半胱氨酸處理血清診斷布病試驗(yàn)

李雁萍

（山西畜牧獸醫(yī)學(xué)校030024）

半胱氨酸處理血清診斷布病試驗(yàn)

李雁萍

（山西畜牧獸醫(yī)學(xué)校030024）

近年來由于廣泛應(yīng)用布病病菌，對(duì)控制和消滅牛、羊布病起到了很好的效果。但是注苗后能刺激畜體產(chǎn)生凝集素，在進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)時(shí)，無法區(qū)別是自然感染還是免疫后的反應(yīng)，這給檢疫工作帶來很大困難。因此采用何種方法鑒別診斷是當(dāng)前迫切需要解決的問題。據(jù)報(bào)道，用半胱氨酸處理血清診斷布病效果很好。最近我們對(duì)重點(diǎn)地區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)縣個(gè)體養(yǎng)殖戶的奶牛和羊群作了試驗(yàn)，獲得了很好的效果，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）半胱氨酸：C3H7O2NS、分子量為121.15，一半胱氨酸鹽酸鹽C3H7NSO2HCl，分子量為157.61。

（2）氫氧化鈉：分子量為40。

（3）試管凝集反應(yīng)抗元、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗元及陰、陽(yáng)性血清。

（4）被檢血清：注苗后一年以上的奶牛、奶羊、綿羊血清和一少部分布病牛及免疫的羊血清。

（5）生理鹽水及10%鹽水等。

1.2 溶液配制

1N的氫氧化鈉溶液：稱取4g氫氧化鈉，加入100ml蒸餾水中放冰箱保存?zhèn)溆谩ＥR用前用蒸餾水稀

釋成0.4N的氫氧化鈉溶液。0.2M半胱氨酸：分子量為157.61的半胱氨酸，即稱取3.15mg溶于10ml0.4N氫氧化鈉溶液中。

1.3 處理血清的方法程序和制定標(biāo)準(zhǔn)

取1：5生理鹽水或10%鹽水稀釋的被檢牛、羊血清0.5ml與等量的0.2M半胱氨酸堿性溶液混合，放37℃溫箱中，30min后取出，用生理鹽水或10%鹽水連續(xù)稀釋血清，然后各管加入0.5ml試管凝集反應(yīng)抗原。混勻放37℃溫箱中18～20h后取出，在室溫下放置2h后，根據(jù)現(xiàn)行凝集反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 半胱氨酸凝集反應(yīng)結(jié)果

最近我們對(duì)歷年經(jīng)免疫的重點(diǎn)奶場(chǎng)的奶牛和疫情逐年下降的南郊區(qū)及疫情稍有上升的清徐縣部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)的奶羊和幾個(gè)重點(diǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖戶的羊群采血檢驗(yàn)結(jié)果見表1、2、3。

從以上結(jié)果來看，半胱氨酸凝集試驗(yàn)在查不同程度感染地區(qū)的牛羊群時(shí)，其結(jié)果是與疫情相吻合的，在疫情嚴(yán)重地區(qū)其羊經(jīng)過多次檢驗(yàn)為陽(yáng)性，未進(jìn)行免疫的牛，又如清徐縣6個(gè)鄉(xiāng)村均有陽(yáng)性反應(yīng)羊，而有病的3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽(yáng)性和疑性反應(yīng)羊，即占該縣反應(yīng)羊的93.68%。從7個(gè)重點(diǎn)大城看，有病情的4個(gè)鄉(xiāng)村即有陽(yáng)性和疑性反應(yīng)羊43只。占該縣反應(yīng)羊的45.26%。另外在3個(gè)鄉(xiāng)是布病暴發(fā)區(qū)經(jīng)過多年免疫和消毒，效果好又無病牛，所以基本是清凈的。

表1 奶牛半胱氨酸凝集反應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果

表2 羊半胱氨酸凝集反應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果

表3 重點(diǎn)郊區(qū)縣村羊反應(yīng)情況

2.2 半胱氨酸凝集反應(yīng)與其他血清學(xué)方法的比較

這次檢驗(yàn)中我們同時(shí)用試管凝集反應(yīng)，半胱氨酸試管凝集反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)3種方法進(jìn)行比較，結(jié)果見表4。

從表4的結(jié)果來看，這些經(jīng)過免疫的牛或羊有部分因連續(xù)多次免疫，機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期存在低滴度的凝集素，所以有些牛或羊凝集反應(yīng)表現(xiàn)為陽(yáng)性和疑性。而經(jīng)半胱氨酸處理過的血清作凝集反應(yīng)大部分趨于陰性，其中牛有41頭，羊有131只反應(yīng)為陽(yáng)性或疑性，同時(shí)還可以看出結(jié)果基本與補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是一致的，牛的符合率占64%，我們估計(jì)與這些牛的病程長(zhǎng)短有關(guān)。

表4 半胱氨酸凝集反應(yīng)與其他血清學(xué)方法比較

3 討論

（1）根據(jù)試驗(yàn)證明，半胱氨酸凝集反應(yīng)方法可以將牛、羊群中自然感染的布病牛、羊檢出，其結(jié)果與疫性也是相吻合的，所以筆者認(rèn)為半胱氨酸處理血清作凝集反應(yīng)，對(duì)診斷布病感染與免疫反應(yīng)有一定的價(jià)值。

（2）試驗(yàn)表明，凡半胱氨酸凝集反應(yīng)為陽(yáng)性凝集反應(yīng)均為陽(yáng)性。筆者認(rèn)為在大群羊檢疫時(shí)可以先用凝集反應(yīng)進(jìn)行一次篩檢，然后將陽(yáng)性反應(yīng)血清再用半胱氨基酸凝集反應(yīng)方法檢查。這樣可以節(jié)省人力、物力和時(shí)間。

（3）關(guān)于半胱氨酸凝集反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)和半胱酸凝集反應(yīng)對(duì)免疫后不同時(shí)期的羊血清的效果如何，還需進(jìn)一步進(jìn)行試驗(yàn)。