清腸、化瘀解毒的功效，作用于肝病和腸源性內毒素血癥療效顯著［1，2］。但傳統湯劑服用量大，服用和攜帶不方便，且口服易在小腸部位吸收，到達結腸的藥物很少，影響療效。為使藥物在結腸部位直接釋藥，減少服用量，增加療效，我們將湯劑進行改造，加入果膠鈣，制備結腸靶向控釋微丸［3，4］，并對其主要有效成分大黃素的體外釋藥規律進行了探索。

R945

A

2095-5375（2015）12-0696-003

山東省中醫藥科技發展計劃項目（No.2007-035）

馬傳江，男，副主任藥師，研究方向：中藥制劑及飲片質量標準研究，E-mail：mcj77777@126.com