紫外分光光度法和酸堿滴定法測定復方制劑鎮痛靈中烏頭總堿含量的比較

姚閩 汪軍

（江西省藥物研究所 南昌330029）

含烏頭類生物堿的中藥主要有川烏、草烏、附子等。這些中藥中的烏頭堿類生物堿是其鎮痛作用的主要有效成分，具有很強的抗炎鎮痛活性，同時具有較強的毒性，起效劑量和中毒劑量非常接近，臨床應用這類中藥時，除經炮制降低其毒性外，還應嚴格控制其用量來預防這類藥物中毒事件的發生。因此，研究含烏頭類生物堿的中藥在中藥復方制劑中的含量測定方法彰顯必要。本實驗中研究的對象鎮痛靈制劑是由醫院制劑原生痛膠囊根據中醫學理論，結合臨床實踐，予以加減化裁而成的中藥復方制劑，由制川烏、延胡索、胡椒、白芍等中藥組成，其中含烏頭類生物堿的中藥制川烏辛溫，通行十二經，溫陽祛寒，除濕化瘀，故破積聚，溫經止痛。本文比較不同的含量測定方法對其制劑中烏頭總生物堿含量測定的差異，確定最優方法，為含烏頭類生物堿藥材的中藥復方制劑中烏頭總堿的含量評價提供參考。

1 儀器與試藥

U-3000型紫外-可見分光光度計（日本日立公司）；電子分析天平 AE-240；精密 pH 計（PHS-3S）；超聲機（KQ-250VDB型雙頻數顯）。乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸水。烏頭堿對照品：購自中國藥品生物制品檢定所（0844-20003，供含量測定用）。鎮痛靈顆粒：自制。

2 實驗方法與結果

分別采用紫外分光光度法考察樣品取樣量與吸光度之間的相關性和采用酸堿滴定法考察樣品取樣量與滴定液消耗量的相關性，以比較紫外分光光度法和酸堿滴定法在測定烏頭總堿含量方面的特點。

2.1 紫外分光光度法[1]

2.1.1 標準曲線的制備 精密稱取烏頭堿對照品5mg，置50 ml量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每1 ml中含烏頭堿0.1mg），精密吸取對照品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置分液漏斗中，依次精密加入氯仿至20 ml，再精密加入pH3.0醋酸鹽緩沖液（稱取無水醋酸鈉0.15 g，加水使溶解，加冰醋酸5.6 ml，用水稀釋至500 ml，搖勻，并在pH計上校正）20 ml和0.1%溴甲酚綠溶液（取溴甲酚綠0.2 g，加0.05 mol/L氫氧化鈉溶液3.2 ml使溶解，用水稀釋至200 ml，搖勻）2 ml，強力振搖 5 min，靜置 20 min，分取氯仿層，用干燥濾紙濾過，同時制備空白對照，濾液分別在412 nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標，對照品量（mg）為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=1.321X+0.211 5，R2=0.995 5。結果表明：烏頭堿在0.1～0.5 mg范圍內線性關系良好。

表1 標準曲線結果

2.1.2 測定法 取鎮痛靈干膏粉（批號：20070326）適量，研細，分別取 1 g、2 g、3 g、4 g、5 g（各 2 份），精密稱定，放入三角瓶內，加乙醚∶氯仿∶無水乙醇（16∶8∶1）的混合液25 ml和氨試液1.5 ml，搖勻，放置24 h，取出后于振蕩器上振搖5 min，取出靜置，過濾，殘渣用混合液洗3次，合并濾液，濾液水浴蒸干，用乙醚50 ml溶解轉移至分液漏斗中，用0.05 mol/L硫酸溶液萃取4次（每次10 ml），分取硫酸層，過濾，合并濾液。置另一分液漏斗中，加濃氨4 ml，搖勻，用氯仿提取 4 次（20 ml、20 ml、10 ml、10 ml），分取氯仿層，濾過合并濾液，蒸干。殘渣于105℃烘1 h，取出放冷，加pH3.0的NaAc-HAc緩沖液溶解，轉移并定容至25 ml容量瓶中，備用。精密吸取供試品溶液20 ml于分液漏斗中，精密加入氯仿20 ml和0.1%溴甲酚綠溶液2 ml，振搖5 min，靜置20 min，分取氯仿層，依法測定吸收度，記錄，以浸膏量和吸收度的均值做相關性分析，即得。

2.2 酸堿滴定法[2]精密稱取鎮痛靈浸膏（批號：20070326）1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、3.0 g、3.5 g，每個重量稱取2份，分別置于三角燒瓶中，加入乙醚∶氯仿（3∶1）混合液 30 ml和氨試液 3 ml，搖勻，放置過夜。取出，過濾，殘渣加乙醚∶氯仿（3∶1）混合液20 ml，振蕩1 h，過濾，殘渣用混合液洗2次，每次10 ml，合并濾液，置水浴中蒸干，用混合液溶解，蒸干，用5 ml無水乙醇溶解，并轉移至25 ml容量瓶中，精密加入0.01 mol/L硫酸滴定液10 ml，加水至刻度，放置20 min，濾過，精密吸取續濾液10 ml于小三角燒瓶中，加甲基紅指示液1滴，用0.02 mol/L濃度NaOH滴定液滴定至黃色，記錄所消耗的NaOH量，并換算成被反應硫酸滴定液的量，以浸膏量平均值與被反應硫酸滴定液量的均值做相關性分析，即得。

2.3 實驗結果

2.3.1 紫外分光光度法實驗結果 見表2。以浸膏量平均值（g）為橫坐標，以平均吸收度為縱坐標做相關性比較，得相關性方程為：Y=0.0107X+0.7153，R2=0.5947。

表2 紫外分光光度法實驗結果表

2.3.2 酸堿滴定法實驗結果 見表3。以浸膏量平均值（g）為橫坐標，以平均被反應硫酸滴定液的量（ml）為縱坐標做相關性比較，得相關方程為：Y=1.393 7X+0.564 6，R2=0.991 9。

表3 酸堿滴定法實驗結果表

3 討論

從上述兩種方法的比較結果來看，在中藥復方制劑中測定烏頭類總生物堿的含量，以酸堿滴定法更適合，樣品取樣量與消耗硫酸滴定液的量具有較好的相關性（R2=0.991 9），不同稱樣量所測樣品中烏頭類總生物堿含量重復性較好（RSD%=7.34%）。而使用紫外分光光度法測定鎮痛靈中烏頭總堿的含量，其取樣量和吸收度均值之間的相關性較差（R2=0.594 7），并且實驗操作復雜，誤差產生較大。這與相關文獻報道的結果相符合[3]。但是滴定法測定中藥復方制劑中烏頭類總生物堿的含量，受到其他成分的干擾，本次實驗中同時測定了陰性樣品消耗硫酸滴定液的量，通過該量計算出的烏頭類總生物堿含量為0.25%，約占所測得總浸膏中烏頭類總生物堿含量（2.09%）的十分之一，所以用酸堿滴定法測定中藥復方制劑樣品中烏頭類總生物堿含量的專屬性仍需要進一步研究。

[1]王蘇會.抗風濕顆粒的制備工藝及質量標準研究[D].北京:北京中醫藥大學,2005

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010年版一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010.111

[3]何軍,祝林,奉建芳.附子總生物堿含量測定方法比較[J].現代中藥研究與實踐,2003,17(6):20-21